交叉污染对全自动血凝分析仪SYSMEX CS2000I活化部分凝血活酶时间的影响

葛颂 王新芹

（南京鼓楼医院集团宿迁市人民医院 江苏 宿迁 223800）

全自动血凝分析仪SYSMEX CS2000I测定凝血指标部分项目存在交叉污染现象[1]。我们在工作中发现凝血试剂通过试剂针的携带污染对血浆APTT测定存在一定的影响[2]，所做值偏低，造成负误差[3]，针对这一现象，进行如下实验。

1.仪器与试剂

1.1 仪器

日本SYSMEX CS2000I全自动血凝分析仪。

1.2 试剂

日本SYSMEX公司配套试剂由美国德灵公司（DADE BEHRING）生产，主要包括：FIB试剂（Thrombin reagent，批号：547541）；PT测定试剂（Thromborels，批号：562837）；APTT测定试剂（Actin，批号：557254）；配套缓冲液（OV Buffer，批号：554615）；氯化钙试剂（Cacl2，批号：563812）；TT测定试剂（Test Thrombin，批号：47718）。清洗液（CleanⅠ，批号：A8035）。定值质控血浆（Control 1 Plasma，批号：548052）；定值质控血浆（Control 2 Plasma，批号：548271）。严格按照试剂说明书溶解保存使用试剂。

2.方法与结果

2.1 方法

2.1.1 交叉污染排查实验 取当日标本若干，混合成混合血清，在无污染条件下单独测定PT，APTT，FIB，TT各三次为对照组，再将PT，FIB，TT分别与APTT组合重复测三次[4]。

2.1.2 干扰分析实验 将混合血浆400微升分别与10微升生理盐水（NS），OVB，Thrombin试剂混合，作为标本进行APTT测定，确定对APTT造成干扰原因的查询[5]。

2.1.3 设计避免交叉污染程序 取一份足量多的正常混合血清，重复测APTT20次[6]，FIB与APTT组合重复测20次，重设仪器设置[7]，使试剂针在吸取Thrombin 试剂后进行CLⅠ清洗和Cacl2前进行CLⅠ清洗后再对FIB与APTT组合重复测20次。定值质控1，2均重复测定10次。

2.1.4 统计学方法 采用SPSS21.0统计学软件进行数据处理分析，定量资料以（±s）表示，组间比较采用t检验，定性资料的组间比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2.2 结果

2.2.1 交叉污染排查结果 经过交叉污染排查实验，发现FIB对APTT存在负干扰，具有非常显著性的意义（P＜0.01）。其他项目无影响，根据资料显示，为FIB测定后对APTT测定存在干扰检测结果的物质。结果见表1。

表1 交叉污染排查情况对APTT的影响

2.2.2 干扰实验结果 加生理盐水组，加OVB组两组数据与对照组进行比较无统计学意义（P＞0.05）。而加Thrombin reagent组与对照组相比，其直接立即变为凝块，即APTT值趋近于0，差异具有非常显著性的意义（P＜0.01）。结果见表2。

表2 分别与生理盐水、OVB、Thrombin reagent混合后测定APTT的结果

2.2.3 避免交叉污染实验 避免交叉污染实验设计如下，与对照组作比较。经全自动血凝分析仪SYSMEX CS2000I测定凝血指标，再由该批号定值质控给定的靶值，算得一系列偏倚值，即单测定值质控1，FIB+APTT（设置前）组合，FIB+APTT（设置后）组合所得APTT偏倚分别为0.062，0.457，0.064；质控2分别为0.011，0.503，0.0098。由上分析可知，单测定值质控1,2血浆FIB+APTT（设置后）组合所得APTT偏倚在允许范围内，而FIB+APTT（设置前）组合所测APTT偏倚超过允许范围，进一步说明设置前FIB+APTT组合所得到的APTT结果偏低，存在负干扰。混合血浆及质控品1,2 FIB+APTT（设置前）与对照组之间的差异具有非常显著性的意义（P＜0.01），FIB+APTT（设置后）与对照组之间无统计学意义（P＞0.05）。所作数据如下表3、4、5所示。

表3 避免交叉污染实验[APTT与FIB+APTT（设置前）、FIB+APTT（设置后）混合血浆APTT值的比较]

表4 避免交叉污染实验[APTT与FIB+APTT（设置前）、FIB+APTT（设置后）质控1血浆APTT值的比较]

表5 避免交叉污染实验[APTT与FIB+APTT（设置前）、FIB+APTT（设置后）质控2血浆APTT值的比较]

3.讨论

全自动血凝分析仪SYSMEX CS2000I在使用过程中存在较大的交叉污染现象，本文通过实验发现FIB+APTT（设置前）组合所测APTT值偏低，其偏倚值超过允许范围，说明FIB+APTT（设置前）组合所测APTT值存在明显的负误差（表4，表5，P＜0.01）。而进一步实验发现FIB中的Thrombin试剂对APTT测定存在较大负干扰（表2，P＜0.01）。分析是由于Thrombin试剂中含有较高浓度的冻干凝血酶制剂，而SYSMEX CS2000I血凝分析仪只有一根试剂针和一个样本针，仅靠去离子水清洗试剂针一次，很难去除前一种试剂的残余成分，从而使Thrombin试剂对APTT测定造成较大负干扰。

综上所述，由上一种试剂中含有与下一个标本反应的成分是导致凝血反应交叉污染的主要原因。因此，使用此仪器时要注意防止交叉污染，用CLⅠ清洗试剂针可有效避免交叉污染对APTT测定的影响。