P63与ki-67蛋白的表达及与宫颈病变程度的关系

任健 王泽

宫颈病变系宫颈区域发生的各种病变，其包括肿瘤、癌前病变等，宫颈癌前病变是导致宫颈癌发生的前提条件，宫颈上皮内瘤变（Cervical intraepithelial neoplasia，CIN）是与子宫颈浸润癌密切相关的一组宫颈病变，大多数CIN I患者可自然消退，少数会进一步发展，最终极少数可发展为浸润癌，因此，及时有效筛查CIN是预防宫颈癌的有效措施[1-3]。近年来研究发现P63和ki-67蛋白表达在不同宫颈病变程度上具有差异，不过相关报道尚少[4-5]。为进一步证实上述结论，本研究择取2015年2月—2017年8月行宫颈活检患者200例，分析P63与ki-67蛋白在宫颈病变组织的表达及与病变程度的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

对广元市第一人民医院2015年2月—2017年8月行宫颈活检患者200例的病理资料进行分析。200例行宫颈活检患者年龄35～71岁，平均年龄（48.21±4.57）岁；CIN I级37例，CIN II级46例，CIN III级47例，浸润癌70例。70例浸润癌患者病理分级为G1级15例，G2级43例，G3级12例；依照国际妇产科联盟（FIGO）分期标准进行分期包括：Ia期9例，Ib期29例，IIa期18例，IIb期14例。另选取40例正常宫颈上皮组织者作为对照，年龄36～72岁，平均年龄（48.37±5.16）岁。两组临床资料差异无统计学意义（P＞0.05），存在可比性。

1.2 方法

采用SP法进行免疫组化染色，DAB显色。石蜡切片脱蜡水化后进行微波抗原修复，采用过氧化酶阻断剂灭活内源性过氧化物酶活性，以免疫组化封闭液封闭，滴加第一抗体，并在4℃温度下处理，然后滴加生物素标记的二抗，滴加链亲和素-过氧化物酶溶液。采用DAB进行显色，苏木素复染。阳性对照采用已知阳性组织切片，阴性对照采用PBS代替一抗。试剂采用鼠抗人P63单克隆抗体和鼠抗人ki-67单克隆抗体，DAB试剂盒来自于福州迈新生物技术开发公司，SP试剂盒购自于北京中杉生物技术开发公司。

1.3 结果评价

通过显微镜观察细胞核，发现棕黄色颗粒，即为P63和ki-67阳性细胞。对每张切片随机观察5个高倍视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，以此进行阳性病例判断。无棕黄色染色或染色阳性细胞数低于10%为阴性（-）；阳性细胞数在10%～25%为弱阳性（+）；阳性细胞数在26%～50%为中等阳性（++）；阳性细胞书在50%及以上为强阳性（+++）；阳性细胞数在10%及以上即可判定为阳性病例。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0软件分析数据，计数资料采用χ2检验，采用（%）表示，采用Pearson相关性分析法进行分析，P＜0.05，差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同类型宫颈病变组织中P63和ki-67表达情况

CIN、宫颈癌患者的P63、ki-67表达阳性率高于正常组织，而宫颈癌患者的P63、ki-67表达阳性率较CIN患者高，差异均有统计学意义（P＜0.05）；CIN I、CIN II、CIN III、宫颈癌患者的P63、ki-67表达阳性率差异具有统计学意义（P＜0.05），见表 1。

表1 不同类型宫颈病变组织中P63和ki-67表达情况

2.2 P63和ki-67在宫颈组织中表达的相关性分析

经Pearson相关性分析表明，P63与ki-67蛋白表达与宫颈病变程度呈正相关性（r=0.642、r=0.721，P均＜0.05），提示随着宫颈病变的进展，P63与ki-67蛋白阳性表达率也逐渐增强。

3 讨论

宫颈病变的筛查诊断一直是临床重要研究课题，及时明确诊断有助于预防宫颈癌，近年来研究发现P63基因，P63是P53基因家族新成员，主要于染色体3q27～3q29区，其存在于许多上皮组织基底层中，且表现为高表达，再经过转录之后产生TAp63和△Np63两种产物，其中△Np63可能存在癌基因作用，通过将同源野生型P53活性下调来参与肿瘤形成及对相关细胞凋亡进行抑制[6-8]。Ki-67是与增殖细胞相关的一种核抗原，存在于增殖细胞之中，参与细胞周期调控，由于其具有半衰期短的特性，且阳性表达可覆盖于整个有丝分裂期，因此能够将细胞增殖活性较好反映出来[9-10]。

P63和ki-67蛋白是近年来在宫颈病变诊断中受到广泛关注的指标，已有研究发现两者在不同宫颈病变类型中表达不同[11]。有学者研究中显示[12]，CIN I、CIN II、CIN III及宫颈癌患者中P63和ki-67蛋白的阳性表达率高于正常组织，CIN III和宫颈癌阳性表达率高于CIN I和CIN II，宫颈癌阳性表达率比CIN III高。而本研究结果显示，CIN、宫颈癌患者的P63、ki-67表达阳性率高于正常组织，CIN I、CIN II、CIN III、宫颈癌患者的P63、ki-67表达阳性率均有差异，提示P63和ki-67随着宫颈病变的进展其阳性表达率逐渐上升，经相关性分析显示，P63与ki-37与宫颈病变呈正相关性，与上述研究结果相符。

综合上述，P63与ki-67蛋白的阳性表达可预测宫颈病变，且P63与ki-67蛋白阳性表达与宫颈病变严重程度呈正相关性。