川优6203室内快速测纯方法研究

张 霞，陈辉志，钟光跃

（1.思南县思唐街道办事处，贵州 铜仁 565100；2.贵州山至金生态农业有限公司，贵州 遵义 563100；3.四川华丰种业有限责任公司，四川 成都 610066）

川优6203是四川省农业科学院作物研究所以优质不育系川106A与抗病恢复系成恢3203配组育成的优质高产香型杂交水稻新组合，其稻米品质达到国家《优质稻谷》标准2级[1]。其于2011年和2014年分别通过四川省审定（审定编号：川审稻2011002）、湖北省审定（审定编号：鄂审稻2014007）和国家审定（审定编号：国审稻2014016）[2]。在四川省2013—2014年度和2014—2015年度现代农业发展项目72个县推广川优6203杂交水稻面积达15.3万hm2。自推广以来，深受广大农户喜爱。但由于制种过程中有不可控因素，使其杂种一代种子纯度可能不高，导致种子公司与客户发生纠纷[3]。如何快速准确地测定其纯度，一直是困扰种子企业的一大难题。本地正季鉴定水稻纯度费时长，容易错过种子销售季节；海南异地鉴定，结果差异大。DNA指纹图谱法对技术人员素质要求高，成本大。

笔者通过试验证明：低温下的酯酶同功酶电泳法可以很好地显示与区分杂交水稻川优6203的亲本与杂种一代，且属于典型互补谱带类型，可以用作川优6203的纯度检验。

1 材料与方法

1.1 试验材料与仪器设备

供试材料为川106A、成恢3203和川优6203杂交一代。试验所用仪器为DYY-12型电泳仪、DYY-Ⅲ36型平板电泳槽、水稻剥壳机。

1.2 试验方法

1.2.1 试剂的配取

提取液：20%蔗糖溶液。凝胶液：丙烯酰胺6 g+双丙烯酰胺0.2 g+蔗糖4.4 g+1%过硫酸氨1 mL+两性电解质4.5 mL定容至100 mL。电极缓冲液：正极1 mol/L磷酸溶液；负极1 mol/L氢氧化钠溶液。染色缓冲液：甘氨酸2 g+乳酸1 125 μL定容至1 000 mL。染色液：0.05 g固蓝RR盐/100粒+0.1 g乙酸-α-萘酯/100粒用染色缓冲液溶解。

1.2.2 试验步骤剥壳：将种子用剥壳机剥壳，并在清水中浸泡2 h。提取：取剥壳并浸泡后的水稻种子，每粒加提取液l mL捣碎，放置于4℃冰箱中提取10 h。

灌胶：凝胶定容至100 mL，凝胶长23 cm、宽8 cm、厚0.2 cm。

点样：用2 cm×0.2 cm滤纸条蘸取样液放在凝胶的靠近正极处，每块凝胶可点50粒种子。

电泳：50 V电泳1.5 h，220 V电泳2 h，最后高压580 V电泳1.5 h。

染色：染色10 min。染色完成后冲洗干净即可直接观察结果。

2 结果与分析

从图1中可以看出母本川106A具有上面2条带；父本成恢3203具有下面4条带，而杂种一代川优6203具有5条带。除第二条带外，其余带谱互补，故可以用作川优6203的纯度检验。

图1 川优6203酯酶图谱

3 讨论

（1）进行电泳操作，在室温高于8～9℃时，应该在冰箱中进行。

（2）此法对试验仪器、试验人员要求低，一般初中以上文化程度经过短期培训就能顺利完成。

（3）此法只能用于检测川优6203中川106A和川106B的比例，而不能检测出杂交种之间相互混杂的情况。所以，使用这种方法还需要和田间检验相结合，这样才能达到好的效果。

（4）本文改良了酯酶同功酶电泳法提取水稻胚乳中的同工酶，使鉴定时间大大地缩短，从原来的7 d缩短至1 d。而且，由于胚乳中的同工酶含量较多、染色较深，从而使得染色时间更短、染色更清晰，更易判断。