竹叶青酒中橙皮苷含量的测定方法研究

崔 帆，杨凯环，李晓晓，李素琴，吴成斌，任 杰

（山西杏花村汾酒厂股份有限公司技术中心，山西汾阳032205）

竹叶青酒是中国古老的传统保健名酒，其历史可追溯到南北朝。它以优质汾酒为基酒，配以淡竹叶、菊花、陈皮、砂仁等十余种名贵中药材加工而成，具有改善肠道菌群的保健功能。竹叶青酒以栀子苷、橙皮苷、黄酮类化合物等为主要成分，而橙皮苷具有维持渗透压、增强毛细血管韧性、降低胆固醇等作用。对3种色谱条件下测定竹叶青酒中橙皮苷含量的方法进行了比较研究，选择了一种适合我公司的测定方法，该方法成本低，操作简单，出峰较快，精密度好。

1 材料

1.1 仪器

Waters e2695型高效液相色谱仪，美国Waters ACQUITY H-CLASS/TUV；FA1004B型电子天平；KQ-300DE超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；优普纯水系统及超纯水机（成都超纯科技有限公司）。

1.2 药品与试剂

甲醇、醋酸均为色谱纯，莫克公司；超纯水（自制）；橙皮苷，德国ehrenstorfer Quality。

样品：38%vol竹叶青酒。

2 方法与结果

2.1 橙皮苷标准溶液制备

精密称取橙皮苷0.0084 g用甲醇定容于10 mL容量瓶中，超声振荡，摇匀备用。

对照品溶液制备：分别精密吸取25 μL、50 μL、100 μL、200 μL、1 mL、3 mL橙皮苷标准溶液，分别用甲醇定容至10 mL，摇匀即得对照品溶液。

2.2 供试品溶液制备

将待测竹叶青酒样用0.2 μm滤膜过滤至样品瓶中，即得供试品溶液。

2.3 色谱条件

2.3.1 条件一 ：ACQUITY UPLC H-CLASS，BEH C18色谱柱（1.7 μm，2.1×50 mm），流动相为混合流动相（甲醇∶醋酸∶水=35∶4∶61）∶水=72∶28，检测波长为283 nm，流速为0.5 mL/min，柱温30℃，进样量10 μL。

2.3.2 条件二：Symmetry C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：甲醇-3%冰醋酸溶液（45∶55），流速 1.0 mL/min，检测波长：283 nm；柱温30℃，进样量为10 μL。

2.3.3 条件三：Symmetry C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：甲醇∶醋酸∶水=35∶4∶61，检测波长为283 nm，流速为0.5 mL/min，柱温30℃，进样量10 μL。

2.4 阴性干扰试验

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，在3种色谱条件下进行测定。结果阴性对照品溶液在橙皮苷色谱峰相应位置上无吸收峰出现，表明阴性对照无干扰（见图1）。

图1 2.3.2条件下的高效液相色谱图

2.5 线性关系考察

取2.1.1制备的0.0021 mg/mL、0.0042 mg/mL、0.0084mg/mL、0.0168mg/mL、0.084mg/mL、0.252 mg/mL橙皮苷标液，按“2.3”项下的3种色谱条件进样测定，以6个浓度水平绘制标准曲线，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标作校正曲线并进行线性回归。

3种条件下的标准曲线回归方程为：

结果均表明，橙皮苷在0.0021～0.252 mg/mL范围内线性良好（3种色谱条件下同一标品的色谱图见图2、图3、图4）。

2.6 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液（0.252 mg/mL）10 μL，在3种色谱条件下，重复进样5次，记录橙皮苷峰面积。得到的RSD分别为0.73%、0.73%、0.72%，表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验

取按“2.2”项制备的供试品，在3种色谱条件下，分别连续进样5次，记录各峰面积，并按外标法计算其中橙皮苷的含量，分别为0.051 mg/mL、0.047 mg/mL、0.045 mg/mL，样品中橙皮苷含量的相对标准偏差(RSD)分别为1.32%、1.43%、1.49%。

2.8 稳定性试验

取同一供试品溶液，在3种色谱条件下分别于0、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h进样10 μL，测定橙皮苷峰面积。得到的RSD分别为1.2%、1.4%、1.5%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

图2 2.3.1条件下的标品色谱图

图3 2.3.2条件下的标品色谱图

图4 2.3.3条件下的标品色谱图

2.9 加标回收试验

吸取橙皮苷含量为0.048 mg/mL的供试品溶液5 mL，共3份，分别置于10 mL量瓶中，各加入橙皮苷对照品溶液（0.252 mg/mL）0.8 mL、1 mL、1.2 mL，加供试品溶液至刻度，摇匀，用0.2 μm滤膜过滤至样品瓶中。按上述3种色谱条件分别进样测定并计算回收率，结果见表1、表2、表3。

表1 竹叶青加标回收试验UPLC法

表2 竹叶青加标回收试验 HPLC法

表3 竹叶青加标回收试验HPLC法

2.10 样品含量测定

取3批样品，按供试品溶液制备方法制备溶液，在3种色谱条件下分别进样10 μL，依法测定，以外标法计算含量，结果3个批号的样品在3种色谱条件下测得含量分别：0.051 mg/mL、0.045 mg/mL、0.047mg/mL；0.050mg/mL、0.046mg/mL、0.045mg/mL；0.049 mg/mL、0.045 mg/mL、0.048 mg/mL。

3 讨论

橙皮苷作为竹叶青酒的主要成分，对其含量的定量控制是确保竹叶青酒质量稳定性的一个重要方面，因此对竹叶青酒中橙皮苷含量的测定方法研究很有必要，3个方法的检测效果对比见表4。

从表4综合来看，方法二成本低，柱子不易堵塞，出峰时间较快，回收率好，误差较小，所以考虑选择方法二测定竹叶青酒中的橙皮苷含量。

表4 3种检测方法的检测效果和经济性