乳腺癌根治术患者miRNA-23a表达水平与术后复发转移的关系

周永安,赵德庆

(鄂东医疗集团黄石巿中心医院(湖北理工学院附属医院)，1.乳腺肿瘤外科，2.胸部肿瘤内科，湖北 黄石435001)

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，乳腺由皮肤、纤维组织、乳腺腺体和脂肪组成，其原位癌不致命，但若未及时治疗，其易发生转移而侵袭心、脑、肺等重要器官，危及女性生命健康[1]。目前，外科根治手术是乳腺癌主要的治疗方法，可有效的切除患者的肿瘤组织而抑制癌细胞扩散，但仍有部分患者因病情恶化而出现复发转移，因此评估其预后逐渐受到关注和重视[2]。近年来，相关研究显示，miRNA乳腺癌的发生、发展及治疗、预后关系密切[3]。而miRNA-23a是机体中常见的miRNA之一，其在调节细胞增殖、存活、肿瘤血管生成、入侵和转移中具有重要作用，但关于其与乳腺癌根治术后复发转移的关系研究较少[4]。对此，本研究通过检测乳腺癌根治术患者miRNA-23a表达水平，探讨其与术后复发转移的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1研究对象选取2013年3月至2016年3月本院收治的乳腺癌根治术患者160例，纳入标准：①术后病理学证实为乳腺癌，②无其他原发性恶性肿瘤，③年龄>18岁、无精神病病史，④签署知情同意书；排除标准：①妊娠及哺乳特殊人群，②乳腺癌根治术失败或未获得癌症组织者，③有心、肝、肾等严重性原发性疾病，④资料均收集不完整；本次研究已经我院伦理委员会审批且通过，通过电话、复诊等方式随访2年并依据复发转移情况分为复发组(n=50例)和未发组(n=110例)。

1.2方法

1.2.1主要试剂和仪器 miRNA-23a和内对照引物、cDNA第1链合成试剂盒、miRNA提取分离试剂盒及荧光定量检测试剂盒均购自北京天根生化科技有限公司，反转录试剂盒、Perfect Real time染料法实时荧光定量试剂盒均购自美国Invitrogen有限公司，其余试剂和仪器均购自美国Invitrogen公司，其中各基因引物序列及扩增产物长度见表1。

表1 不同基因引物序列及其扩增产物长度

1.2.2miRNA-363检测 从冷藏库选取病理科提供的乳腺癌组织解冻后，采用液氮研磨法磨成粉末，取3 ml通过miRNA提取分离试剂采用TRIzol一步法提取总RNA、反转录合成cDNA，将1 μl的cDNA置于10 μl反应体系中94℃扩增2 min，胶回收法纯化 DNA 片段为标准品，通过实时荧光定量聚合酶联反应法(RT-PCR)[5]检测miRNA-23a表达水平，以U6为内参物，标准曲线法计算miRNA-23a相对表达量(U6校正值)，所有操作均由同一组医护人员在严格依据试剂盒相关说明书的规定下进行。

1.2.3观察指标和标准 观察和比较两组临床资料及miRNA-363表达水平，其中miRNA-363相对表达量以 U6sn RNA 作为内参，以2-△△CT法计算相对表达量， △△CT=(CT目的-CT内参)实验-(CT目的-CT内参)对照，CT 值为反应过程中实时荧光强度达到设定的阈值时所经过的扩增循环数[5]。

2 结果

2.1患者术后复发转移关系的单因素分析

单因素分析结果显示，复发组和未发组肿瘤类型、直径、TNM分期、淋巴结转移、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)、miRNA-23a表达水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)，两组年龄、月经状态比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

2.2乳腺癌根治术患者术后复发转移独立影响因素的Logistic回归性分析

Logistic回归性分析显示，肿瘤类型、直径、TNM分期、淋巴结转移、ER和PR、miRNA-23a表达水平是患者术后复发转移的独立影响因素，且在校正肿瘤类型、直径、TNM分期、淋巴结转移、ER和PR等因素后，miRNA-23a表达水平仍是患者术后复发转移的独立影响因素(P<0.05)，见表3。

表2 患者术后复发转移关系的单因素分析[n(%)]

表3 乳腺癌根治术患者术后复发转移独立影响因素的Logistic回归性分析

2.3miRNA-23a表达水平评估患者术后复发转移的ROC曲线

ROC曲线显示，miRNA-23a表达水平以<1.0评估患者术后复发转移的敏感度、特异度、准确度、曲线下面积为92.00%(46/50)、96.36%(106/110)、95.00%(152/160)、0.882，一致性良好(K=0.821，P<0.001)，见图1。

3 讨论

乳腺癌是发生在女性乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤，其病因尚未明确，但在我国的发病率呈上升及年轻化趋势，已成为当前社会的重大公共卫生问题[6,7]。目前，乳腺癌根治术是乳腺癌有效的治疗方法，通过切除肿瘤组织，可有效改善患者病情，其临床疗效已逐渐被认可，但因乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性、手术难以彻底切除所有癌组织、术后综合治疗技术等因素影响，部分患者会出现复发转移，故如何有效评估患者术后复发转移是人们关注的热点[8,9]。

图1 miRNA-23a表达水平评估患者术后复发转移的ROC曲线

目前，乳腺癌根治术后复发转移的评估主要依靠病理学分型，其中肿瘤类型、TNM分期、淋巴结转移、ER和PR等已被大量研究证实与患者术后复发转移有关，但其无法反映肿瘤组织基因表达情况的差异[10,11]。而近年来，随着分子生物学理论和技术的迅猛发展相关研究显示，miRNA是一类短序列、非编码的单链小分子RNA，通常由22个碱基组成，其在乳腺癌、甲状腺癌等肿瘤中均有异常表达，提示其对肿瘤的发生发展具有重要作用，且其对指导临床治疗有着重要作用[12,13]。而有研究表明，miRNA-23a是存在脊椎动物的基因组中的一种抑癌因子，在参与基因转录表达后，具有调控细胞增殖、存活等作用，其过表达可能可抑制肿瘤细胞的生长并促进细胞凋亡，从而起抑制肿瘤细胞增殖、侵袭的作用[14,15]。

本研究单因素分析结果显示，复发组和未发组肿瘤类型、TNM分期、淋巴结转移、ER和PR比较有统计学差异，此结果与王伟、Clarice等[16,17]研究基本一致，也说明了肿瘤类型、TNM分期、淋巴结转移、ER和PR等乳腺癌根治术与患者术后复发转移。同时，本研究中，复发组miRNA-23a表达水平明显低于未发组，Logistic回归性分析显示，在校正肿瘤类型、直径、TNM分期、淋巴结转移、ER和PR等因素后，miRNA-23a表达水平是患者术后复发转移的独立影响因素，表明miRNA-23a表达水平与术后复发转移的关系密切，其低表达水平可能提示患者术后复发转移。在术后复发转移患者中，可能其体内残留乳腺癌细胞组织或再次恶化的过程中，需维持其异常快速增殖、生长及转移等行为[18]，会抑制miRNA-23a表达水平，使miRNA对靶基因的降解或者抑制其翻译的负性调控能力降低而抑制了其调控细胞增殖、存活等作用，导致难以有效抑制肿瘤细胞的生长及转移，从而导致复发转移的发生。此外，本研究ROC曲线显示，miRNA-23a表达水平以<1.0评估患者术后复发转移的敏感度、特异度、准确度、曲线下面积为92.00%、96.36%、95.00%、0.882，一致性良好，则提示检测其表达水平能够作为评估患者术后复发转移的重要指标。因此，本研究认为乳腺癌根治术患者应加强监测miRNA-23a的表达水平，对miRNA-23a表达水平<1.0者应警惕其存在高复发转移风险，并应及时加强患者复发转移的监测检查，以及时发现并作出相应有效的处理。

而本研究也存在一定的不足，如者miRNA-23a表达水平对乳腺癌根治术后复发转移的作用机制复杂，且本次研究纳入病例数较少，不足以代表所有病患情况，但乳腺癌根治术患者miRNA-23a表达水平与术后复发转移的关系密切，其低表达水平可能提示患者术后复发转移，检测其表达水平可作为评估患者术后复发转移的重要指标，并推测miRNA-23a可能是防治乳腺癌根治术后复发转移的靶点，期待临床更大样本、更深入的研究。