不同年龄段不同下生殖道疾病女性HPV感染和宫颈病变状况分析

施晓春 周青雪 施新颜 刘艳飞 汪露

[摘要] 目的 了解不同年龄段不同下生殖道疾病状况女性HPV感染情况和宫颈病变情况。 方法 采用多聚酶链反应（PCR）技术扩增靶点DNA，采用核酸杂交技术检测14种HPV高危型别，采用液基细胞学检查（TCT）技术检测宫颈病变情况。 结果 5 176例女性中，高危亚型HPV感染率为19.1%，其中≤20岁年龄组和61～65岁年龄组HPV感染率明显高于其他年龄组（P<0.01）。11 968例TCT检查女性中，TCT阳性率为7.47%，其中ASC-US和LSIL患者比例相对较高，分别占4.24%和2.32%，26～30岁年龄组和31～35岁年龄组TCT阳性率明显高于其他年龄组（P<0.01）。阴道炎组、宫颈炎性疾病组和宫颈肿瘤组女性HPV感染率均显著高于体检组（P<0.01）。 结论 不同年龄段不同下生殖道疾病女性患者间HPV感染和宫颈病变情况存在差异，应加强对低龄女性、高龄女性和具有下生殖道疾病女性的宫颈癌筛查力度，从而更好地控制女性宫颈癌前病变和宫颈癌患病风险。

[关键词] 人乳头状瘤病毒；宫颈病变；感染；液基细胞学检查

[中图分类号] R737.33 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2018）27-0128-04

[Abstract] Objective To understand the status of HPV infection and cervical lesions in women with different lower genital tract diseases in different age groups. Methods Polymerase chain reaction（PCR） was used to amplify target DNA. Nucleic acid hybridization technique was applied to detect 14 HPV high-risk types. Thinprep cytology test （TCT） technique was used to detect cervical lesions. Results Among the 5 176 women， the high-risk subtype HPV infection rate was 19.1%. Among them， the HPV infection rate in the ≤20-year age group and the 61-65-year age group was significantly higher than that in other age groups（P<0.01）. Among 11 968 women with TCT， the positive rate of TCT was 7.47%. The proportion of patients with ASC-US and LSIL was relatively higher， accounting for 4.24% and 2.32% respectively. The positive rate of TCT in the 26-30 age group and the 31-35 age group was significantly higher than that in other age groups （P<0.01）. The incidence rates of HPV infection in the women in the vaginitis group， cervicitis disease group， and cervical cancer group were all significantly higher than that in the physical examination group（P<0.01）. Conclusion There are differences in HPV infections and cervical lesions among the women with different lower genital tract diseases at different ages. Efforts should be made to strengthen the screening of cervical cancer for younger women， older women and women with lower genital tract diseases， so as to better control the risk of cervical precancerous lesions and cervical cancer.

[Key words] HPV； Cervical lesions； Infections； Thinprep cytology test （TCT）

宮颈癌（cervical cancer，CC）严重威胁着女性健康，是最常见的女性恶性肿瘤之一[1]，我国2015年宫颈癌新发病例9.89万，死亡病例3.05万[2，3]。近年来CC发病率逐渐升高，全球每年约有50万新发病例，给患者家庭造成了较重的负担[4，5]。CC发生的主要原因是高危型人乳头状瘤病毒（human papillomavirus，HPV）的持续感染，在高危型HPV中感染率最高的分别是HPV16型和HPV18型，高达70%～85%[6-8]。因而，积极探讨高危型HPV，尤其是HPV16型和HPV18型与宫颈癌前病变和宫颈肿瘤的相关性，了解不同年龄段不同下生殖道疾病状况女性中HPV感染情况及宫颈病变情况，对于开展CC相关筛查及预防策略的制定具有十分重要的意义[8]。若能早发现、早诊断和早治疗，将有效降低CC的发生率和死亡率。HPV基因检测和液基细胞学检查（thinprep cytologic test，TCT）均是筛检CC的有效方式[9，10]，本研究共收集了2016年4月～2017年12月期间于我院就诊患者的5 176例HPV检测标本和11 968例TCT标本，年龄15～90岁。根据患者不同年龄和不同下生殖道疾病状况进行分组，然后对各组中HPV感染情况和TCT阳性分布情况进行统计分析和比较，研究结果可为不同年龄段、不同下生殖道疾病状况女性的CC筛查、预防和诊治提供理论基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以2016年4月～2017年12月于我院就诊和健康查体的女性为研究对象，共收集5 176例HPV检测标本和11 968例TCT标本，年龄15～90岁，平均（38.46±10.46）岁，按照年龄分为11个组，依次为≤20岁、21～25岁、26～30岁、31～35岁、36～40岁、41～45岁、46～50岁、51～55岁、56～60岁、61～65岁和≥66岁组。对于复检者只统计初次HPV和TCT检测结果。

1.2 仪器与试剂

HPV检测主要仪器和试剂均采用罗氏诊断产品（上海）有限公司生产的Cobas4800全自动基因抽提扩增检测仪、人乳头状瘤病毒（HPV）核酸扩增荧光PCR检测试剂盒（批号：Y00444、Y13681）、液基细胞制备试剂盒（批号：X08876、X06335）、HPV质控试剂盒（批号：X09695、X02711）、HPV清洗液（批号：X09951）和HPV样本提取试剂盒（批号：X57489、Y04027）。TCT检测采用美国新柏氏TCT液基细胞学检测仪及相应配套试剂。

1.3 方法

1.3.1 HPV标本采集 患者在安静状态下，由临床医生采样，首先擦去宫颈口过多的分泌物，然后将棉拭子插入宫颈口，轻压并顺时针旋转4～5周，取得宫颈脱落细胞[11]。迅速将采样棉拭子浸入盛有1 mL无菌生理盐水的样本管中，充分漂洗，将棉拭子贴壁挤压后丢弃，立即送检。

1.3.2 HPV DNA的抽提、PCR扩增及结果判读 HPV DNA的抽提和PCR扩增严格按照罗氏人乳头状瘤病毒（HPV）样本处理试剂盒、样本提取试剂盒、检测试剂盒（PCR荧光法）以及Cobas4800全自动基因抽提扩增检测仪标准操作程序执行，扩增结束后，查看仪器相关参数，若抽提过程正常且阴性和阳性质控均在控则接受结果并报告临床。人乳头状瘤病毒（HPV）核酸扩增荧光PCR检测试剂盒采用多重核酸扩增（Multiplex PCR）荧光检测法，根据高危型人乳头瘤病毒（HPV）的L1基因靶序列设计高度特异的引物和探针，能在同一PCR反应中检测宫颈口脱落细胞中的14种高危亚型HPV（HPV16/18/33/35/39/45/51/52/56/58/59/66/68/68b）的脱氧核糖核酸（DNA）。

1.3.3 液基细胞学检查 受检女性应在检查前3 d内禁止性生活、阴道冲洗及阴道内用药，妇科医生将TCT专用毛刷置入宫颈内，于宮颈鳞-柱状交界处取脱落细胞，立即将标本放入含ThinPrep保存液的小瓶中进行漂洗，再按照说明书操作步骤进行制片、固定和染色，采用TCT检测仪进行液基细胞学检测[12]。细胞学诊断采用2006版TBS分级系统：未见恶性细胞和上皮内病变细胞（NILM）、鳞状上皮内低度病变（LSIL）、鳞状上皮内高度病变（HSIL）、意义不明确的非典型鳞状上皮细胞（ASC-US）、非典型腺细胞（AGC）、不能排除高级别鳞状上皮内病变的宫颈不典型鳞状细胞（ASC-H），结果判断标准：TCT检查结果为NILM判定为阴性结果，其余均判定为阳性结果。

1.4统计学处理

采用SPSS 20.0统计学软件进行统计学处理，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同年龄段女性14种HPV高危亚型感染情况

本研究共检出HPV阳性标本989例，阳性率为19.1%，其中各年龄组HPV高危亚型感染情况见表1。HPV16、HPV18和其他12种高危亚型HPV（HPV33/35/39/45/51/52/56/58/59/66/68/68b）感染率见图1。本研究结果发现，≤20岁年龄组和61～65岁年龄组与其他年龄组相比HPV感染率较高，且差异均有统计学意义（P<0.01）。见表1。

2.2 不同年龄段女性宫颈病变情况

本研究共收集TCT检查标本11 968例，其中阳性894例，占7.47%，阴性11 074例，占92.53%。在TCT阳性患者中，ASC-US最多，共检出507例，占4.24%，其次为LSIL，共278例，占2.32%，见表2。通过对不同年龄段的女性的宫颈病变情况进行分析，我们发现≤20岁、21～25岁、26～30岁、31～35岁、36～40岁、41～45岁、46～50岁、51～55岁、56～60岁、61～65岁年龄组女性中ASC-US患者和LSIL患者例数均显著高于AGC、ASC-H和HSIL患者（P<0.01），在≥66岁年龄组的157例女性中，除NILM外，LSIL患者数量最多（5例，占3.18%），其次为ASC-US患者和HSIL患者（各3例，均占1.91%），未检出AGC和ASC-H患者（0例），见图2。在894例TCT阳性结果中，各年龄组女性所占比例依次为0.56%、7.94%、25.39%、19.02%、10.63%、9.51%、10.85%、8.72%、4.25%、1.90%和1.23%，其中26～30岁组和31～35岁组TCT阳性率显著高于其他年龄组女性（P<0.01），见表2。

2.3 不同下生殖道疾病状况女性的HPV感染情况分析

根据临床诊断将研究对象分组，我们发现阴道炎组、宫颈炎性疾病组和宫颈肿瘤组与体检组相比差异均有统计学意义（χ2=37.485，P<0.01；χ2=95.269，P<0.01；χ2=53.607，P<0.01），阴道炎组和宫颈肿瘤组相比差异有统计学意义（χ2=4.558，P<0.05），而阴道炎组和宫颈炎性疾病组、宫颈炎性疾病组和宫颈肿瘤组无统计学差异（χ2=1.224，P>0.05；χ2=2.461，P>0.05），见表3。

3 讨论

CC是女性恶性肿瘤中仅次于乳腺癌的第二大常见恶性肿瘤[13，14]，研究表明CC患者的HPV感染率明显高于正常人群，且主要感染型别为HPV16型和HPV 18型[15]，粱海燕等[16]人报道高危型HPV尤其是HPV 16和HPV18持续感染2年以上，女性宫颈病变风险显著增加[16]，故高危型HPV感染与CC的发生和发展关系密切[17]，甚至有学者提出高危型HPV病毒载量可作为肿瘤标志物用于女性宫颈病变的治疗随访[18]。

为了解杭州地区不同年龄段不同下生殖道疾病女性人群中HPV感染和宫颈病变状况，本研究对不同年龄段不同下生殖道疾病状况女性的HPV感染情况以及TCT检查结果进行统计和分析，结果显示，2016年4月～2017年12月期间我院5 176例女性HPV检测标本中，14种高危型HPV（HPV16/18/33/35/39/45/51/52/56/58/59/66/68/68b）的阳性率为19.1%，与李明雷等报道的17.74%[19]和李爱敏等报道的20.47%相近[20]。

本研究结果显示，杭州地区女性HPV感染率与年龄呈两个特异性高峰，一个是≤20岁年龄组，阳性率为55.0%，其中最小年龄为16岁，提示杭州地区高危型HPV感染具有年轻化趋势，这可能与患者宫颈局部组织结构尚未发育完善、机体对HPV病毒免疫力低以及性健康知识缺乏等因素有关，另一个高峰是61～65岁年龄组，阳性率为32.3%，提示随着年龄增加HPV感染风险增加，这可能与高龄女性免疫功能降低、体内雌性激素水平下降等因素有关，本研究结果与李明雷等[19]、李爱敏等[20]和Xu HH等人[21]报道的<21岁和>50岁人群的HPV感染率较其他人群明显升高的研究结果一致。上述研究结果提示，在CC筛查中，相关部门应尤其重视低龄女性和高龄女性的筛查。

在11 968例行TCT检查的女性中，TCT阳性率为7.47%，其中在TCT阳性患者中，ASC-US患者最多，占4.24%，其次为LSIL，占2.32%，而在894例TCT阳性结果中，26～30岁组比例最高，占25.39%，其次为31～35岁组，占19.02%，与其他年龄组女性相比，差异有统计学意义（P<0.05），结果提示相比于其他年龄段女性，26～35岁年龄组女性TCT阳性风险较大，在CC筛查中应重视TCT检查。许剑利等[18]报道HPV检测灵敏度高，但特异度和准确度低，TCT检查灵敏度低，但特异度和准确度高，二者可相互补充，建議在CC筛查中将二者联合应用以提高筛查效率[18]。

按临床诊断将所有患者分组，结果显示阴道炎组、宫颈炎性疾病组和宫颈肿瘤组与体检组相比HPV感染率均明显升高（P<0.01），与阴道炎组相比，宫颈肿瘤组HPV感染率也明显升高（P<0.05），上述结果提示，HPV感染可增加女性下生殖道炎性病变风险，且随着HPV的持续感染，宫颈恶化程度也随之增加，进而增加CC患病风险。由于HPV感染与女性下生殖道病变程度具有相关性，因而当女性患有阴道或宫颈炎性疾病时应重视HPV的筛查，尽量做到早发现、早诊断、早治疗，从而降低宫颈炎性疾病和CC的发病率。

总之，在CC筛查中，我们应加强对低龄女性和高龄女性人群的筛查力度，重视中间年龄段女性的TCT筛查，普及性教育，提倡安全性行为，提高各年龄段女性对HPV感染的认知度，引导健康生活，以预防为主，早发现、早诊断、早治疗，从而更好地控制女性宫颈癌前病变和CC患病风险。

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（收稿日期：2018-05-22）