寻常型银屑病皮损中IL-17和TNF-α的表达

王 娟,鲍海平*

(山西大同大学医学院,山西大同037009)

银屑病（psoriasis）是一种免疫介导的慢性炎症性皮肤病，其病理特征包括表皮角质形成细胞异常增殖，真皮淋巴细胞浸润和血管增生性改变。IL-17是活化CD4+辅助性17（Th17）细胞分泌的特征性细胞因子，在促炎症反应、促血管生成和介导免疫应答等方面发挥着重要作用。TNF-α参与多种自身免疫和炎症性疾病，与淋巴细胞的分化、激活、趋化等行为有关。为探讨银屑病发病中IL-17和TNF-α的表达情况及其与表皮角质形成细胞和淋巴细胞的关系，我们应用免疫组化法检测寻常型银屑病皮损中IL-17和TNF-α的表达情况。

1 材料和方法

1.1 材料

收集大同大学附属医院皮肤科寻常型银屑病患者皮损标本20例，男12例，女8例，年龄34～67岁，平均39.7岁，均经临床和病理检查确诊，同时6月内局部或全身未使用过皮质类固醇激素和免疫抑制剂类药物；对照组20例正常皮肤组织，均取自整形科正常皮肤，男11例，女9例，年龄24～65岁，平均37.5岁。2组的性别、年龄比较，差异均无统计学意义。所有组织均经甲醛固定石蜡包埋后备用。本研究经医院医学伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2 主要试剂

兔抗人多克隆IL-17抗体、兔抗人多克隆TNF-α抗体均购自北京博奥森生物技术有限公司，即用型二步法检测试剂盒PV-9000、二氨基联苯胺（DAB）试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 实验方法

免疫组化法PV-9000检测IL-17和TNF-α的表达步骤如下：石蜡标本连续切片，脱蜡和水化；滴加3%H2O2溶液孵育20 min消除内源性过氧化物酶的活性；枸橼酸钠缓冲液进行热修复；分别滴加IL-17多抗和TNF-α多抗（稀释浓度均为1∶200），以PBS代替一抗作为阴性对照，再滴加即用型二步法试剂PV-9000。上述步骤均用PBS冲洗5 min×3次。DAB显色，苏木素复染、脱水封片。

1.4 结果判定

参照IL-17和TNF-α试剂说明，以细胞浆染色呈现棕黄色颗粒为阳性细胞，不着色为阴性细胞。采用MIAS-2000图像分析系统分析标本染色情况，利用积分光密度值(integrated optical density，IOD)代表每张标本的表达强度。每张标本切片随机测定5个高倍视野（×400）的IOD值，取平均值为最终结果，用±s表示。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 IL-17表达结果

IL-17在寻常型银屑病皮损中阳性表达于表皮基底层、棘层，真皮淋巴细胞也有部分表达，而在正常皮肤组织中，仅少量表达于表皮基底层，经统计学比较，寻常型银屑病组IL-17的表达水平明显高于正常皮肤组(P＜0.01)。见表1。

2.2 TNF-α表达结果

TNF-α在寻常型银屑病组织中阳性细胞广泛分布于表皮各层，呈簇集性连续表达，在真皮淋巴细胞浸润带也有表达，而在正常皮肤组织中表达阴性或弱阳性，经统计学比较，寻常型银屑病组TNF-α表达水平明显高于正常皮肤组(P＜0.01)。见表1。

2.3 相关性分析

寻常型银屑病组中IL-17和TNF-α的表达水平呈正相关，r为0.53，（P＜0.01）。

表1 2组间IL-17和TNF-α的IOD均数值比较

3 讨论

银屑病的组织病理改变主要包括表皮增厚、真皮淋巴细胞为主的炎性浸润和血管的异常增殖。近年研究发现由T细胞介导的免疫机制在银屑病发生中具有重要作用，Th17细胞是T细胞的重要亚群，由其产生的细胞因子参与了银屑病的发生[1-2]。IL-17是Th17细胞分泌的最重要的前炎症细胞因子，是含有一个N-末端信号肽的155个氨基酸组成的糖蛋白，通过与靶细胞上特异性受体IL-17R结合发挥多种生物学效应，可诱导促炎症细胞因子IL-6、TNF-α，趋化因子如MCP-1、MIP-2和基质金属蛋白酶MMP-9的表达，引起组织细胞局部浸润、组织破坏和炎症反应，同时对中性粒细胞的增殖、成熟和趋化行为，及T细胞的活化具有协同刺激作用[3-4]。在皮肤组织中，IL-17可诱导角质形成细胞产生TNF-α、VEGF、IL-8、GM-CSF和CXCL10等细胞因子[5]，诱导炎症反应和促进血管形成。本研究发现在寻常型银屑病皮损中IL-17阳性表达于表皮基底层、棘层和真皮淋巴细胞浸润区域，提示IL-17可能与皮损中角质形成细胞的异常增殖和淋巴细胞、中性粒细胞的炎性浸润以及血管的增生形成有关。

TNF-α在体内来源广泛，单核巨噬细胞、淋巴细胞、内皮细胞和角质形成细胞等均可产生，与靶细胞TNFR结合发挥多种生物学效能，能诱导IL-1、IL6等炎症因子释放，刺激血管内皮细胞、角质形成细胞产生多种黏附分子、趋化分子，促进T细胞向炎症局部趋化游走，加重炎症反应[6-7]，在细胞因子网络中居于中心环节。我们发现在寻常型银屑病皮损中TNF-α阳性细胞广泛分布于表皮各层和淋巴细胞层，表达水平明显高于正常皮肤组织，提示致病因素使角质形成细胞、淋巴细胞分泌大量TNF-α，诱导炎性T细胞大量增殖活化，向表皮层浸润，促进表皮增殖。研究已证实TNF-α基因的多态性与银屑病发生发展有关[8-9]。同时我们发现IL-17和TNF-α在银屑病皮损中表达呈正相关，表达位置也基本一致，提示二者在其发病中具有协同促进作用，IL-17可能促进角质形成细胞分泌TNF-α，促进局部血管形成，加速表皮增殖，加重局部炎症反应，导致病程迁延慢性化。目前临床已开始推广针对TNF-α和IL-17为治疗靶点的生物治疗，有望成为治疗银屑病的新途径。