血清β-D葡聚糖、半乳甘露聚糖、Cand-Tec抗原检测在侵袭性真菌病诊断中的应用价值

张 建

内蒙古自治区巴彦淖尔市医院检验科(巴彦淖尔015000)

侵袭性真菌病(Invasive fungal disease, IFD)是指真菌侵入机体的组织、血液后生长、增殖，造成组织损害、器官功能障碍以及各种炎症反应等病理改变和和病理过程。如果感染发生在深层组织患者临床并不会表现出明显的特异性，这就在很大程度上耽搁诊治的时间，增加治疗的难度，对患者生命安全造成严重的威胁[1]。近年来，随着研究的深入发现，发生IFD的患者普遍存在免疫力低下，基础疾病严重，合并有其他病原微生物感染，使用传统方法诊治具有难度，患者预后不良、病死率高[2]。由此可见，寻求特异性诊断手段成为改善患者预后的关键，传统的组织病理学或无菌腔道液体培养真菌阳性检出率低、耗时长，对准确诊造成困扰[3]。本研究中分析了血清β-D葡聚糖(βDG)、半乳甘露聚糖(GM)抗原、Cand-Tec抗原联合诊断IFD的应用价值，旨在为提高临床诊断准确率提供依据。

资料与方法

1 一般资料 将我院2017年8月至2018年7月期间收治的疑似侵袭性真菌病住院患者136例作为研究对象，根据相关诊断标准确定是否发生侵袭性真菌病分为感染组82例和未感染组54例，感染组男50例，女32例，平均年龄(53.75±6.84)岁；非感染组男32例，女22例，平均年龄(54.13±6.91岁)。两组一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。纳入标准：所有患者临床表现为体温超过37.5℃，使用广谱抗生素初步治疗5 d以上症状未改善，生化检查中性粒细胞持续性减少超过8 d以上，经影像学检查出现肺部感染或其他新发病灶。

2 研究方法 血清βDG：使用北京金山川科技发展公司生产的GK T25M Set动态真菌检测试剂盒进行诊断，首先使用真空采血管采集患者4 ml静脉血，使用3000 r/min的离心机离心5 min获得上层血清，吸取0.1 ml加入至0.9 ml样品处理液中，充分混匀后70℃孵育10 min，然后立即置于冰水混合物中5 min，吸取0.2 ml上述待检血清样品加入酶反应主剂中，然后转移到玻璃反应管，插入MB-80微生物快速动态检测系统进行反应，在90 min后获得血清中βDG的水平。

GM抗原：使用法国Marnes-la-Coquette公司生产的Platelia曲霉诊断试剂盒进行检测，操作步骤严格按照ELISA试剂盒说明书进行，最后在450 nm波长的酶标仪上进行读数，获得GM抗原的检测数值；

Cand-Tec抗原：使用美国Ramco Laboratories公司生产的Cand-Tec念珠菌检测试剂进行检测具体操作方法按照说明书进行。

3 统计学方法 使用SPSS19.0对获得的数据完成统计学分析处理，计算各种检测项目的灵敏度、特异度和符合度。以P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 三项指标单独诊断和联合诊断能力比较 感染组患者βDG阳性检出率为52.44%，GM阳性检出率为69.51%，Cand-Tec阳性检出率为80.49%，三者联合检出率为91.46，组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2 三项指标诊断能力分析 以βDG水平为20 pg/ml作为临界值时检测灵敏度为52.44%，特异度为86.59%，符合度为70.73%；GM以0.5作为临界值时灵敏度为69.51%，特异度为79.27%，符合度为75.61%；Cand-Tec检测灵敏度为80.49%，特异度为95.12%，符合度为85.37%，三者联合检测时灵敏度、特异度和符合度分别为95.12%，98.78%、92.68%，均明显高于三项指标单独检测值，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表1 三项指标单独诊断和联合诊断能力比较[例(%)]

表2 三项指标诊断能力分析[例(%)]

讨 论

βDG检测的是真菌的组成部分细胞壁上的主要成分(1-3)-β-5-葡聚糖，在人体感染真菌后会经过一系列免疫反应，βDG从真菌细胞壁中释放出来，量少的话会被机体清除。这种试验能够检测念珠菌属、曲霉属等多种真菌引起的侵袭性感染的诊断，但是并不能有效的进行菌种的鉴别诊断，在患者使用纤维素膜进行血液透析治疗、静脉输注过免疫球蛋白、凝血因子或其他血制品、原发链球菌血症和在处理标本时存在外界感染的状态下容易出现假阳性[4]。本研究结果显示，单独使用βDG检测的灵敏度为52.44%，特异度为86.59%，符合度为70.73%。

GM试验检测的物质是半乳甘露聚糖，用于侵袭性真菌感染的早期诊断，临床上进行造血干细胞的患者具有较高的诊断敏感性。该检测的主要原理是由于曲霉菌所特有的细胞壁多糖成分为β(1-5)呋喃半乳糖残基，在菌丝生长过程中该物质会从菌丝的最顶端释放出来，GM的含量和侵袭的真菌量呈正相关，因此，可反应出感染的严重程度[5-6]。但是如果患者使用过半合成的青霉素类抗生素药物、患儿为新生儿或儿童、合并自身免疫性肝炎等情况下容易出现假阳性[7]。但是曲霉菌将GM释放入血液循环中后并不会持续存在，在一段时间内很快被机体彻底清除掉，或者患者在检测之前使用了抗真菌药物、病情不严重等情况时极易出现假阴性的现象[8-9]。在进行临床经验回顾和总结时发现，有些医生对于IFD的高危人群或疑似患者未经确诊就给予广谱抗真菌药物控制病情的进展，这种操作在一定程度上会降低IFD的发生率，但是会严重影响非培养的检测结果[10]。目前我国制定的IFD诊治指南中已经将连续两次GM诊断阳性作为真菌感染的标准，但是在实际治疗过程中早期使用药物进行经验性治疗的过程中会对血清GM的水平产生影响，水平降低后会出现假阴性，因此这个指南中的部分内容需要进一步完善[11-12]。本研究结果显示，单独检测GM时的灵敏度为69.51%，特异度为79.27%，符合度为75.61%。

Cand-Tec抗原是念珠菌的结构蛋白抗原，对热不稳定，含有细胞壁甘露聚糖和胞壁抗原的成分，有学者从89例患者体内采集的130份标本使用Cand-Tec抗原和βDG抗原检测的结果进行比较发现，灵敏度和特异性相对较低[13]；十年前德国学者研究提出，使用乳胶凝集试验检测Cand-Tec抗原、间接血红素凝集试验检测抗体的截断值为1：16、1：640，诊断的灵敏度和特异度都不高，但是两者联合诊断的灵敏度高达100.00%[14]。本研究结果显示，Cand-Tec检测灵敏度为80.49%，特异度为95.12%，符合度为85.37%，该结果明显高于文献报道[15]，主要可能是由于经过长达十余年的时间中，诊断技术和设备都发生了出现了明显的进步，而且Cand-Tec抗原检测对特殊念珠菌的诊断具有特殊的意义。

βDG和GM抗原检测对象不是同一种物质，物质分泌过程和代谢水平之间存在差异，二者并不能相互取代。研究结果显示，三个项目检测联合后灵敏度、特异度和符合度分别为95.12%，98.78%、92.68%，均明显高于三项指标单独检测值，说明单独一项指标进行检测时会影响结果的准确度，而血清βDG、GM抗原和Cand-Tec抗原联合后会提高IFD诊断敏感性。

综上所述，血清βDG、GM抗原和Cand-Tec抗原联合应用能够提高IFD诊断的敏感度、特异度和符合度，均高于单独选择某种试验，在实际工作中建议三者联合使用，同时可结合其他检测方法和技术进行综合诊断进一步提高诊断的准确率。