蒙药肉苁蓉提取物稳定性研究△

闫 暾 齐海平 常欣荣 李 佳 张佳宇 张春红,*

(1.包头医学院，内蒙古 包头 014040；2.内蒙古众维实业有限责任公司，内蒙古 呼和浩特 010110)

肉苁蓉，蒙药名查干高要，为列当科植物肉苁蓉Cistnche decerticola Y.C. Ma的干燥带鳞状皮的肉质茎，主要寄生在荒漠植物梭梭和红柳的根部，肉质茎肥厚，所以称为肉苁蓉[1]，多于春季苗未出土或出土时采挖，除去花序，切段，晒干。性味甘、酸、咸，温，能清希拉、消食、补虚。用于希拉引起头痛、胃酸、吐酸水、阳痿、遗精。

现代药理研究表明, 肉苁蓉具有补肾、益精、活血、通便、增加免疫力、增强记忆力的功效[2-4]。主产于新疆、甘肃、内蒙古、宁夏等地，素有“沙漠人参”之美誉，具有极高的药用价值，为古代的历史上就是向朝廷进贡的珍品。肉苁蓉作为药食两用的植物，功效确切、无毒性作用[5]，在药物及保健食品开发中均有很高的价值。但对于肉苁蓉稳定的研究，目前较少，因此，本研究对不同因素对肉苁蓉提取物的稳定性的影响进行研究，为其今后的产品开发提供有价值的参考数据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 数显恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器厂)；BT25S型微量电子分析天平(十万分之一，赛多利斯科学仪器有限公司)、UV-1780型紫外-可见分光光度计(岛津仪器有限公司)、20-200ul移液枪(大龙兴创实验仪器有限公司)、移液管、容量瓶、EP管。

1.2 试剂 磷酸氢二钠(天津市津北精细化有限公司、分析纯)、无水柠檬酸(天津市凯信化学工业有限公司、分析纯)、蒸馏水、松果菊苷对照品(普天同创生物科技有限公司20171207)。

1.3 药材 荒漠肉苁蓉，由内蒙古众维实业有限责任公司提供，由包头医学院李旻辉教授鉴定为肉苁蓉Cistanche deserticola Y. C. Ma的干燥茎。

2 肉苁蓉提取物稳定性研究

2.1 肉苁蓉提取物的制备 肉苁蓉开水煮沸5min，浸泡过夜软化切成2mm～3mm的薄片，加入10倍量蒸馏水，加热回流提取2h，提取3次，合并滤液，浓缩滤液至浓度为1g/mL，取部分稀释至0.5 g/mL和0.25 g/mL。

2.2 肉苁蓉提取物中苯乙醇苷含量测定[6]

2.2.1 最大吸收波长的确定 以蒸馏水为参比液，在200～600 nm波长范围内测定肉苁蓉提取物溶液的紫外吸收情况，在330nm处，提取物有最大吸收，确定330nm为测定波长。

2.2.2 对照品溶液的配制精密称取松果菊苷标准品0.0020g，加水溶解转移到10mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配置成浓度为0.2mg/mL的松果菊苷对照品溶液备用。

2.2.3 精密度试验 精密吸取对照品溶液0.2mL用水定容至5mL，330nm波长下测定5次，RSD为0.26%，表明仪器精密度良好。

2.2.4 重复性实验 精密量取“2.1”项下的提取液0.1mL共3份，蒸馏水稀释至50mL，在波长330nm处测定其吸光度，RSD值为1.25%。

2.2.5 稳定性实验 精密量取“2.1”项下的提取液0.1mL，蒸馏水稀释至50mL，分别在0，2，4，6，8h测定其吸光度， RSD为0.42%，表明样品在8h内稳定。

2.2.6 加样回收率 精密量取已知松果菊苷含量的肉苁蓉提取物3份，分别精密加入松果菊苷对照品配置成浓度为中高低的供试品溶液测得加样回收率为99.1%。

2.2.7 线性关系考察 精密吸取对照品储备液5mL用蒸馏水稀释使成0.00625mg/mL、0.0125mg/mL、0.025mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL，在330nm处进行测定，得回归方程是y=3.1148x-0.0716(R2=0.9991)。

2.3 pH对荒漠肉苁蓉提取物稳定性的影响

2.3.1 柠檬酸-磷酸氢二钠的缓冲溶液的配制 取0.96克柠檬于50ML容量瓶中用蒸馏水稀释至刻度，取磷酸氢二钠3.6克于50mL容量瓶中用蒸馏水稀释至刻度线。分别取不同体积的柠檬酸溶液与磷酸氢二钠溶液混合，配制成pH为2.0、5.0、6.0、7.0、8.0的缓冲溶液。

2.3.2 取“2.1”中0.5g/mL的肉苁蓉提取物与缓冲液以1:1混合，所得混合液pH值分别为4.10、5.12、6.05、7.00、7.13。将所得混合液灌装入灭菌EP管，密封放置，测定第0、2、4、6、8、12、13、15d样品中苯乙醇苷含量。结果见图1

2.4 温度对荒漠肉苁蓉提取物稳定性的影响 取6份“2.1”项下0.5g/mL提取液分别置于5mL EP管中，分别置于室温、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃在0h、1h、2h、3h、4h、6h、8h测定样品中苯乙醇苷含量，结果见图2。

2.5 放置时间对荒漠肉苁蓉提取物稳定性的影响 取“2.1”项下不同浓度提取物1g/mL、0.5g/mL、0.25g/mL，分别灌装入灭菌EP管中，于第0d、5d、10d、15d、20d、30d进行取样，测定其中苯乙醇苷含量，结果见图3。

2.6 光线对荒漠肉苁蓉提取物稳定性的影响 取“2.1”项下提取物(0.5g/mL)，灌装于灭菌EP管中，一批置于自然光照处，另一批避光保存。于第0d、5d、10d、15d、20d、30d进行取样，测定其中苯乙醇苷含量，结果见图4。

3 结果及结论

通过研究结果可以发现，荒漠肉苁蓉提取物在较高温度(50℃～90℃)下表现出很好的稳定性，在此温度下8h，苯乙醇苷含量变化较小。在光照及避光条件下，提取物常温放置15d，主要成分含量均未表现出明显变化。不同浓度提取物(1g/mL、0.5 g/mL、0.25 g/mL)在常温放置30d过程中，苯乙醇苷含量未出现明显变化。在不同pH条件下，提取物中苯乙醇苷含量变化较大，均呈现出下降趋势，pH值越低，苯乙醇苷含量下降越快，表明肉苁蓉提取物对pH变化较为敏感，易受此因素的影响。

4 讨论

现代药理研究表明，肉苁蓉有润肠通便、保肝、抗骨质疏松、抗氧化、抗衰老、抗疲劳等作用[7]。其中起主要作用的一类成分便是苯乙醇苷类物质，国内外很多学者对此类成分的药理作用进行了研究，主要集中在苯乙醇总苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷的药理作用上，研究表明此类成分具有抗衰老、提高记忆力、调节免疫、改善性功能、防止肝损伤等作用[8]，因此研究肉苁蓉提取物中此类成分的稳定性对今后肉苁蓉类产品开发具有重要意义。

通过本研究发现，肉苁蓉提取的稳定性受到pH影响较大，而且随着pH的降低，其降解速度加快，与文献中苷类在酸性环境下水解快，在中性和碱性下水解相对较慢相一致[9]。此外，贾宝国[10]的研究表明，在有Cu2+、Fe3+存在的情况下，肉苁蓉中苯乙醇苷的降解速度也会增加。因此，在进行肉苁蓉提取或产品加工过程中避免广义酸碱的添加及金属离子的引入，可增加药物的稳定性，提高产品开发的成功率。