毛梗豨莶化学成分的研究

丁林芬， 王海垠， 王德升，2， 谢章巧，2， 聂 伟，2， 宋流东∗， 吴兴德

（1. 昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室， 云南 昆明 650500； 2. 中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室， 云南 昆明 650201）

豨莶草为菊科植物豨莶Siegesbeckia orientalis L.、 腺梗豨莶S． pubescens Makino 或毛梗 豨莶S．glabrescens Makino 的干燥地上部分， 别名肥猪草、肥猪菜、 粘苍子等， 其味辛、 苦， 性寒， 归肝、 肾经， 具有祛风湿、 利关节、 解毒的作用[1］。 毛梗豨莶作为其重要基源植物， 广泛分布于浙江、 福建、 安徽、 江西、 湖北、 湖南、 四川、 广东、 云南等省， 大多生长于路边、 旷野荒草地、 山坡灌丛中， 海拔300～1 000 m[2］， 具有抗肿瘤、 抗菌、 抗过敏等作用[3-6］， 但其化学成分研究仅报道少数黄酮类和萜类[7-8］。 为明确毛梗豨莶药效物质基础，本实验从其95%乙醇提取物中分离鉴定11 个化合物， 其中1～5 为二萜， 6 ～7 为倍半萜， 8 ～9 为黄酮， 10～11 为酚类化合物， 4 ～7、 10 为首次从该植物中分离得到。

1 材料

Avance Ⅲ500 MHz、 AM-400 MHz 核磁共振仪（TMS 为内标， 德国Bruker 公司）； 1290 UPLC／6540 Q-TOF 液质联用仪 （美国Agilent 公司）；Auto-Spec Premier P776 三扇型双聚焦磁质谱仪（美国Waters 公司）； 柱色谱硅胶 （100 ～200、200～300 目）、 GF254薄层色谱硅胶板（临沂市海洋化工厂）。 甲醇、 石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 丙酮等均为工业纯； 显色剂为10%H2SO4乙醇溶液。 毛梗豨莶于2015 年10 月购自昆明市菊花园中药材市场， 经中国科学院昆明植物研究所成晓副研究员鉴定为正品， 标本存放在昆明医科大学药学院（20151001s）。

2 提取与分离

干燥毛梗豨莶10 kg 粉碎后， 95% 乙醇提取（30 L×3 次， 每次2 d）， 合并提取液， 减压浓缩后得浸膏1.3 kg， 分散于水中， 乙酸乙酯萃取3 次（每次3 L）， 回收溶剂后， 得乙酸乙酯部分450 g，经硅胶柱层析 （100 ～200 目）， 用石油醚-丙酮（9 ∶1、 8 ∶2、 7 ∶3、 6 ∶4、 1 ∶1） 梯度洗脱，TLC 检测合并得Fr.1～Fr.7。 Fr.3 （3.5 g） 经石油醚-乙酸乙酯（100 ∶1～20 ∶1） 梯度洗脱， TLC 检测合并得Fr.3.1 ～Fr.3.7， Fr.3.3 （180 mg） 经硅胶柱层析及Sephadex LH-20 （氯仿-甲醇， 1 ∶1）得化合物4 （11 mg）、 6 （15 mg）； Fr.4 （80 g） 经中压液相色谱（MCI 柱）， 用甲醇-水（40 ∶60 ～100 ∶0） 梯度洗脱， TLC 检测合并得Fr.4.1 ～Fr.4.8， Fr.4.2 （190 mg） 经硅胶柱层析 （石油醚-乙酸乙酯， 10 ∶1） 及Sephadex LH-20 （氯仿-甲醇， 1 ∶1） 得化合物2 （17 mg）、 7 （9 mg）、 10（12 mg）； Fr.4.5 （315 mg） 经硅胶柱层析， 用氯仿-丙酮（200 ∶1）、 石油醚-异丙醇 （100 ∶1 ～20 ∶1） 洗脱， 得化合物3 （6 mg）、 8 （13 mg）、11 （9 mg）； Fr.6 （36 g） 经硅胶柱层析， 用石油醚-乙酸乙酯（8.5 ∶1.5 ～6 ∶4） 洗脱， TLC 检测合并得Fr.6.1 ～Fr.6.3， Fr.6.2 （650 mg） 经硅胶柱层析， 用氯仿-丙酮（50 ∶1）、 石油醚-异丙醇（80 ∶1～20 ∶1） 洗脱， 得化合物1 （7 mg）、 5 （11 mg）、 9 （5 mg）。

3 结构鉴定

化合物1： 白色粉末， ESI-MS m／z： 361.2[M＋Na］＋。1H-NMR （500 MHz， CDCl3＋CD3OD） δ：3.68 （1H， m， H-2）， 5.04 （1H， s， H-14）， 3.21（1H， dd， J=9.0， 1.9 Hz， H-15）， 3.48 （1H， dd，J=11.0，9.0 Hz，H-16a），3.39 （1H，dd，J=11.0，1.9 Hz， H-16b）， 0.80 （3H， s， H-17）， 0.93 （3H，s， H-18）， 3.61 （2H， ABq， J=11.3 Hz， H-19），0.68 （3H， s， H-20）；13C-NMR （125 MHz， CDCl3＋CD3OD） δ：47.3 （C-1），64.2 （C-2），43.7 （C-3），39.3 （C-4）， 55.0 （C-5）， 21.9 （C-6）， 36.1 （C-7）， 138.4 （C-8），50.8 （C-9），40.3 （C-10），18.4（C-11）， 31.7 （C-12）， 37.1 （C-13）， 128.3 （C-14）， 75.9 （C-15）， 63.1 （C-16）， 22.5 （C-17），27.1 （C-18）， 64.7 （C-19）， 16.6 （C-20）。 数据与文献[9］ 一致， 鉴定为奇任醇。

化合物2： 白色粉末， ESI-MS m／z： 345.2[M＋Na］＋， 361.2 [M ＋K］＋。1H-NMR （500 MHz，CDCl3） δ： 3.24 （1H， dd， J=11.2， 4.7 Hz， H-3），5.10 （1H， s， H-14）， 3.58 （1H， d， J=9.1 Hz， H-15）， 3.71 （1H， d， J = 11.2 Hz， H-16a）， 3.51（1H， dd， J=11.2，9.1 Hz， H-16b），0.88 （3H， s，H-17），1.00 （3H，s，H-18），0.81 （3H，s，H-19），0.76 （3H， s， H-20）；13C-NMR （125 MHz， CDCl3）δ：37.1 （C-1），27.6 （C-2），79.1 （C-3），38.9 （C-4）， 54.2 （C-5）， 22.2 （C-6）， 35.9 （C-7）， 139.7（C-8）， 50.4 （C-9）， 38.1 （C-10）， 18.4 （C-11），31.6 （C-12）， 37.3 （C-13）， 127.4 （C-14）， 76.5（C-15）， 63.4 （C-16）， 23.2 （C-17）， 28.5 （C-18）， 14.8 （C-19）， 15.7 （C-20）。 数据与文献[10-11］ 一致， 鉴定为豨莶精醇。

化合物3： 白色粉末， ESI-MS m／z： 401.3[M＋Na］＋。1H-NMR （500 MHz， CDCl3） δ： 3.80（1H， m， H-2）， 5.05 （1H， s， H-14）， 3.98 （1H，t， J=7.1 Hz， H-15）， 3.87 （1H， t， J=7.1 Hz， H-16a）， 3.73 （1H， t， J = 7.1 Hz， H-16b）， 0.88（3H， s， H-17）， 1.03 （3H， s， H-18）， 3.68 （1H，d， J=11.4 Hz， H-19a），3.30 （1H， d， J=11.4 Hz，H-19b）， 0.78 （3H， s， H-20）， 1.38 （3H， s， H-22）， 1.32 （3H， s， H-23）；13C-NMR （125 MHz，CDCl3） δ： 47.9 （C-1）， 65.2 （C-2）， 44.1 （C-3），39.7 （C-4）， 55.1 （C-5）， 22.0 （C-6）， 36.2 （C-7）， 138.9 （C-8），50.5 （C-9），40.5 （C-10），18.5（C-11）， 31.9 （C-12）， 35.8 （C-13）， 127.5 （C-14）， 79.8 （C-15）， 65.3 （C-16）， 22.5 （C-17），27.3 （C-18）， 64.6 （C-19）， 17.0 （C-20）， 108.6（C-21）， 26.3 （C-22）， 25.3 （C-23）。 数据与文献[12］ 一致， 鉴定为isopropylidenkirenol。

化合物4： 白色粉末， EI-MS m／z： 83 （30），101 （100）， 135 （31）， 261 （61）， 276 （52）， 316（25）， 362 （28） [M］＋。1H-NMR （500 MHz，CDCl3） δ： 3.26 （1H， dd， J=11.7， 4.0 Hz， H-3），5.06 （1H， s， H-14）， 4.02 （1H， t， J=7.2 Hz， H-15）， 3.89 （1H， t， J=7.2 Hz， H-16a）， 3.74 （1H，t， J=7.2 Hz， H-16b）， 0.90 （3H， s， H-17）， 1.01（3H， s， H-18）， 0.81 （3H， s， H-19）， 0.76 （3H，s， H-20）， 1.40 （3H， s， H-22）， 1.34 （3H， s， H-23）；13C-NMR （125 MHz， CDCl3） δ： 37.1 （C-1），27.6 （C-2）， 79.1 （C-3）， 38.2 （C-4）， 54.2 （C-5）， 22.2 （C-6）， 36.0 （C-7）， 139.7 （C-8）， 50.2（C-9）， 39.0 （C-10）， 18.2 （C-11）， 32.1 （C-12），35.9 （C-13）， 126.8 （C-14）， 79.8 （C-15）， 65.4（C-16）， 22.5 （C-17）， 28.5 （C-18）， 15.7 （C-19）， 14.9 （C-20）， 108.6 （C-21）， 26.3 （C-22），25.3 （C-23）。 数据与文献 [13］ 一致， 鉴定为3α， 15， 16-trihydroxy-ent-pimara-8 （14） -en-15，16-acetonide。

化合物5： 白色粉末， ESI-MS m／z： 335.2[M-H］-。1H-NMR （500 MHz， CDCl3＋CD3OD） δ：3.69 （1H， t， J=7.2 Hz， H-17a），3.57 （1H， t， J=7.2 Hz， H-17b）， 1.22 （3H， s， H-18）， 1.14 （3H，s， H-20）；13C-NMR （125 MHz， CDCl3＋CD3OD） δ：40.6 （C-1）， 19.0 （C-2）， 37.9 （C-3）， 43.5 （C-4）， 56.7 （C-5）， 22.1 （C-6）， 41.9 （C-7）， 44.6（C-8）， 55.7 （C-9）， 39.6 （C-10）， 18.5 （C-11），26.1 （C-12）， 45.0 （C-13）， 37.1 （C-14）， 52.6（C-15）， 81.7 （C-16）， 65.9 （C-17）， 29.7 （C-18）， 180.6 （C-19）， 15.4 （C-20）。 数据与文献[14］ 一致， 鉴定为16α， 17-dihydroxy-ent-kaura-19-oic acid。

化合物6： 白色粉末， ESI-MS m／z： 285.1[M＋Cl］-。1H-NMR （500 MHz， CDCl3） δ： 3.83（1H， t， J=9.7 Hz， H-4）， 4.23 （1H， m， H-8），6.14 （1H， d， J=3.5 Hz， H-13a）， 5.44 （1H， d，J=3.5 Hz， H-13b）， 0.94 （3H， d， J=6.5 Hz， H-14）， 0.88 （3H， s， H-15）；13C-NMR （125 MHz，CDCl3） δ： 45.2 （C-1）， 25.6 （C-2）， 28.8 （C-3），83.9 （C-4）， 44.6 （C-5）， 38.1 （C-6）， 47.7 （C-7）， 81.7 （C-8），44.4 （C-9），30.3 （C-10），140.9（C-11）， 170.3 （C-12）， 119.6 （C-13）， 20.5 （C-14）， 17.5 （C-15）。 数据与文献 [15-16］ 一致，鉴定为2-desoxy-4-epi-pulchellin。

化合物7： 无色油状物， ESI-MS m／z： 259.2[M ＋Na］＋。1H-NMR （500 MHz， CDCl3） δ： 5.52（1H， d， J=4.5 Hz， H-6），4.02 （2H， brs， H-11），1.26 （3H， s， H-13）， 0.88 （3H， d， J=6.4 Hz， H-14）， 0.91 （3H， d， J = 6.4 Hz， H-15）；13C-NMR（125 MHz， CDCl3） δ： 58.9 （C-1）， 34.6 （C-2），27.1 （C-3）， 56.1 （C-4）， 51.5 （C-5）， 132.9 （C-6）， 141.7 （C-7），24.9 （C-8），39.9 （C-9），213.7（C-10）， 67.2 （C-11）， 33.1 （C-12）， 24.7 （C-13）， 22.1 （C-14）， 19.9 （C-15）。 数据与文献[17-18］ 一致， 鉴定为aphanamol Ⅰ。

化合物8： 黄 色 粉 末， ESI-MS m／z： 315.1[M-H］-， 631.1 [2M-H］-。1H-NMR （500 MHz，CD3COCD3） δ： 6.23 （1H， d， J=1.6 Hz， H-6），6.46 （1H， d， J=1.6 Hz， H-8）， 7.67 （1H， d， J=1.9 Hz， H-2′）， 6.97 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5′），7.56 （1H， dd， J = 8.5， 1.9 Hz， H-6′）， 12.78（1H， s， 5-OH）， 3.84 （3H， s， 3-OCH3）；13C-NMR（125 MHz， CD3COCD3） δ： 156.7 （C-2）， 139.2（C-3）， 179.4 （C-4）， 163.1 （C-5）， 99.3 （C-6），164.9 （C-7）， 94.4 （C-8）， 157.8 （C-9）， 105.7（C-10）， 122.9 （C-1′）， 116.2 （C-2′）， 145.9 （C-3′）， 149.1 （C-4′）， 116.1 （C-5′）， 122.0 （C-6′），60.1 （3-OCH3）。 数据与文献[19］ 一致， 鉴定为3-O-甲基槲皮素。

化合物9： 黄 色 粉 末， ESI-MS m／z： 301.0[M-H］-， 603.1 [2M-H］-。1H-NMR （500 MHz，CD3OD） δ： 6.16 （1H， d， J=1.5 Hz， H-6）， 6.35（1H， s， H-8）， 7.72 （1H， d， J=1.5 Hz， H-2′），6.87 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5′）， 7.61 （1H， dd，J= 8.5， 1.5 Hz， H-6′）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD） δ： 147.9 （C-2）， 137.2 （C-3）， 177.3 （C-4）， 162.4 （C-5），99.2 （C-6），165.5 （C-7），94.4（C-8）， 158.2 （C-9）， 104.8 （C-10）， 124.1 （C-1′）， 116.2 （C-2′）， 146.2 （C-3′）， 148.7 （C-4′），115.9 （C-5′）， 121.7 （C-6′）。 数据与文献[20］一致， 鉴定为槲皮素。

化合物10： 无色油状物， ESI-MS m／z： 151.0[M-H］-。1H-NMR （400 MHz， CDCl3） δ：7.40 （1H，d， J=1.6 Hz， H-2）， 7.02 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5）， 7.41 （1H， dd， J=8.5， 1.6 Hz， H-6）， 9.81（1H， s， H-7）， 3.94 （3H， s， 3-OCH3）；13C-NMR（100 MHz， CDCl3） δ： 129.7 （C-1）， 108.8 （C-2），147.2 （C-3）， 151.8 （C-4）， 114.4 （C-5）， 127.6（C-6）， 191.0 （C-7）， 56.1 （3-OCH3）。 数据与文献[21］ 一致， 鉴定为香草醛。

化合物11： 无色油状物， ESI-MS m／z： 163.0[M-H］-。1H-NMR （400 MHz， CD3OD） δ： 7.44（2H， d，J=8.8 Hz，H-2，6），6.79 （2H，d，J=8.8 Hz， H-3， 5）， 7.57 （1H， d， J= 16.0 Hz， H-7），6.29 （1H， d， J = 16.0 Hz， H-8）；13C-NMR （100 MHz， CD3OD） δ：127.4 （C-1），130.9 （C-2，C-6），116.8 （C-3， C-5）， 161.0 （C-4）， 146.0 （C-7），116.5 （C-8）， 171.7 （-COOH）。 数据与文献[22］一致， 鉴定为反式对羟基肉桂酸。

4 讨论

本实验从毛梗豨莶95% 乙醇提取物中分离得到11 个化合物， 包括5 个二萜（1 ～5）、 2 个倍半萜（6 ～7）、 2 个黄酮（8 ～9）、 2 个酚类（10 ～11）， 4～7、 10 为首次从该植物中发现。 化合物1、5 具有较好的抗炎镇痛及抗血栓作用[14，23-25］， 6 具有显著抗炎活性[26］， 8 也具有一定抗炎镇痛作用[3］， 这些活性成分为毛梗豨莶治疗风湿痹痛、筋骨无力、 腰膝酸软、 四肢麻痹、 半身不遂、 风疹湿疮等病症提供依据， 并可促进其开发利用。