肉制品中喹诺酮残留检测

张宏博 王洋 王燕 王岩 靳志敏 范鑫 郑玉山

摘 要：喹诺酮类药物是具有4-喹诺酮基本结构并且由人工合成的抗生素类药物，是一种人畜共用药，食用含有喹诺酮残留的食品会对人体造成危害。本实验参照GB/T 21312-2007，采用液相色谱-质谱/质谱法对羊肉中6种喹诺酮类药物的残留量进行检测。检测结果显示，环丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、諾氟沙星、恩诺沙星、洛美沙星检出限分别为0.06μg/kg、0.02μg/kg、0.07μg/kg、0.05μg/kg、0.06μg/kg、0.05μg/kg；回收率为84.1%～102.1%，各物质的精密度依次是10.5%、7.4%、8.5%、6.8%、6.9%、7.2%；空白对照值为零；本次实验所采集的12种羊肉样品均未检出环丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、洛美沙星这6种抗生素类药物，符合农业部标准。

关键词：液相色谱-质谱/质谱法 喹诺酮类药物 氧氟沙星 环丙沙星 诺氟沙星

1 引言

抗生素类兽药长期无节制的使用会导致动物免疫力下降，同时降低了疫苗的作用，进而使细菌疾病成为家禽的重点传染疾病[1]。喹诺酮是一类人畜通用药，因其具有组织浓度高、药物保留性好、抵抗多种细菌、杀菌作用强、抗菌时间长等特点而被广泛应用于水产和畜禽等疾病的治疗[7]。尽管喹诺酮药物有诸多优良品质，但仍需重视其毒副作用，如造成肝损害、引发周围神经病变时间加快，甚至可能产生不可逆的转变——导致肌无力症状的患者病情加重等[8]。

喹诺酮是羊肉检测中最为常见的一种兽药残留，其严重影响羊肉制品的安全及羊养殖业的发展，也已成为我国羊肉食品出口的主要制约因素。因此，检测羊肉中喹诺酮的残留对于食品安全管控有重大意义。

2 材料与方法

本实验参照GB/T 21312-2007农业部第235号公告，利用液相色谱-质谱/质谱法检测羊肉中培氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、洛美沙星、环丙沙星6种喹诺酮的残留量。

2.1 设备

实验设备如表1所示。

2.2 试剂

除特别标注外，此次实验中所使用的试剂全部都为色谱纯，水为GB/T 6682规定的一级水，实验试剂如表2所示。

2.3 喹诺酮类药物的检测方法

2.3.1 提取

称取5g试样（精确至0.01g），装于50mL具螺旋盖聚四氟乙烯离心管中，之后加入10mL甲酸-乙腈（2∶98）溶液，立即盖盖剧烈振摇，旋涡震荡1分钟，超声提取10分钟，4000r/min离心5分钟，然后将乙腈层移入另一干净的聚四氟乙烯离心管中。向离心后的沉淀物中再加入10mL甲酸-乙腈（2∶98）溶液摇匀，旋涡震荡1分钟，4000r/min离心5分钟，合并乙腈提取液，待净化。

2.3.2 净化

向提取液中加入15mL乙腈饱和正己烷溶液，漩涡震荡2分钟，4000r/min离心5分钟，除去上层正己烷，氮吹至干。准确加入1mL初始比例流动相溶液，超声1分钟，旋涡震荡1分钟溶解残渣，将溶液过0.22μm微孔滤膜，供高效液相色谱-质谱/质谱测定。

2.3.3 高效液相色谱-质谱/质谱法测定

液相色谱条件：色谱柱固定相类型为C18、色谱柱型号为ZORBAX Eclipse Plus C18；规格：2.1×100mm×1.8μm；柱温：40℃；室温：22℃；流动相组成：A为0.05%甲酸/水、B为乙腈；流速：0.3mL/min；进样量：3μL。

最优质谱条件：离子源（电喷雾正离子源）；检测方式：多反映监测；电喷雾电压：4 0 00 V；离子源温度：3 5 0℃，汇总得出结果如表4。

3. 结果与分析

3.1 喹诺酮类标准物质

在浓度为5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/m L、8 0 . 0 n g / m L、1 0 0 . 0 n g / m L得到的线性方程，洛美沙星：Y = 5 2 . 8 6 8 6 5 0 X + 1 6 . 2 9 4 1 1 5；恩诺沙星：Y = 7 7 . 5 7 3 1 3 1 X + 3 9 . 5 9 3 3 1 0；诺氟沙星：Y = 3 5 . 5 5 7 6 7 1 X- 0 . 9 2 2 8 2 0；环丙沙星：Y = 2 6 . 1 1 8 1 6 3 X + 1 9 . 6 6 1 1 3 6；氧氟沙星： Y = 8 9 . 4 3 5 7 1 7 X + 1 7 . 0 1 1 2 8 9；培氟沙星：Y = 4 1 . 0 9 7 3 6 0 X + 1 3 0 . 3 8 7 5 4 6。相关系数R2均为0 . 9 9，峰面积与被测物质浓度呈现出的线性关系良好。

3.2 试剂空白

样品空白如表6所示，在3 . 0 2 1 ～ 3 . 2 0 1 m i n之间没有出现峰，所以诺氟沙星未检出；在3 . 1 8 1 ～ 3 . 6 2 1 m i n之间没有出现峰，所以氧氟沙星未检出；在2 . 9 0 1 ～ 3 . 3 4 1 m i n之间没有出现峰，所以培氟沙星未检出；在3 . 1 4 1 ～ 3 . 3 2 1 m i n之间没有出现峰，所以环丙沙星未检出；在2 . 6 5 1 ～ 2 . 5 2 1 m i n之间没有出现峰，所以洛美沙星未检出；在3 . 1 6 1 ～ 3 . 6 0 2 m i n之间没有出现峰，所以恩诺沙星未检出。

如表7所示，本次实验检测方法为，建立6个加入浓度为100ng /mL混合中间标准溶液50μL的空白试验与空白试剂对照，将检测到的各个噪音参数的结果记下来，当S / N =3时得到的最低浓度结果为检出限。

3.4 回收率

如表8所示，因為在实验过程中所有加入的物质都会有一定损失，故可能导致最终结果有所误差。为防止这一现象的发生，在羊肉中加入已知浓度的标准样液，经过涡旋震荡后按实验步骤作其检测值与羊肉样品检测值比较计算，从而知晓试剂是否有配对，羊肉样品的检测结果是否无误。

3.5 精密度

精密称取6个空白样品，加入1μg / m L的混合标准中间溶液40μL，按样品处理同法操作。经计算得出，氧氟沙星精密度为7 . 4 %、诺氟沙星精密度为6 . 8 %、恩诺沙星精密度为6 . 9 %、环丙沙星精密度为1 0 . 5%、培氟沙星精密度为8 . 5%、洛美沙星精密度为7 . 2 %。

3.6样品检测

本次试验共检测苏尼特羊、呼伦贝尔羊、大尾羊、山羊、绵羊、小尾寒羊、羊肝、羊毛肚、羊前腿、羊后腿、羊蹄筋、羊心1 2种羊肉样品，每种样品检测2个，以减小随机误差，提高检验的准确性。

根据农业部标准的要求，氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星和洛美沙星均不得检出，环丙沙星和恩诺沙星之和小于等于1 0 0μg / kg才为合格品，反之则为喹诺酮类药物残留，不合格。

检测结果如表1 0所示，1 2种羊肉样品中均未检测出6种喹诺酮药物，所取羊肉样品均符合农业部标准，为合格品，消费者可放心购买。

4 结论

本实验确定了环丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、洛美沙星试剂空白值全部为0，检出限分别为0.06μg/kg、0.02μg/kg、0.07μg/kg、0.05μg /kg、0.06μg /kg、0.05μg /kg，回收率为84.1%～102.1%，各物质的精密度依次是10.5%、7.4%、8.5%、6.8%、6.9%、7.2%。实验中所用苏尼特羊、呼伦贝尔羊、大尾羊、山羊、绵羊、小尾寒羊、羊肝、羊毛肚、羊前腿、羊后腿、羊蹄筋、羊心1 2种羊肉样品均未检出6种喹诺酮类药物，本次实验所采羊肉样品符合农业部标准，均为合格品。

参考文献：

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[2] 马建民，夏曦，李晓薇.阴离子交换固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法检测猪肌肉中13种喹诺酮类药物[J].中国食品卫生杂志，2015，25（3）：249-253.

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[10] 杨卫军，李曼，曹秀梅等.超高效液相色谱法检测鸡肉中氟喹诺酮类药物残留[J].现代畜牧兽医.2016（04）.

基金项目：内蒙古自治区科技重大专项（2016年度）；内蒙古自治区科技引领项目（2017年度、2018年度）。