硒和维生素E添加对梅花鹿营养物质消化率及血液生化指标的影响

■鲍 坤 王凯英 王晓旭 刘晗璐 李光玉

（中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物学国家重点实验室，吉林长春130112）

维生素E（VE）和硒（Se）均是动物机体所必需的营养因子，两者在动物生长发育、免疫和抗氧化方面具有协同、互补和增效作用。VE 作为防止过氧化物生成的第一道防线，在细胞外起抗氧化作用；而含Se的谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）作为第二道防线，在细胞内发挥作用。两者均有抗氧化和提高机体免疫力的重要生理功能，可在一定条件下相互替代（许友卿等，2012）[1]。

目前关于梅花鹿日粮硒和维生素E添加量的研究国内外未见报道，本试验通过不同水平硒和维生素E添加，通过对梅花鹿饲料营养物质消化率、硒元素留存情况及血液生化指标影响的研究，探讨梅花鹿日粮适宜的硒元素及VE的添加量，为全混合日粮（TMR）饲养技术在梅花鹿养殖中的应用提供理论依据。

1 材料与方法

试验于2015 年5 月12 日至7 月22 日，在中国农业科学院特产研究所茸鹿试验基地进行。

1.1 试验动物、日粮及试验设计

试验选用28头1岁雌性梅花鹿。试验开始前，试验动物进行为期7 d 的预饲期，饲喂无添加的基础日粮。在7 d预饲期后，选择出生日期相近、体重相近的鹿以3×2+1 因子的处理方式被随机分成7 个处理组（每组4 头）。其中硒3 个水平(0.2、0.3、0.4 mg/kg)，维生素E两个水平（100和200 IU/kg)，具体处理如下：①基础日粮不添加硒和维生素E(包含0.05 mg Se/kg;G0)；②基础日粮+0.2 mg Se/kg 和100 IU/kg VE，G1；③基础日粮+0.2 mg Se/kg 和200 IU/kg VE，G2；④基础日粮+0.3 mg Se/kg 和100 IU/kg VE，G3；⑤基础日粮+0.3mg Se/kg 和200 IU/kg VE，G4；⑥基础日粮+0.4 mg Se/kg 和100 IU/kg VE，G5)；⑦基础日粮+0.4 mg Se/kg 和200 IU/kg VE，G6。饲料级亚硒酸钠购于上海绿源精细化工厂，硒含量为1%，饲料级维生素E 购于浙江新和成股份有限公司，VE 含量为50%。试验日粮为全价颗粒料，亚硒酸钠及维生素E均于加工过程中添加。日粮组成及营养成分见表1，硒及维生素E添加量见表2。

1.2 饲养管理

在整个试验期内，试验鹿被饲养在10 m×20 m的鹿圈内，由固定人员饲喂，消除外界环境和管理不同对鹿产生的应激影响。试验鹿每日06：00、16：00 各饲喂一次，自由采食和饮水，其他均按照常规饲养管理方法进行。定时清理鹿粪，清扫鹿圈，保持适宜的饲养环境。

1.3 粪样采集及分析

预饲期7 d，试验持续60 d，试验期结束最后4 d进行消化试验。每天早上06:00按部分收粪法在鹿圈中多个点收集当天部分新鲜粪样，采集完的粪样用10%的稀硫酸固氮，然后在65 ℃下烘干，粉碎后过40 目筛备用。粪样的收集严格避免鹿毛、沙粒等污染，以免影响到测定结果精确度。主要营养物质含量的测定，参考《饲料分析与饲料质量检测技术》（张丽英，2003）[2]，各营养物质消化率采用2 N 盐酸不溶性灰分法进行测定，具体步骤参照《家畜饲养试验指导》（杨胜主编，1990）[3]。

表1 基础日粮组成及营养水平

表2 试验设计

1.4 血样的采集及测定

在进行消化代谢试验的前1 d，于早饲前颈静脉采血10 ml。其中2 ml 全血样本用于硒元素的检测，其余血液样品在凝血后3 500 r/min离心10 min，分离血清样品，分装于Eppendorf 管中于-20 ℃冰柜保存备用。血液指标用试剂盒测定，试剂盒购于南京建成生物工程研究所，按照说明书操作测定。

1.5 数据处理

数据采用统计软件SAS 9.1进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，差异显著性采用Duncan's 法进行多重比较，再采用GLM程序对数据进行多因子统计分析，数据以“平均值±标准差”表示，其中P＞0.05为差异不显著，0.01＜P＜0.05为差异显著，P＜0.01为差异极显著。

2 结果

2.1 硒和维生素E 添加对梅花鹿营养物质消化率的影响

硒和维生素E 添加对梅花鹿营养物质消化率的影响，测定结果见表3。

表3 硒和维生素E对营养物质消化率的影响(%)

如表3 所示，添加硒和维生素E 对七组日粮干物质、酸性洗涤纤维、钙、磷的表观消化率差异不显著(P＞0.05)。硒的添加水平对粗蛋白、粗脂肪和中性洗涤纤维的表观消化率有所增加，且达到差异显著水平(P＜0.05)。

2.2 硒和维生素E添加对梅花鹿血液生化指标的影响

硒和维生素E 添加对梅花鹿血液生化指标的影响，测定结果如表4所示。

表4 硒和维生素E对血液生化指标的影响

如表4 所示，硒水平和VE 水平对七组动物的血清白蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶的影响不显著(P＞0.05)。G3 组的总蛋白含量显著高于G0 组(P＜0.05)。硒和VE的添加使谷胱甘肽过氧化物酶活性显著增加(P＜0.05)。硒水平显著影响了三碘甲腺原氨酸和甲状腺素的含量(P＜0.05)。硒和维生素E的协同影响不显著(P＞0.05)。

2.3 硒和维生素E添加对硒含量的影响

硒和维生素E添加对硒含量的影响，测定结果见表5。

表5 硒和维生素E添加对硒含量的影响

如表5所示，全血硒及毛发硒含量达到极显著差异水平（P＜0.01），粪硒的含量达到差异显著水平（P＜0.05）。硒的添加显著影响了全血硒、毛发中硒元素含量及粪硒含量（P＜0.05）。VE 添加水平及硒和VE的协同对硒元素含量的影响不显著（P＞0.05）。

3 讨论

对于硒和VE添加水平对梅花鹿营养物质消化吸收的影响方面，没有公开发表的数据。在本试验中，硒元素添加对粗蛋白、粗脂肪及中性洗涤纤维的表观消化率影响显著。这可能是由于纤维素分解菌的活性和数量提高引起的。之前在其他动物上也有相似的研究结果。Shi(2011)研究发现，日粮中添加纳米硒，改善了羊对干物质、有机物、粗蛋白、粗脂肪、中性洗涤纤维及酸性洗涤纤维的消化率[4]。Wang（2009）研究表明，奶牛日粮中添加0.15、0.3、0.45 mg/kg 硒元素，中性洗涤纤维的消化率呈线性增加[5]。董升(2005)研究证明，日粮中硒水平在0.2～0.5 mg/kg 时，能够明显提高粗纤维的降解率[6]，原因可能是一些微量元素能够促进瘤胃中纤毛虫和某些菌落的新陈代谢，增加数量，调节瘤胃与肠道的发酵功能，促进乳酸菌、纤维素菌群繁殖能力，提高其活性，进而瘤胃消化性能得到提升[7]；还有可能是因为硒将反刍动物瘤胃中硫氨基酸经过硒-硫取代反应,生成硒氨基酸，再合成具有硒的蛋白质，提高了营养物质在机体内的利用效率[8]；并且酵母硒中存在充足的谷胱甘肽、维生素B 族、无机酸盐和酵母蛋白等，通过产生酶的作用（有活性的酵母细胞能够产生蛋白酶、纤维素酶等）来提高机体肠道消化酶的活性，增加营养物质的消化率。

血清白蛋白由肝脏合成，是机体蛋白质来源之一，总蛋白是白蛋白和球蛋白之和，可作为蛋白质代谢的指标。由于硒和维生素E的添加改善了氮平衡，能有效保护心脏和肝脏免受氧化损伤，所以提高了血清白蛋白含量，总蛋白含量也呈升高的趋势。GPT、GOT在氨基酸代谢方面及在蛋白质、脂肪和糖三者的转换过程中占有极其重要的地位，是机体代谢过程中的关键酶。正常范围内2 种酶活性仅仅由于细胞的不断更新而释放于血液中，因此其活性升高或降低可反映营养物质在体内代谢的变化，超出正常范围则反映心肌、骨骼肌和肝脏的各种损伤，即细胞内酶由于生物膜的损伤而逸出引起。已有资料证明牛缺乏硒和维生素E 能引起GOT 和GPT 活性提高[9]。硒是GSH-Px 的组成成分，同时硒和维生素E 在生物抗氧化性方面具有互补性。GSH-Px 是机体内主要的抗氧化酶系,它能使有毒过氧化物还原成无毒的羟基化合物，同时促进H2O2分解。最终使自由基数量减少和生成易被机体代谢的产物，从而保护细胞膜的结构及功能免受过氧化物的损害和干扰；添加不同水平硒可明显提高鹿机体的抗氧化能力。这与大多数研究结果相一致[10-12]。

甲状腺激素具有促进新陈代谢和发育、提高神经系统兴奋性等作用，在生长方面与GH 起协同作用。含硒的脱碘酶（IDI）及其功能（促进T4 向T3 的转化）的发现，揭示了硒可通过甲状腺激素作用于机体代谢。T3参与调节戊糖磷酸循环酶，并与动物的GH合成有关，促进智力与体质的发育。动物缺硒能引起IDI 的活力下降，降低了T4 向T3 的转化速度,使血液T4含量上升而T3下降，导致动物生长缓慢[13]。本试验研究发现，硒水平显著影响T4 和T3 的浓度(P＜0.05)，秦顺义（2007）研究发现，给健康滩羊羔羊日粮中分别添加含硒量0.1 mg/kg 的富酵母硒和亚硒酸钠，在试验第30 d 和60 d 时，富酵母硒组和亚硒酸钠组的T3浓度显著高于对照组（P＜0.01），T4浓度显著低于对照组（P＜0.05）[14]。这与本试验所得的结果相似。

在其他动物上也有相关的研究报道。张伟明[15]研究了饲粮添加不同水平硒对笼养蛋雏鸭(0～4周)生长性能及生化指标的影响，研究结果表明，随日粮硒水平的增加，血清T3 活性和生长激素水平呈先升高后降低的趋势，而T4 活性和皮质醇则随硒水平的升高均呈先降低后升高的趋势。林长光等[16]通过对断奶仔猪的研究结果认为，随着日粮中硒水平的提高，血清中T3浓度也随着升高，而T4浓度随之下降，促进了仔猪的生长。综合各项指标分析纳米硒和酵母硒的添加水平为0.5 mg/kg和0.7 mg/kg效果较好。林金玉等[17]研究表明，硒源对哺乳母猪和哺乳仔猪血清T3、T4质量浓度的影响极显著；纳米硒组母猪血清T3质量浓度比对照组、亚硒酸钠组和酵母硒组依次提高了29.52%、17.24%和23.63%；纳米硒组母猪血清T4质量浓度比对照组、亚硒酸钠组和酵母硒组依次降低了24.71%、30.88%和33.86%。

大量试验证明，硒元素能够提高动物的代谢功能，并且刺激机体生长繁育，是动物机体必需的微量元素之一。本试验证明，与未补硒组相比，日粮中添加适量的亚硒酸钠能显著提高血液中硒元素含量。Gunter等研究发现，在牛日粮中添加一定量的硒能显著或极显著提高其全血硒含量。与本研究结果相同。动物被毛中的硒含量可作为诊断动物缺硒病的一种指标，对研究机体硒营养状况具有一定的意义。本试验中，对照组梅花鹿被毛硒含量为0.015 mg/kg，日粮添加亚硒酸钠后，毛中硒的含量呈上升趋势，显著高于基础日粮组，表明添加亚硒酸钠促进了硒的代谢，增加了其在毛中的沉积。

4 结论

添加亚硒酸钠对梅花鹿日粮粗蛋白、粗脂肪及中性洗涤纤维的表观消化率影响显著；添加亚硒酸钠及维生素E 显著影响了血清总蛋白含量、GSH-Px 活性以及T4、T3 的含量；硒的添加提高了硒的代谢水平，促进了硒在血液及毛发中的沉积。