荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA和ELISA法检测乙肝病毒标志物的临床价值

刘 娇 王大明 宋春丽 刘 青 肖利佳 柯娟玉

南方医科大学深圳医院临床医学检验中心，广东深圳 518000

乙肝作为一种病毒性肝炎，是我国临床上一类传染性疾病，对患者的生命健康造成极大威胁[1-2]。在对该项疾病进行诊断时，主要是采用HBV-M诊断方法，来判定患者的病情严重及传染度情况，通过检测结果能够直观的反映出患者的免疫应答状态[3-4]。近年来，随着生物学及医学领域的快速发展，RT-PCR被广泛应用于临床疾病诊断中，能够高效的检测出乙肝患者的各项指标，为临床治疗工作的开展提供可靠的依据[5-6]。本文将4355例乙肝患者作为研究对象，探究荧光定量PCR法及ELISA法在乙肝病毒DNA（HBV-DNA）和乙肝病毒标志物（HBV-M）中的临床诊断价值，现报道如下。

1 资料及方法

1.1 一般资料

本研究选取于2016年1月～2018年2月在本院检测出来的乙肝患者共4355例，男2532例，女1823例，年龄6～68岁，平均（42.3±2.5）岁。身高108～180cm，平均（162.3±2.5）cm；体重为16.2 ～ 100kg，平均（50.0±3.5）kg。在本次检测中，所使用的检测仪器为基因扩增分析仪（厂家：伯乐Bio-Rad，型号CFX96），ELISA试剂盒（默沙克生物apom）。纳入标准：（1）经诊断，患者被诊断为乙肝病毒患者，在近期内未接受抗病毒治疗者；（2）患者自愿参与到本次调查中，并签署知情同意书者。排除标准：（1）患有严重精神疾病者；（2）同时伴有甲、丙、丁等其他类型的肝炎患者；（3）并发囊肿及恶性肿瘤患者；（4）存在严重心脑血管疾病患者。

1.2 方法

在本次检测中，主要是采用HBV免疫学检测方法，使用ELISA法对患者进行HBV-M模式的定性检测，检测的乙肝病毒主要包括乙型肝炎e抗体、乙型肝炎病毒表面抗原、乙肝表面抗体等，在对检测结果进行对比时，主要是运用酶标仪进行比色，在开展一系列的操作工作时，要求严格按照试剂说明书的要求，对检测结果进行评定。在操作过程中应严格按照说明书中的评定结果及检验操作要求做好各项操作。采用HBV-DNA定量测定方法，使用FQ-PCR法测定患者的病毒水平，使用Roche LightCycler480型号的仪器，及FQ-PCR试剂盒，将试剂盒的定量测定范围控制在103-107copies/mL，在开展操作时，应严格按照说明书的内容进行操作，以确保检测结果的真实性及可信性。按照阴阳性进行分组，分成大三阳及小三阳。其中，大三阳包括：[1（+）、3（+）、5（+）]。小三阳包括：[1（+）、4（+）、5（+）模式 ]、[1（+）、4（+）模式 ]、[1（+）、3（+）模式 ]、[2（+）、4（+）、5（+）模式 ]、[2（+）、4（+）模式 ]、[5（+）模式 ]、[4（+）、5（+）模式 ]。

1.3 观察指标[7]

观察在 1（+）、3（+）模式，1（+）、4（+）模式，1（+）、3（+）、5（+）模式，1（+）、4（+）、5（+）模式，2（+）、4（+）模式，2（+）、4（+）、5（+）模式，4（+）、5（+）模式，5（+）模式等不同 HBV-M 模式下，各组间的阳性率；观察在不同的HBV-M模式下，HBV-DNA含量分布情况。

1.4 统计学处理

本研究数据通过SPSS18.0软件统计处理，计量资料以（±s）表示，采用t检验，计数资料以百分数表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同HBV-M模式下RT-PCR阳性的检测结果比较

4355 例乙肝患者，1（+）、3（+）、5（+）模式的阳性率最高，与其他组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 不同HBV-M模式下检测结果比较

2.2 不同模式下HBV-DNA含量分布情况

4355 例乙肝患者，1（+）、4（+）、5（+）模式的患者数量最多，2（+）、4（+）模式患者数量最少，与其他组间对比有差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 不同模式下HBV-DNA含量分布情况

3 讨论

乙肝是临床上一项常见的疾病，通过检验，乙肝病毒呈阳性者，在临床上表现出慢性肝炎的患者，病程时间超过发病日期或半年者[8-9]。患者的临床症状表现出腹胀、畏食、乏力、恶心、腹胀等症[10-11]。通过对该项疾病的发病原因进行了解可知，HBV携带者及乙型肝炎患者是疾病的主要传染源，传染源为血液制品、血、母婴、皮肤黏膜及性接触传播等[12-13]。为了提升疾病治疗效果，需要做好临床诊断工作。传统的乙肝病毒检查方法无法直接的反映出患者疾病的具体情况，无法为乙肝疾病的治疗提供可靠的依据。目前，临床上乙肝病毒主要采用荧光定量PCR法及ELISA法，为乙肝病毒的高效治疗提供依据。PCR法在使用过程中能够有效的检测出患者机体内的HBV-DNA水平，可以早期病毒扩增，为患者提供指导用药，但是也存在一定的窗口期。而ELISA检测方法能够直观的反映出乙肝患者机体的免疫应答状态，检测灵敏度高，能够直观的反应出患者疾病的具体情况[14]。

本文共选取4355例乙肝患者，将HBV-M模式公分为 1（+）、3（+）模式，1（+）、4（+）模式，1（+）、3（+）、5（+）模式，1（+）、4（+）、5（+）模式，2（+）、4（+）模式，2（+）、4（+）、5（+）模式，4（+）、5（+）模式，5（+）模式8种模式，本文表1中研究结果显示，1（+）、3（+）、5（+）模式的阳性率最高，2（+）、4（+）模式，4（+）、5（+）模式，5（+）模式的阳性率为0，与其他组间对比差异有统计学意义（P＜0.05）。本文表2中研究结果显示，4355例乙肝患者，1（+）、4（+）、5（+）模式的患者数量最多，2（+）、4（+）模式患者数量最少，与其他组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。此项研究结果说明在患者机体内的HBV-DNA水平判断上，PCR能够直观的反映出患者的机体水平，而ELISA完成了对患者HBV-M的判断，对两种方法联合使用，为临床确诊及治疗工作提供了指导性意义。

综上所述，在患者病情不严重及传染度低的情况下可采用传统测量方法。反之则需要使用PCR法联合ELISA法。在不同的HBV-DNA定量测定模式下，所测量出来的阳性率及HBV-DNA水平存在着一定的差异，为了提升乙肝病毒的临床诊断准确率，在乙肝病毒DNA（HBV-DNA）和乙肝病毒标志物(HBV-M)中的临床诊断中，应采用荧光定量PCR法及ELISA法，为乙肝病毒的高效治疗提供依据。尤其是在患者抗体的窗口期，使用PCR联合ELISA检测方法，有助于确保输血的安全性。