PARP-1在三阴乳腺癌细胞中的表达及与Ca153和CEA的临床相关性研究

林丹丽，陈机琼，冯慧艳，邹享珍，刘妙娥，王毅轩，邹前福

(东莞樟木头医院 检验科，广东 东莞523633)

乳腺癌的发病率逐年升高[1，2]，治疗主要以综合治疗为主，只有当肿瘤细胞相应的激素受体如人类表皮生长因子受体2(HER-2)、雌激素受体(ER)或孕激素受体(PR)蛋白阳性表达时，乳腺癌的靶向治疗或者全身治疗药物才能够发挥抗肿瘤的作用[3]。三阴乳腺癌(TNBC)是指HER-2、ER和PR表达状态均呈阴性的乳腺癌亚型[4]，它的复发率和转移率较高，患者的生存时间较短，预后也较其他类型的乳腺癌患者差，而且不能从靶向治疗和内分泌治疗中受益[5]。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)是真核细胞内的聚ADP核糖聚合酶，在DNA的损伤修复中具有重要作用[6]。本研究对PARP-1在60例三阴乳腺癌患者细胞中的表达及与Ca153和CEA的临床相关性进行研究，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2017年1月到2018年2月在本院，广州金域医学检验中心和周边医院检验科已经诊断为三阴乳腺癌的60例患者作为研究对象。年龄26-68岁，平均年龄(61.93±7.11)，其中18例为低分化(3级)，26例为中分化(2级)，16例为高分化(1级)。纳入标准：符合乳腺癌相关诊断标准且经免疫组织化学法证实ER、PR和HER-2均为阴性表达。排除标准：在采集标本之前接受过化疗、放疗或者其他治疗；含有其他可能影响该研究结果的疾病者；有其他恶性肿瘤者。另选取30例非三阴乳腺癌的患者作为对照组，年龄25-68岁，平均年龄(61.54±7.27)岁，其中7例为低分化，16例为中分化，7例为高分化。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。所有患者均签署知情同意书且该方案已经获得伦理委员会的批准。

1.2 方法

利用免疫组织化学染色技术将两组患者的乳腺组织固定脱水后用石蜡包埋制成厚约4.0 μm的切片，然后采用SP法检测PARP-1的表达水平。单克隆抗体PARP-1购于Santa Cruz公司，SP法检测试剂盒购于北京中杉金桥公司，按试剂盒说明书进行操作。使用磷酸盐缓冲液(PBS)溶液代替一抗作为阴性对照，阳性样本片作为阳性对照。在高倍镜下观察样本，每个视野计数100个肿瘤细胞，每张切片观察5个视野。

1.3 观察指标

细胞核或者细胞质内出现棕黄色颗粒时为阳性反应，发生阳性反应的细胞为阳性细胞。阳性反应的强度根据染色的深浅和视野内阳性细胞所占的比例进行判定。按染色深浅I进行评分：阴性为0分；黄色为1分；棕黄色为2分；棕色为3分。按视野内阳性细胞所占百分比P进行评分：>75%为4分；>50%-75%为3分；5%-50%为2分；5%-25%为1分；≤5%为0分。PARP-1表达水平分值S=P×I[7]。S值<3分为阴性表达，S值≥3分为阳性表达，其中最高分为12分。

1.4 统计学分析

本研究所有数据均采用SPSS 20.0软件进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，相关性分析采用Pearson相关分析。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 三阴乳腺癌和非三阴乳腺癌细胞中PARP-1的表达

三阴乳腺癌细胞中PARP-1表达及阳性率较非三阴乳腺癌细胞中高，两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 PARP-1在TNBC和NTNBC细胞中的表达(例数，%)

2.2 PARP-1与Ca153在三阴乳腺癌细胞中表达的相互关系

三阴乳腺癌细胞中PARP-1与Ca153的表达呈正相关(r=0.52,P<0.05)。见表2。

表2 三阴乳腺癌细胞中PARP-1与Ca153表达之间的相关性

2.3 PARP-1与CEA在三阴乳腺癌细胞中表达的相互关系

三阴乳腺癌细胞中PARP-1与CEA的表达呈正相关(r=0.26,P<0.05)。见表3。

表3 三阴乳腺癌细胞中PARP-1与CEA表达之间的相关性

3 讨论

乳腺癌在临床上较为常见，是女性最常见的恶性肿瘤之一。三阴乳腺癌的恶性程度高，淋巴结转移率和复发率也较高，预后较差，对女性的生命健康造成严重威胁。目前临床上尚未出现对三阴乳腺癌有效的靶向治疗和全身治疗方法。

PARP-1是PARP家族中最有特点和含量最多的一员，它的本质是核蛋白酶，可以在除中性粒细胞外的人体所有有核细胞中表达。PARP-1对DNA断端敏感性高，与DNA断端结合后被激活，启动DNA损伤修复系统，修复损伤DNA。PARP-1的高表达可见于所有类型的乳腺癌[8-11]，其中以在ER、PR或HER2阴性的乳腺癌中PARP-1的高表达更为明显[12]。本研究结果显示，PARP-1在三阴性乳腺癌细胞中阳性表达率为66.67%，在非三阴乳腺癌细胞中的阳性表达率为13.34%，两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。血清Ca153水平常在乳腺癌中过度表达,被公认为乳腺癌较为特异的肿瘤标志物[13]。CEA常用于乳腺癌、肺癌、消化道肿瘤和胰腺癌等辅助诊断，因为它是一种非特异性的肿瘤标志物，所以常常与其他肿瘤标志物联合检测[14],还有文献表示CEA对乳腺癌的诊断治疗、疗效和预后的观察有一定意义[15]。相关性分析发现，在三阴乳腺癌细胞中PARP-1与Ca153和CEA均呈正相关(r分别为0.52、0.26，P<0.05)，说明PARP-1可用于乳腺癌特别是三阴乳腺癌的诊治和预后判断中。

综上所述，PARP-1在三阴乳腺癌细胞中高表达且与Ca153和CEA的表达均呈正相关。