黄芪粗提物对四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用

鲍家卉，王雪慧，逄淑伟,王 莹，刘馨宇，张雪梅

(延边大学农学院动物医学系，吉林延吉 133002)

中医药在防治肝脏疾病方面有悠久的历史。肝损伤是指一系列理化因素所引起的肝细胞变性、坏死和凋亡，是各种肝脏疾病的病变结果。急性肝损伤是指各种原因引起的肝脏功能的异常，肝损伤是急性肝功能衰竭的基础，严重或持续的肝损伤最终导致肝功能衰竭[1]。引起肝急性损伤的原因很多，四氯化碳(CCl4)引起的肝损伤是化学性肝损伤的一类典型代表，化学性肝损伤可上调肝损伤指数，导致肝细胞破裂，影响机体内某些酶的含量，进而影响肝脏的解毒功能，引起肝功能障碍，严重时导致肝衰竭，甚至威胁生命。化学性肝损伤至今尚无有效的治疗手段。因此，寻找新型保肝、护肝药物十分重要。

黄芪(Astragalusmembranaceus)味甘，微温，归肺，脾经，咀嚼有微豆腥味[2]，具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌功效[3]。现代药理学研究表明，黄芪有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用[4]。黄芪不仅能扩张冠状动脉，改善心肌供血，提高免疫功能，而且能够延缓细胞衰老的进程[5]。邱季等[6]研究表明，黄芪提取物在一定程度上改善肝细胞变性、坏死病变，对小鼠急性化学性肝损伤具有保护作用。本试验通过腹腔注射CCl4建立急性肝损伤模型，研究黄芪粗提物对肝损伤的保护作用，为临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 ICR小鼠，雌雄各半，体重18 g±2 g，购自长春亿斯实验动物技术有限责任公司。

1.1.2 药品与试剂 黄芪，购自吉林省延吉市延西大药房；联苯双酯滴丸，购自吉林省延吉市延西大药房(批号A02141208)；谷草转氨酶AST(批号20161120)、谷丙转氨酶ALT(批号20161120)、丙二醛MDA(批号20161120)、甘油三酯TG(批号20161120)试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。

1.1.3 黄芪粗提物的制备 黄芪饮片100 g，浸泡过夜，加热回流，过滤，重复3次，浓缩,使其按生药量计算为0.6 g/mL，置4℃冰箱保存备用。

1.2 方法

1.2.1 试验分组、造模与给药 将36只小鼠随机分为空白组、模型组、阳性组和黄芪粗提物高、中、低剂量组，每组6只。药物组分别灌胃8、4、2 g/kg黄芪粗提物，阳性组以0.1 mL/10 g灌胃15 mg/kg联苯双酯，空白组和模型组灌胃等体积生理盐水(0.1 mL/10 g)，1次/d，连续15 d。末次给药后24 h给小鼠腹腔注射100 mL/L CCl4溶液10 mL/kg。

1.2.2 各项指标的检测 末次给药24 h后称重，采血，分离血清；剥离肝脏，称肝脏湿重，部分肝脏制备100 mg/mL肝组织匀浆。分别对肝脏指数，血清中ALT、AST、MDA及肝脏中TG的含量进行测定，部分肝脏100 mL/L中性甲醛溶液固定，HE染色，观察病理组织学变化。

2 结果

2.1 黄芪粗提物对小鼠肝脏指数的影响

由表1可知，与空白组比较，模型组极显著增加小鼠肝脏指数(P<0.01)。与模型组比较，黄芪粗提物高剂量组极显著降低肝脏指数(P<0.01)，黄芪粗提物中剂量组显著降低肝脏指数(P<0.05)。结果表明，黄芪粗提物高、中剂量组能显著降低肝脏指数，且呈一定的量效关系。

2.2 黄芪粗提物对小鼠血清中ALT、AST、MDA及肝脏中TG的影响

由表2可知，与空白组比较，模型组极显著增加小鼠血清中ALT、AST、MDA及肝脏中TG的含量(P<0.01)。与模型组比较，黄芪粗提物高剂量组极显著降低小鼠血清中ALT、AST、MDA及肝脏中TG的含量(P<0.01)，黄芪粗提物中剂量组极显著降低小鼠血清中ALT、AST、MDA的含量(P<0.01)，黄芪粗提物中剂量组显著降低小鼠肝脏中TG的含量(P<0.05)，黄芪粗提物低剂量组显著降低小鼠肝脏中ALT和AST及肝脏中TG的含量(P<0.05)。结果表明，黄芪粗提物高、中、低剂量组能显著降低小鼠血清中ALT、AST、MDA及肝脏中TG的含量，且呈一定的量效关系。

表1 黄芪粗提物对小鼠肝脏指数的影响

注：与空白组比较，##P<0.01；与模型组比较，**P<0.01，*P<0.05。

Note:Compared with control group,##P<0.01;Compared with model group,**P<0.01,*P<0.05.

表2 黄芪粗提物对小鼠血清中MDA、AST、ALT及肝脏中的TG的影响

注：与空白组比较，##P<0.01；与模型组比较，**P<0.01，*P<0.05。

Note:Compared with control group,##P<0.01;Compared with model group,**P<0.01,*P<0.05.

2.3 病理组织学观察

如图1所示，小鼠肝组织HE染色可见，空白组小鼠肝小叶形态结构正常，肝索结构清晰，肝细胞排列整齐(图1A)。模型组小鼠肝索紊乱，肝小叶失去正常结构，肝窦变窄，肝窦周围出现大面积肝纤维化病变，肝细胞明显变性、坏死，细胞破裂，间质充血，细胞核固缩、溶解，部分可见炎性细胞浸润(图1B)。阳性组小鼠肝细胞及肝小叶结构较正常，部分肝细胞破裂，核溶解消失(图1C)。黄芪粗提物高、中、低各组均能不同程度改善小鼠肝纤维化程度。黄芪粗提物高剂量组肝窦变窄，有轻微充血，少量肝细胞破裂(图1D)；黄芪粗提物中剂量组肝窦变窄，有轻微炎性细胞浸润，有大量细胞失去细胞基本结构，细胞核溶解消失(图1E)；黄芪粗提物低剂量组肝窦周围仍有肝纤维化病变，间质充血，大量肝细胞破裂，细胞核溶解(图1F)。由此可见，黄芪粗提物高、中、低剂量组均可不同程度减轻CCl4诱导的小鼠急性肝损伤。

A.空白组；B.模型组；C.联苯双酯组；D.黄芪粗提物高剂量组；E.黄芪粗提物中剂量组；F.黄芪粗提物低剂量组

A.Control group；B.Model group；C.Bifendate group；D.Astragaluscrude extract high dose group；E.Astragaluscrude extract mid dose group；F.Astragaluscrude extract low dose group

图1各组小鼠肝组织病变(HE,100×)

Fig.1 Hepatic histopathological lesions of mice in different groups(HE,100×)

3 讨论

肝损伤是一个复杂病理过程，主要包括酒精性肝损伤、药物性肝损伤、化学性肝损伤和病毒性肝炎等[7]。CCl4是一种趋肝毒物，能够强烈引起肝细胞坏死、肝脏损伤、肝脏纤维化和肝脏肿瘤[8]。黄芪为临床常用中药，具有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压等作用[9]。王忠利等[10]研究表明，黄芪多糖可能通过降低炎症因子对免疫性肝损伤具有保护作用，本实验室也已证明黄芪粗提物对酒精造成的小鼠急性肝损伤有一定的治疗作用[11]，但对CCl4诱导的急性肝损伤研究较少。本试验以CCl4急性肝损伤为模型，研究黄芪粗提物对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。

脏器重量及脏器系数可作为大体确定对应器官病变程度的参考[12]。本试验通过称量肝脏重量及计算肝脏系数作为重要的基础数据。ALT和AST是由肝脏合成的，能够直接反映肝功能变化的两种主要酶。当肝脏受到致病因素侵害时，肝脏结构发生变化，导致血清中ALT和AST活性增加[13]。ALT主要分布于细胞浆中，对肝细胞的损伤较为敏感，当肝脏受到损伤，导致细胞通透性增高及线粒体损伤时，ALT可依据肝脏受损程度发生不同程度的活性变化[14]。AST主要存在细胞核和线粒体中，当肝脏损伤时其被释放进入血液，同样可以作为判断肝脏受损程度的指标[15]。MDA是脂质过氧化作用的主要产物，能够严重损伤生物膜结构[16]，而脂质过氧化物的分解产物可引起细胞损伤，测定MDA的量常常可以反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。TG对维持正常细胞结构、细胞内信号传导以及能量代谢等都起到非常重要的作用[17]。在本试验中，黄芪粗提物高、中、低剂量组均能降低脾脏指数，降低血清中ALT、AST和MDA及肝脏中TG的含量，说明黄芪粗提物对小鼠CCl4诱导的急性肝损伤可以起到保护作用。

总之，黄芪粗提物通过降低肝脏指数，降低血清中ALT、AST和MDA及肝脏中TG的含量，减轻肝纤维化的程度，进而对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤起到保护作用。