变应原特异性免疫治疗的研究进展

过敏性哮喘是临床常见病和多发病，近年来其发病率和患病率逐年增加[1-4]。过敏性哮喘的发病机制较为复杂，主要是由于机体免疫系统对环境中变应原应答过程中产生特异性IgE抗体、慢性气道炎症(嗜酸性粒细胞、中性粒细胞增多集聚，粘液增多)和气道高反应性[5]，以及Th2细胞增多引起[6-8]免疫失衡等综合因素所引致。虽然临床上治疗哮喘的方法很多，如应用糖皮质激素[9-10]、β2受体激动剂[11-12]、氨茶碱[13-14]等，在短时间内改善过敏症状具有一定的效果， 但变应原特异性免疫治疗(Allergen-specific immunotherapy, ASIT)又称脱敏疗法(Desensitization)，是现阶段唯一针对病因的治疗措施，能长时间持续减轻过敏症状，改变自然病程的治疗方法[15-16]。目前ASIT作用机制、治疗药物和安全性均得到很大发展，本文就现阶段ASIT发展和应用情况做一综述，旨在为ASIT的临床治疗提供借鉴。

1 变应原特异性免疫治疗的机制

ASIT是在临床上确定过敏性疾病患者的变应原后，将该变应原制备出变应原提取物并不同浓度稀释，使得该变应原与患者反复接触(经注射或其他给药途径)，逐步增加变应原的浓度和剂量，从而提高患者对该种变应原的免疫耐受，达到当再次接触该种变应原时，不再产生过敏症状或症状减轻的现象[17-18]。其具体的作用机制包括：1) 调节Th1/Th2细胞的平衡、调节IgE和IgG抗体的生成及影响免疫效应细胞等。有效的免疫治疗可以减少血清IL-4水平、增加IFN-γ含量，诱导选择性Th2型免疫应答向Th1应答偏移，从而使IL-4、IL-5等Th2细胞的细胞因子减少，并显著减低单核细胞中IL-4、IL-5表达，增加IFN-γ表达，抑制嗜酸性粒细胞增生、活化和聚集；2) IL-4分泌减少，下调了B细胞合成IgE，同时血清总IgG增多(特别是IgG4)，竞争性阻断了变应原与肥大细胞表面IgE结合，避免了肥大细胞的激活和炎症介质释放，改善临床症状；3) 减少局部肥大细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞等的数量，影响粘附因子、趋化因子和促炎因子的生成，降低气道上皮的生物反应性。目前研究表明[5, 8, 16, 19-24]，ASIT主要是通过上述3种作用机制改善临床症状，达到治疗效果。

2 新型ASIT药物

ASIT传统治疗药物是变应原粗制提取物，其成分复杂，难以标准化，容易产生严重的系统或局部副作用，或产生新的过敏反应[25-27]。一些高纯度的新型变应原疫苗被应用的临床治疗中。同传统变应原相比，前者具有成分单一、容易量化、副作用小、低变应原性、高免疫原性等特点，大大提到了ASIT的安全性。具有代表性的药物有以下几种：1) 重组变应原疫苗：将变应原在外源宿主中进行表达，纯化后可获得成分单一，量化精准的变应原。此方法制备的变应原疫苗能显著减少ASIT的副作用。Govindaraj等[28]利用基因重组技术表达出变应原蛋白Per a 10。临床应用证明，此重组变应原能降低IgE结合能力，减少组胺释放并且无蛋白水解活性；Myrset等[29]重组出分子量与结构均同野生型相似的重组蛋白，可以应用于未来诊断和免疫治疗；Berdas-Le等[30]重组尘螨2类变应原，表达出的重组蛋白Der p 2适用于临床过敏性疾病的诊断和治疗。目前越来越多的重组变应原被应用的临床和科研中。2) 低变应原性疫苗：利用DNA Shuffling或其他突变技术，筛选出即破坏编码B细胞表位的基因序列，同时保留编码T细胞表位的基因序列的嵌合基因，使得表达出的嵌合蛋白即保留了T细胞免疫原性又减低变应原性，减少IgE抗体的生成。郭伟等[31]利用此技术重组尘螨1类变应原基因，表达出嵌合蛋白R8在ASIT中的效果优于重组的两亲本；Gafvelin等[32]重组表达了害嗜鳞螨变应原，同样显示了低IgE结合能力，同时又保留了免疫原性；Wallner等[33]利用DNA shuffling技术对Betv1家族14个基因进行突变，筛选出2个低IgE结合、高免疫原性的嵌合蛋白，使得ASIT的安全性进一步提高。3) DNA疫苗：通过注射(肌肉注射或皮内注射)编码变应原的治疗DNA，诱导Th1类型的免疫应答，促进IFN-γ的生成，调节IgG1/IgG2a[34]等效果。李国平等[35]验证了Der p 2的DNA疫苗对小鼠哮喘模型具有很好的治疗作用，降低了IgE水平，减轻气道炎症；Hartl等[36]利用实验证明Betv1 DNA疫苗，可促进IFN-γ的生成，降低了IgE水平，调节Th1/Th2细胞的平衡；Wang等[37]也证明DNA疫苗在过敏性疾病中具有潜在的治疗作用。DNA 疫苗具有使用方便、剂量精准、安全性高等优点，但是其长期影响尚未明确，因此在临床上ASIT中的应用也不如前二者广泛。4) 其他包括去除IgE表位的疫苗肽[38-39]、主要重组变应原混合疫苗[40]、变应原偶联粒子[41]等。越来越多的ASIT药物应用于临床，使得患者可以针对自身的情况合理选择，制定个性化的治疗方案，提高了ASIT的疗效和安全性。

3 给药途径

为了使ASIT药物更好地发挥药效，不同药物的给药途径也不尽相同，最常见的给药途径有：1) 皮内注射：将小剂量的药物注射入表皮和真皮之间使之产生免疫效应。Rotiroti等[42]应用变应原皮内注射，抑制皮肤对变应原的迟发性应答，诱导保护性抗体的生成；Esposito等[43]为提高皮内注射的安全性，对皮内注射剂量进行具体的研究。2) 舌下腺免疫治疗：变应原制备成溶液或片剂，被舌粘膜上皮层的树突状细胞摄取，调节淋巴细胞分化和抗体生成，形成免疫应答。Fleischer等[44]应用花生变应原进性免疫治疗，验证了此疗法是安全的，并具有长时间持续的治疗效果；Yamada等[45]通过对过敏模型的舌下腺免疫治疗，证明了其能诱导Treg细胞表达IL-10。3) 肌肉注射：是应用DNA疫苗进行ASIT最常用的给药途径。Toda等[46]肌肉注射DNA疫苗在动物模型上验证了很好的疗效，且无副作用。4) 其他：如淋巴管内给药，将变应原直接注射入淋巴结内[47]。

4 ASIT禁忌症

美国哮喘变态反应与免疫学学会(American Academy of Aergy Asthma Immunology, AAAAI)、全球变态反应和哮喘欧洲协作网对ASIT的禁忌症进行了细致的阐述。具体包括：1) 正在使用β受体阻滞剂，因为其可能使支气管痉挛，对过敏反应具有促进作用；2) 正在使用ACE抑制剂；3) 哮喘发作期；4) 心血管功能不全；5) 严重的免疫缺陷性疾病；6) 恶性肿瘤；7)5岁以下 的儿童；8) 妊娠期内起始ASIT；9)急慢性感染性疾病[48-49]。

5 展 望

ASIT的安全性一直以来都是其应用的障碍。随着分子生物技术的飞速发展，ASIT的药物安全性已得到很大提高，但遗憾的是，对于患者变应原的准确诊断和药物副作用仍不理想。理想的ASIT疫苗应具有有一下特征：成分单一、能诱导免疫耐受，减少IgE的生成，产生更多的保护性抗体、容易制备、副作用小、疗效持久，以及临床应用中容易监测等特点，具有上述特征的ASIT疫苗将是未来变应原特异性免疫治疗的研究方向。

利益冲突：无

本文引用格式：郭伟, 姜玉新. 变应原特异性免疫治疗的研究进展[J]. 中国人兽共患病学报, 2019,35(4):334-337，344. DOI: 10.3969/j.issn.1002-2692.2019.00.034