1 001株铜绿假单胞菌临床分布及其耐药性分析

周剑辉 李文华 朱颖娴 周文英

细菌耐药性目前己成为全球性关注的问题，耐药细菌所致感染己构成了新世纪抗感染治疗的新挑战，威胁着当前人类健康和生命。其中细菌性感染尤为常见，铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药性日趋严重，为当前多重耐药细菌所致感染的显著特点之一，治疗尤为困难。本研究分析我院2013年1月—2015年12月临床分离铜绿假单胞菌的药敏情况，了解铜绿假单胞菌对常规使用抗生素的耐药状况及耐药谱特征，为临床尽早治疗和预防铜绿假单胞菌感染提供有力的证据，指导临床合理使用抗生素，有效地提高临床治愈率，以控制其在院内的传播，降低发病率和病死率。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源 收集中山大学附属第五医院检验科微生物实验室2013 年1月—2015 年12月3年间门诊及住院患者各种标本中分离鉴定的1001株铜绿假单胞菌，标本类型包括：痰液、尿液、分泌物、脓液、胆汁及其他。

1.1.2 仪器与试剂 细菌分离按《全国临床检验操作规程》第3 版操作，鉴定使用BD公司PHOENIX 100全自动细菌鉴定仪，抗生素药敏纸片购自Oxoid公司； 血琼脂、SS 琼脂、MH (药敏试验培养基) 琼脂均购自凯林贸易有限公司。

1.1.3 质控菌株 大肠埃希菌(ATCC25922)、铜绿假单胞菌(ATCC27853 ) 由广东省临床检验中心提供。

1.2 方法

菌株鉴定及药敏试验鉴定使用BD公司PHOENIX 100全自动细菌鉴定仪， 细菌药敏试验采用Kirby-Bauer(K-B)法，药敏结果根据美国国家临床实验室标准化委员会(CLSI)出版的指南为标准进行判读。

1.3 统计学分析运用

2 结果

2.1 铜绿假单胞菌在临床标本中的分布

铜绿假单胞菌主要分布在痰标本、尿液中，表明本院铜绿假单胞菌主要引起呼吸系统的感染和泌尿系统感染，其他如伤口分泌物(脓液)也较多见，见表1。

表1 铜绿假单胞菌从不同标本分离情况及菌株数

2.2 中山大学附属第五医院铜绿假单胞菌的基本情况

2013年分离的铜绿假单胞菌为235株，2014年为345株，2015年分离的铜绿假单胞菌为421株，每年递增。见图1。

图1 2013—2015年铜绿假单胞菌的分离株数折线图

2.3 铜绿假单胞菌分别占各年的病原菌比例

2013年铜绿假单胞菌占全院分离病原菌的17.5%，之后逐年递升，2014年为18.8%，2015年为20.10%，三年平均值为19.0%。见图2。

图2 2013—2015年我院铜绿假单胞菌分离率

2.4 铜绿假单胞菌对l5种常规试验的抗菌药物耐药率的变迁

据统计，从2013年1月—2015年12月，我院每年分离的铜绿假单胞菌对IMP、SCF、CIP、LVX、TZP这5种抗生素的耐药率在常规抗生素中都是较低的，对其余11种抗菌药物耐药率维持在一个较高的水平，耐药率45%～75%。数据分析其耐药率逐年提高，经统计学分析，耐药率差异有显著统计学意义，提示耐药率有显著上升的趋势，对AMP、CZO、CTX、C、GEN耐药率差异无统计学意义，三年间维持在较高且稳定的水平，对PRL、ATM、FEP、CAZ、TCY耐药率统计有统计学意义，提示耐药率有上升的趋势。总之，三年来铜绿假单胞菌对多数抗生素的耐药性都在不断增加(见表2、图3)。

表2 铜绿假单胞菌对多数抗生素的耐药率

注：1)表示P<0.05，2)表示P<0.01，差异有统计学意义

3 讨论

铜绿假单胞菌(PA)是临床上很重要的条件致病菌之一，广泛分布于自然界的各种水、空气以及正常人体皮肤、肠道和呼吸道等，为常见的院内感染致病菌。长期应用激素、免疫抑制剂、肿瘤放化疗等免疫功能低下以及手术、气管切开或导管留置等侵袭性诊疗操作的患者普遍易感，由于其具有很强的耐药性，临床治疗十分困难，一旦感染，死亡率很高[1-2]。近年来，该菌的临床分离率不断增加，其耐药性和耐药水平也迅速增加，成为临床上最重要的耐药菌之一[3]。而本文结果显示，中山大学附属第五医院在2013年1月—2015年12月三年间分离的铜绿假单胞菌分别为235、345和421株，占同年病原菌分离率的17.5%、18.8%和20.10%。该细菌分离率呈现上升趋势，与文献[4-5]报道相符。铜绿假单胞菌主要分布在痰标本、尿液中，表明本院铜绿假单胞菌主要引起呼吸系统的感染和泌尿系统感染，其他如伤口分泌物(脓液)也较多见。在15种常规测试的抗菌药物中，该菌对IMP的耐药率较低，分别为14.9%、23.2%和31.2%，其次是SCF(23.4%、33.6%、46.4%)、CIP(26.4%、34.5%、47.4%)和TZP(34.5%、38.6%、39.3%)，对其余11种抗菌药物耐药率维持在一个较高的水平，耐药率在45%～75%之间。碳青霉烯类抗生素是一类非典型的 β-内酰胺抗生素，对灭活青霉素和头孢菌素的β-内酰胺酶(包括超广谱 β-内酰胺酶等)稳定，可快速渗透革兰阴性杆菌的外膜孔蛋白OprD2通道，与青霉素结合蛋白PBPs紧密结合而产生极强的广谱抗菌活性。由于多重耐药株的增加，使得临床医师在治疗革兰阴性杆菌严重感染时，往往选择碳青霉烯类抗生素[6]，如亚胺培南和美罗培南在临床中的应用十分广泛。伴随着亚胺培南等碳青霉烯类抗生素在临床的大量应用，其耐药菌株也不断增加[7]。2003—2004 年中国10家教学医院革兰阴性杆菌耐药性监测数据显示铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率为 22%～24%[8]；在中山大学附属第五医院在2013年1月—2015年12月三年间分离的铜绿假单胞菌中，该菌对碳青霉烯类抗生素亚胺培南的耐药率分别为14.9%、23.2%和31.2%，其耐药率正呈线性增加，可见我国临床铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药形势相当严峻。所以，临床应加强医院感染管理，加强有关科室的消毒隔离制度，严格手卫生，有效降低PAE的感染率。还应建立抗菌药物管理长效机制，加强细菌耐药监测，以提升抗菌药物合理化使用水平、提高抗菌药物对细菌的敏感性。

图3 铜绿假单胞菌对15种抗生素的耐药变迁