狂犬病、破伤风人免疫血浆抗体效价检测分析

雷静，程郁菁，王川，陈鄂湘，喻剑虹，李璞

（国药集团武汉血液制品有限公司，湖北武汉 430207）

破伤风是由破伤风杆菌侵入人体伤口造成的一种特异性感染，是致死性传染病，其高毒力的痉挛毒素可阻断中枢神经系统的抑制性神经递质，引起肌肉强直和典型的全身痉挛[1]。破伤风抗毒素（TAT）是由马血清制成的，部分人会出现过敏反应，而破伤风人免疫球蛋白（TIG）是人血制品，基本没有过敏反应。破伤风人免疫球蛋白主要用于预防和治疗破伤风，尤其适用于对破伤风抗毒素（TAT）有过敏反应者。

狂犬病毒转移的发生起源于被感染宿主的伤口，引起咬伤伤口处唾液病毒的沉积。一旦感染发展，而没有有效的治疗，具有接近100%的致死率。但是，在被咬伤暴露伤口之前或在伤口暴露后很短时间内给予疫苗的注射，能有效避免这种结果的发生[2]。狂犬病人免疫球蛋白主要用于被狂犬或其他疯动物咬伤、抓伤患者的被动免疫。

疫苗和免疫球蛋白是相辅相成的作用，疫苗属于抗原，通过刺激机体产生抗体后起到有效的防护作用，需要较长时间产生抗体，但效力持久；免疫球蛋白属于抗体，能快速起效但效力较短。近年来，临床对血液制品的需求持续攀升，国内血液制品行业无论是原料血浆采集量，还是血液制品产量、品种都在逐年增长[3]。2017年狂免、破免产品签发情况见表1。

表1 2017年狂免、破免产品签发情况

了解各浆站原料血浆的狂犬病/破伤风抗体效价水平，是制备用于预防和治疗狂犬病/破伤风的人免疫球蛋白产品的前提[4]。为了解疫苗接种者血清中狂犬/破伤风抗体水平，以评价血浆站的预防接种效果，现对各浆站2015—2017年狂犬疫苗/破伤风疫苗接种者进行血清抗体测定，为浆站提高抗体效价提供依据。

1 材料与方法

1.1 血浆样品

由武穴武源单采血浆站、郧阳单采血浆站、武生松滋单采血浆站、武生云梦单采血浆站、湖南君山单采血浆站提供。

1.2 试剂、仪器设备

人狂犬病病毒IgG抗体测定试剂盒（宁波天润生物药业有限公司、泰安京泰生物技术有限公司生产）、破伤风IgG抗体测定试剂盒（宁波天润生物药业有限公司、泰安京泰生物技术有限公司生产），试剂盒均为合格品并在有效期内使用。Opsys MR酶标仪（DYNEX Technologies, Inc.），PW-960型洗板机（深圳市汇松科技发展有限公司），CU-600型电热恒温水槽（武汉恒丰中欣生物科技发展有限公司）。

1.3 检测方法

采用ELISA法，按照试剂盒说明书操作，阴性对照OD值≤0.1时，试验成立。空白对照位置：A1；阴性对照位置：A6；9 IU/mL阳性对照位置：A2、A3；6 IU/mL阳性对照位置：A4、A5。9 IU/mL阳性对照稀释：稀释液10 µL+阳性对照90 µL；6IU/mL阳性对照稀释：稀释液 40 µL+阳性对照60 µL；样品稀释：稀释液100 µL+样品5 µL。酶标板读板结果判定：OD值≥（A2+A3）/2，抗体效价≥9 IU/mL；（A4+A5）/2≤OD值＜（A2+A3）/2，6 IU/mL≤抗体效价＜9 IU/mL；OD值＜（A4+A5）/2，抗体效价＜6 IU/mL。

1.4 分析方法

根据检测数据，采用柱状图对各浆站破伤风、狂犬病人免疫血浆抗体效价进行分析，主要对9 IU/mL以上、6～9 IU/mL的高效价血浆所占百分比进行三年的对比。

2 结果与分析

2.1 特异性免疫血浆效价检测总数分析

2015—2017年特免血浆检测数据见表2。从表2中可以看出，破免血浆检测总量呈逐年上涨的趋势，高效价血浆所占百分比也在逐渐增高，破伤风免疫情况逐渐提高。狂免血浆2016年和2017年检测总数均比2015年下降了32%，高效价血浆所占百分比也在逐渐降低，这是由于接种疫苗时间长了免疫效果下降导致的，需要进行狂犬疫苗的加强免疫。

表2 2015-2017年特免血浆检测数据

2.2 狂犬病特免血浆抗体效价检测结果分析

对比武穴、郧阳、松滋、云梦浆站三年狂免血浆检测的数据，结果见表3。

表3 2015—2017年狂免血浆检测数据

武穴和郧阳的狂犬血浆检测总数多于松滋和云梦，对几个浆站狂犬抗体效价9 IU/mL以上、6～9 IU/mL的高效价血浆所占百分比进行三年的对比，结果见图1、图2，从图中可以看出，武穴和郧阳高效价血浆所占百分比多于松滋和云梦，说明武穴和郧阳狂犬免疫效果较好。

图1 狂犬抗体效价≥9 IU/mL

图2 6 IU/mL≤狂犬抗体效价＜9 IU/mL

2.3 破伤风特免血浆抗体效价检测结果

对比君山、松滋、云梦浆站破免血浆三年检测总数，结果见表4。

表4 2015—2017年破免血浆检测数据

君山的破伤风血浆检测总数多于松滋和云梦，对几个浆站破伤风抗体效价9 IU/mL以上、6～9 IU/mL的高效价血浆所占百分比进行三年的对比，结果见图3、图4，从图中可以看出，君山高效价血浆所占百分比多于松滋和云梦，说明君山的破伤风免疫效果较好。

3 讨论

从以上数据和柱状图可以看出：破免收浆量逐年增多，2017年比2015年增长了103%，原因是目前破免价格放开，刺激生产厂家增加投产，破免制品价格提高，预计各企业会增加产量。虽然狂免收浆量降低，但是随着经济的增长和狂犬病预防门诊规范处置程度的提高，狂免产品的需求应该会进一步增长。武穴和郧阳浆站高效价狂免血浆较多，君山浆站高效价破免血浆较多，武穴、郧阳、君山三个浆站的采浆量较高，高效价血浆所占百分比也较多。

图3 破伤风抗体效价≥9 IU/mL

图4 6 IU/mL≤破伤风抗体效价＜9 IU/mL

狂犬病、破伤风疫苗常规免疫后进行抗体检测十分重要，特别是对暂未产生抗体者，应及时加强免疫，确保免疫效果[5]。为了采集更多的高效价原料血浆制备出安全有效的狂犬病、破伤风人免疫球蛋白制品，使之取之于民、用之于民，建议浆站增大宣传工作，动员更多的献浆员，同时主动严格执行免疫程序，提高回采率，争取多收获高效价血浆。