一例调入猪肉非洲猪瘟病毒检测

毛怀志 张艳红 康建生

（1，山西省动物疫病预防控制中心 030027；2，山西省畜牧遗传育种中心 030027）

非洲猪瘟（African swine fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒引起的猪的一种急性、热性、高度传染性疾病。该病病程短，死亡率高，对养猪业危害甚大，有着重要的社会经济学意义，2018 年8 月3 日我国非洲猪瘟疫情在辽宁首发，之后在多个省份相继发生。特别是2018 年10 月在山西省发生以来，由于对病猪和感染猪的扑杀，加之猪后续生产力不足，大幅度降低了猪肉产品的供应能力，造成猪肉价格持续上涨，人民生活消费上涨，引发一系列社会深层次问题。

为稳定市场供应，保证人民生活，确实做好山西省非洲猪瘟防控工作，山西省农业农村厅、公安厅等多部门积极配合进行非洲猪瘟防控，2019 年9 月山西省市场监督管理局下达2019 年加工流通环节非洲猪瘟病毒检测任务。山西省食品药品检验所对平遥县某有限公司外购生猪产品进行了非洲猪瘟抽样检测，9 月28 日，在抽检的两批共10 份猪肝样品中均检出非洲猪瘟疑似阳性。9 月29 日，经山西省动物疫病预防控制中心实验室检测确认为非洲猪瘟阳性。

1 材料

1.1 样品

样品来源：2019 年9 月19 日，根据山西省市场监督管理局下达2019 年加工流通环节非洲猪瘟病毒检测任务中，山西省食品药品检验所对平遥县某有限公司外购生猪产品进行非洲猪瘟抽样检测，9 月28 日，在抽检的两批共10 份猪肝样品中均检出非洲猪瘟疑似阳性。

1.2 仪器设备

宁波新芝48 位高通量组织研磨仪，美国精骐有限公司SY-1220 型恒温水浴槽，美国 Thermo 公司 Biofugestratos 型台式高速冷冻离心机，美国ABI 公司700 型24 孔全自动核酸提取仪，QuantStudio 7 实时荧光定量PCR 仪。

1.3 试剂

广州维伯鑫病毒总核酸提取试剂盒（磁珠法），批号2019032801；洛阳莱普生信息科技有限公司非洲猪瘟病毒实时荧光PCR 检测试剂盒说明书，批号P190434。

2 检测方法

2.1 样品处理

操作步骤：

（1）根据待检组织数量取n 个已加入1ml 的高压灭菌PBS（0.01M，pH7.2～7.4）或生理盐水无菌无 RNase 的 EP 管（n=待检样品数量，已加入灭菌钢珠）。

（2）每份组织分别从3 个不同的位置剪绿豆大小的组织，放入EP 管中密封，并进行标记，表面消毒备用。

（3）每取一个组织块，用2%～5%次氯酸钠溶液浸泡消毒剪镊等取样器械。

（4）组织样品的破碎利用组织研磨仪在生物安全柜外操作，使用高通量组织研磨仪进行研磨，参数为70Hz，120s，研磨2 次，将样品制成组织匀浆悬液。

（5）将研磨完成的组织匀浆置于60℃水浴中，灭活20～30min。

（6）灭活完成后，如果可吸取上清液，则无须进行离心处理；如无法顺利吸取上清液，则按照8000rpm 离心2min 进行处理。

2.2 病毒 DNA 提取

采用核酸提取仪进行DNA 提取，具体方法如下：

（1）提取试剂：广州维伯鑫病毒总核酸提取试剂盒（磁珠法），按试剂盒说明书加入提取试剂至96 孔板相应位置。

（2）按说明书，取待检样品，每份待检样品 50μl，加入 96孔板相应位置。

（3）以上操作应在二级生物安全柜中进行。

提取结束后将提取好的DNA 与-4℃保存备用。

2.3 荧光定量PCR 扩增

采用ASFV 特异荧光定量PCR 方法进行扩增ASFV VP72基因片段。PCR 体系为 20μl：ASFV qPCR 扩增反应液 17.5μl，模板 DNA 2.5μl。设立阴阳对照。密封反应管，瞬时离心，上机扩增，按照试剂盒荧光PCR 循环条件扩增。

3 结论

9 月29 日经山西省动物疫病预防控制中心实验室检测，确认为非洲猪瘟阳性。

4 处置

在样品检测结果确认后，省农业农村厅马上和省市场监督管理局组成联合督导组赶到平遥县，现场指导当地开展处置工作。

（1）对两批阳性生猪产品全部进行无害化处理。

（2）对被污染或可能被污染的冷库、物品、交通工具、用具、场地进行严格彻底消毒。

（3）对平遥县某有限公司由湖南省调入山西省的生猪产品情况进一步开展全面排查，消除扩散风险。

5 讨论

5.1 对养猪业的影响

养猪业是我国历史悠久、最主要的畜牧业产业，猪肉一直是我国人民的第一大肉食来源，我国也是世界上猪肉生产和消费第一大国[1]。山西省猪养殖业在畜牧业养殖生产中占有重要比重，2018 年10 月山西省发生非洲猪瘟疫情以来，生猪存栏量据不完全统计减少20%。所谓“猪粮安天下”，养猪生产不但为满足我国人民群众的消费需求起重要作用，而且在促进农民增收、保障农村劳动力就业和发展农村经济及推动相关产业等方面具有重要意义。

5.2 对人民生活的影响

猪肉价格已成为食品类甚至是中国物价的标杆[2]。由于生猪供应紧张，猪肉价格上涨，2019 年10 月山西省市场猪肉价格较2018 年底上涨2 倍左右，猪肉价格上涨导致其他畜产品价格也随之上涨，直接影响人民生活质量水平。

5.3 加强生猪及生猪产品的调运

能从猪肉产品中检出非洲猪瘟病毒说明ASFV 已形成一定的污染面。为做好山西省非洲猪瘟防控工作，要严格落实生猪及其产品指定通道运输制度，生猪及其产品调入山西省必须经指定通道运输，并加盖山西省动物及其产品指定通道专用章。

5.4 持续做好非洲猪瘟防控工作

目前国内ASF 疫情仍呈点状散发态势，因猪肉制品调入而传播ASF 的风险较高，因此，应警惕通过污染病毒的猪肉制品而引发疫情的可能[3]。鉴于目前ASF 防控形势仍较严峻，今后仍需重点排查养殖场、生猪交易市场、屠宰场等高风险场点，同时根据高速公路收费制度变化，及时调整生猪及其产品指定通道设置方案，科学设立监督检查站。