新城疫抗体测定中红细胞浓度对结果的影响

2019-12-28傅规玉

中国畜禽种业 2019年12期

傅规玉

（邵阳职业技术学院生物工程系 422004）

新城疫是由新城疫病毒引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。具有很高的发病率和病死率，是危害养禽业的一种主要传染病[1]。OIE 将其列为A 类疫病。我国将其列为一类动物疫病。新城疫的有效控制关键在于免疫接种和早期检测，准确检测是防控鸡新城疫的重要环节。而鸡新城疫抗体水平检测方法就是血凝和血凝抑制（HA 与HI）试验[2]。在血凝和血凝抑制（HA 与HI）试验中，用的指示剂就是1%红细胞，本实验主要研究1%红细胞浓度对鸡血清中新城疫抗体水平测定结果的影响。

1 试验材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要仪器

主要器材或设备，见表1。

1.1.2 主要试剂

主要试剂参见表2。

1.1.3 待测样品

1 号2 号样品为鸡新城疫标准阳性血清；

3 号4 号5 号6 号样品为鸡新城疫标准阳性血清做2 倍稀释；

7 号8 号9 号10 号样品为鸡新城疫标准阳性血清做4 倍稀释。

1.2 方法

1.2.1 红细胞的配置分为3 组

第一组：取1.5ml 的3.8%柠檬酸钠到一次性注射器中，健康公鸡静脉采血6ml，将抗凝血分装到3 个离心管中，2500r/min 离心5min，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复以上过程两次，用生理盐水分别配成1%红细胞悬液A，1.2%红细胞悬液B，0.8%红细胞悬液C。

第二组：取1.5ml 的3.8%柠檬酸钠到一次性注射器中，健康公鸡翅下静脉采血6ml，将抗凝血分装到3 个离心管中，用生理盐水洗涤3 次。(1) 第一管每次以2500r/min 离心5min，洗涤3 次后用生理盐水配成1%红细胞悬液A1。(2) 第二管每次以2500r/min 第一次离心5min，第二次离心5min，第三次离心8min，洗涤3 次后用生理盐水配成1%红细胞悬液A2。(3)第三管以2500r/min 三次都离心8min，洗涤3 次后用生理盐水配成1%红细胞悬液A3。

表1 主要器材或设备表

表2 主要试剂表

第三组：选2 只不同的公鸡，公鸡J1 是第一次被采鸡血，公鸡J2 是被多次采过鸡血。分别取0.5ml 的3.8%柠檬酸钠到一次性注射器中，(1) 在公鸡J1 翅下静脉采血2ml，将抗凝血装到1 个离心管中。将离心管中的血液经2500r/min 离心5min再配成1%红细胞悬液A3。（2）在公鸡J2 翅下静脉采血2ml，将抗凝血分装到1 个离心管中。将离心管中的血液经2500r/min离心5min 再配成1%红细胞悬液A4。

1.2.2 试验方法和判定标准

按照GB/T16550—2008 采用血凝和血凝抑制试验检测的操作方法进行规范操作，个体HI 价＞1：16 (即41og2) 为免疫合格，群体免疫效价≥70 为合格。

2 试验结果

参见表 3～5。

表3 第一组试验结果

表4 第二组试验结果

表5 第三组试验结果

3 讨论

理论上四单位抗原配制的浓度跟着红细胞走的。红细胞配得浓，四单位抗原相应会浓，红细胞配得稀，四单位抗原相应会稀。而在此种情况下做出来的HI 试验结果，同样的血清样品前者的滴度要低一点，后者高一些。但浓度相差多少会显示在结果上，这就是试验的意义。

（1）血凝和血凝抑制试验中样品血清没有变化，血凝抗原及阳性血清都相同，在组1 中，鸡红细胞浓度不同。在以1%、1.2%、0.8%鸡红细胞作为指示剂的HA 试验检测下，四单位抗原配制浓度是不一样的。A 是128 倍稀释，B 是64 倍稀释，C是256 倍稀释，在这种情况下检测出来的样品也会随着变化，显然，同样的配置方法下，1%红细胞浓度相差0.2%，造成血凝和血凝抑制结果出现差距。

（2）相同的转速、不同的离心时间洗涤红细胞，制备的红细胞悬液中所含的红细胞数目不同，3 次离心时间越长，血细胞压的越紧实，1%的红细胞实际浓度越高。应该是A3＞A2＞A1，但三者的浓度相差不大，在血凝结果和血凝抑制结果无差异。

（3）采不同公鸡血制备的1%红细胞A4、A5 在血凝和血凝抑制结果上出现+的差异，说明A4、A5 的红细胞实际浓度有差异，A5 的鸡血来源公鸡J2，J2 是被多次采过血，已经贫血，导致A5 的实际浓度偏低，偏低到引起血凝和血凝抑制结果出现+1 的差距。