菜头肾化学成分研究△

屈玲霞，王扬，刘永巧，李龙宇，邹小华，胡晓焱，陆成豪，褚夏燕，徐暾海*，朱寅荻*

1.北京中医药大学 中药学院，北京 100029；2.中医养生学北京市重点实验室，北京 100029；3.中医养生学教育部重点实验室，北京 100029；4.温州医科大学 药学院，浙江 温州 325035

菜头肾ChampionellasarcorrhizaC.Ling为爵床科黄猄草属多年生草本植物，别名土太子参、肉根马蓝。味甘，微苦，性凉，归肝经，块状肉质根养阴补肾，可以治疗肾虚腰痛等证；茎、叶清热解毒，用于治疗疔疮疖肿、肌腱扭伤等证，为浙江特有种植物，是温州民间的草药[1-2]。菜头肾常用作补肾方剂七肾汤的君药，由于其治疗效果较好，在温州当地广为流传。自然因素和人为因素导致野生菜头肾资源遭到了破坏，为了保护野生菜头肾资源和供应市场需求，目前菜头肾已经实现了人工种植[3-4]。初步研究表明，菜头肾中含有酚类、生物碱、还原糖、三萜、甾醇等类成分[5]。目前对于菜头肾化学成分方面的文献报道较少，谢自新等[6]对菜头肾石油醚提取物的化学成分进行了研究，从中分离鉴定了63个脂溶性成分；董建勇等[7]对菜头肾石油醚和乙醇提取物的化学成分进行了研究，从中分离鉴定出9个成分。为了进一步阐明其物质基础，本研究希望通过对菜头肾进行化学成分研究，从中获得结构多样的天然产物，从而为更好地开发利用该中药提供依据。本实验利用各种色谱技术从菜头肾中分离鉴定了7个化合物，分别为：cornoside(1)、(-)-(2R)-1-O-β-D-glucopyranosyl-2-{2-methoxy-4[1-(E)-propen-3-ol]phenoxyl} propane-3-ol(2)、benzyl alcoholβ-D-(2′-O-β-D-xylopyranosyl)glucopyranoside(3)、腺嘌呤核苷(4)、白桦酯醇(5)、羽扇豆醇(6)、β-谷甾醇(7)。其中，化合物1～5为首次从黄猄草属植物中分离得到。

1 仪器与材料

Bruker Avance Ⅲ 600型核磁共振仪(德国Bruker公司)；LTQ-Obit rap XL质谱仪(美国Thermo Fisher公司)；Agilent 1100型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；YMC Pack ODS-A半制备色谱柱(10 mm×250 mm，5 μm，日本YMC公司)；柱色谱硅胶、薄层色谱硅胶(青岛海洋化工厂)；D101大孔树脂(南开大学)；C18反相填料(日本YMC公司)，Sephadex LH-20(瑞典Amersham biosciences公司)，水为实验室自制(杭州永洁达净化科技有限公司)，其他所用试剂均为分析纯(常熟市杨园化工有限公司)。

菜头肾药材购于磐安市中药材市场，经温州医科大学中药学基础教研室汪洪副教授鉴定为菜头肾ChampionellasarcorrhizaC.Ling的干燥肉质根茎。

2 提取与分离

菜头肾干燥肉质根茎约15 kg，切碎，以70%乙醇水回流提取3次，减压浓缩得乙醇浸膏1.0 kg，将浸膏用水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，减压回收溶剂，得到石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取物。将正丁醇萃取物经过D101大孔树脂粗分段，30%乙醇水洗脱部位经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇溶剂系统梯度洗脱(100∶0～50∶50)，回收溶剂，经薄层色谱检视，合并相似组分得到6个部位(Fr.Z1～6)。Fr.Z3经中压反相柱色谱，以甲醇-水梯度洗脱，经薄层色谱检视，合并相似组分，得到6个组分Fr.Z3-1～3-6。将Fr.Z3-3经凝胶柱色谱和高效制备液相色谱分离纯化得到化合物1(10 mg)、2(12 mg)和3(6 mg)。将Fr.Z3-2经凝胶柱色谱，以甲醇梯度洗脱，重结晶纯化得到化合物4(4 mg)。将乙酸乙酯萃取物经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇溶剂系统梯度洗脱(100∶0～50∶50)，回收溶剂，经薄层色谱检视，合并相似组分得到5个部位(Fr.Y1～6)。Fr.Y2经过重结晶纯化得到化合物5(15 mg)；将石油醚萃取物经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇溶剂系统梯度洗脱(100∶0～50∶50)，回收溶剂，经薄层色谱检视，合并相似组分得到6个部位(Fr.S1～6)。用重结晶方法得到化合物6(10 g)。将Fr.S2经过中压反相柱色谱、高效制备液相色谱分离纯化，得到化合物7(15 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：无色胶状。ESI-MS：m/z317.1[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.12(2H，dd，J=2.4，10.8 Hz，H-3，5)，6.96(2H，dd，J=2.4，10.8 Hz，H-2，6)，2.05(2H，t，J=6.4 Hz，H-7)，3.76(1H，dt，J=6.4，9.8 Hz，H-8a)，3.90(1H，dt，J=7.6，10.2 Hz，H-8b)，4.16(1H，d，J=6.0 Hz，H-1′)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：69.2(C-1)，154.5(C-2)，127.9(C-3)，188.0(C-4)，127.8(C-5)，154.4(C-6)，40.8(C-7)，65.6(C-8)，104.0(C-1′)，74.8(C-2′)，77.8(C-3′)，71.4(C-4′)，77.7(C-5′)，62.3(C-6′)。以上数据与文献报道的cornoside数据基本一致[8]，为首次从黄猄草属植物中分离得到。

化合物2：无定型粉。ESI-MS：m/z439.1[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：4.03(1H，dd，J=12.0，5.0 Hz，H-1a)，3.76(1H，dd，J=12.0，5.0 Hz，H-1b)，4.33(1H，q，J=5.0 Hz，H-2)，3.77(1H，dd，J=12.0，5.0 Hz，H-3a)，3.72(1H，dd，J=12.0，5.0 Hz，H-3b)，6.99(1H，brs，H-2′)，7.01(1H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，6.86(1H，dd，J=8.0，1.5 Hz，H-6′)，6.50(1H，d，J=16.0 Hz，H-7′)，6.23(1H，dt，J=16.0，6.0 Hz，H-8′)，4.17(2H，d，J=6.0 Hz，H-9′)，4.25(1H，d，J=8.0 Hz，H-1″)，3.82(3H，s，OMe)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：68.8(C-1)，80.9(C-2)，62.0(C-3)，133.3(C-1′)，111.2(C-2′)，151.9(C-3′)，148.1(C-4′)，118.5(C-5′)，120.7(C-6′)，131.4(C-7′)，128.7(C-8′)，63.7(C-9′)，104.8(C-1″)，75.0(C-2″)，77.9(C-3″)，71.5(C-4″)，77.9(C-5″)，62.6(C-6″)，56.4(OMe)。以上数据与文献报道的(-)-(2R)-1-O-β-D-glucopyranosyl-2-{2-methoxy-4[1-(E)-propen-3-ol]phenoxyl}propane-3-ol数据基本一致[9]，为首次从黄猄草属植物中分离得到。

化合物3：无定型粉末。ESI-MS：m/z403.2[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.22(2H，t，J=7.2 Hz，H-3，5)，7.33(2H，dd，J=2.4，7.2 Hz，H-2，6)，7.16(1H，tt，J=2.4，7.2 Hz，H-4)，4.54(1H，d，J=12.0 Hz，H-7a)，4.84(1H，d，J=12.0 Hz，H-7b)，4.39(1H，d，J=8.0 Hz，H-1′)，4.40(1H，d，J=7.0 Hz，H-1″)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：139.1(C-1)，128.9(C-2，6)，129.2(C-3，5)，128.6(C-4)，71.4(C-7)，102.3(C-1′)，83.8(C-2′)，77.9(C-3′)，71.1(C-4′)，77.9(C-5′)，62.7(C-6′)，106.3(C-1″)，74.8(C-2″)，77.4(C-3″)，71.4(C-4″)，67.2(C-5″)。以上数据与文献报道的benzyl alcoholβ-D-(2′-O-β-D-xylopyranosyl)glucopyranoside数据基本一致[10]，为首次从黄猄草属植物中分离得到。

化合物4：白色粉末。ESI-MS：m/z267.1[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，C6D5N)δ：8.17(1H，s，H-2)，8.30(1H，s，H-8)，5.95(1H，d，J=6.0 Hz，H-1′)；13C-NMR(150 MHz，C6D5N)δ：156.0(C-2)，152.5(C-4)，120.9(C-5)，160.1(C-6)，145.4(C-8)，90.7(C-1′)，78.0(C-2′)，75.2(C-3′)，90.7(C-4′)，66.0(C-5′)。以上数据与文献报道的腺嘌呤核苷数据基本一致[11]，为首次从黄猄草属植物中分离得到。

化合物5：为白色粉末。ESI-MS：m/z443.1[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：3.12(1H，m，H-3)，2.40(1H，m，H-19)，0.78(3H，s，H-23)，0.85(3H，s，H-24)，0.94(3H，s，H-25)，1.00(3H，s，H-26)，1.07(3H，s，H-27)，3.27(1H，d，J=10.0Hz，H-28a)，3.73(1H，d，J=10.0Hz，H-28b)，4.67(1H，s，H-29a)，4.56(1H，s，H-29b)，1.60(3H，s，H-30)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：40.4(C-1)，28.7(C-2)，81.8(C-3)，40.8(C-4)，58.0(C-5)，18.8(C-6)，34.3(C-7)，40.8(C-8)，50.9(C-9)，37.6(C-10)，21.5(C-11)，24.1(C-12)，37.6(C-13)，42.2(C-14)，28.7(C-15)，30.1(C-16)，45.9(C-17)，45.9(C-18)，47.1(C-19)，153.9(C-20)，29.9(C-21)，32.9(C-22)，28.1(C-23)，15.5(C-24)，16.2(C-25)，16.1(C-26)，14.6(C-27)，60.1(C-28)，109.4(C-29)，19.4(C-30)。以上数据与文献报道白桦脂醇(Betulin)的数据基本一致[12]，为首次从黄猄草属植物中分离得到。

化合物6：白色粉末。ESI-MS：m/z426.3[M]+。1H-NMR(600 MHz，CD3Cl3)δ：3.18(d，J=4.8Hz，H-3)，2.41(1H，m，H-19)，0.78(3H，s，H-23)，0.82(3H，s，H-24)，0.86(3H，s，H-25)，0.99(3H，s，H-26)，1.00(3H，s，H-27)，1.06(3H，s，H-28)，4.72(1H，s，H-29a)，4.60(1H，s，H-29b)，1.72(3H，s，H-30)；13C-NMR(150 MHz，CD3Cl3)δ：38.8(C-1)，27.5(C-2)，79.1(C-3)，38.9(C-4)，55.4(C-5)，18.4(C-6)，34.3(C-7)，40.9(C-8)，50.5(C-9)，37.3(C-10)，21.0(C-11)，25.2(C-12)，38.1(C-13)，42.9(C-14)，27.5(C-15)，35.6(C-16)，34.1(C-17)，48.4(C-18)，48.1(C-19)，151.1(C-20)，29.9(C-21)，40.1(C-22)，28.1(C-23)，15.5(C-24)，16.2(C-25)，16.1(C-26)，14.6(C-27)，18.1(C-28)，109.4(C-29)，19.4(C-30)。以上数据与文献报道的羽扇豆醇lupeol数据基本一致[13]。

化合物7：无色针晶。5%硫酸乙醇溶液加热显紫红色。与β-谷甾醇标样对照，其Rf值在多种展开剂中均相同，显色一致。由此推测该化合物为β-谷甾醇。