SKA1及MMP-9在唾液腺腺样囊性癌组织中的表达及意义

赵丽娟 张冬燕 高月华 姜莉铖 柳忠豪 张彬

唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma，SACC)是一种来源于上皮的高度恶性肿瘤[1]，国内腺样囊性癌的发病率占唾液腺上皮性恶性肿瘤的首位[2-3]。本病的典型特点是生长缓慢、广泛侵袭、易沿神经扩散、远处转移及局部复发等[4-6]。尽管完全的手术切除和辅助放疗已被证实可以提高患者的长期生存率，但患者的预后仍不理想[7]。因此，寻找新的治疗手段和治疗靶点一直是腺样囊性癌的研究热点。

有丝分裂异常是大多数恶性肿瘤发生的共同特征。纺锤体和动粒相关蛋白复合体亚基-1，或称为纺锤体与动粒相关蛋白-1(spindle and kinetochore-associated complex subunit 1，SKA1)是一个新近发现的与有丝分裂相关的基因[8]，是动粒与微管稳定结合所必需的组成部分[9-10]。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)家族通过降解基底膜和细胞外基质(extracellular matrix，ECM)，在肿瘤的侵袭和转移过程中发挥着重要作用[11]。其中，基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9，MMP-9)是基质金属蛋白酶家族的重要成员之一。

目前，有关SKA1在SACC中的表达及其与MMP-9相关性的研究尚未见报道。本研究通过免疫组织化学染色的方法检测了SKA1和MMP-9在SACC中的表达情况，并进一步分析了其表达与临床病理特征之间的关系，以期为临床治疗和预后的判断提供参考。

1 材料与方法

1.1 基本资料

42 例唾液腺腺样囊性癌组织及20 例癌旁正常组织来自聊城市人民医院病理科，所有患者均经2 名不知晓病情的高年资病理医师确诊为腺样囊性癌，且术前均未行化疗、放疗及其他抗肿瘤治疗(表 1)。

表 1 SKA1及MMP-9在SACC及癌旁正常组织中的表达情况

1.2 主要试剂与方法

兔抗SKA1(Sigma-Aldrich，美国)；兔抗MMP-9(1∶800，1∶50，Abcam，美国)；免疫组化检测试剂盒、DAB显色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)。石蜡标本经4 μm厚连续切片，3%双氧水阻断内源性过氧化物酶活性，0.1 mol/L柠檬酸钠抗原修复液高温高压下抗原修复(具体步骤参照试剂盒说明)，以PBS代替一抗作为空白对照。

1.3 结果判断

免疫组织化学染色结果由2 名有经验的高年资病理医生参考相关文献[12]进行双盲判断。结合阳性细胞比例及阳性细胞着色强度进行综合评分。

1.4 统计学方法

采用SPSS 16.0 对临床病理资料进行统计分析，组间比较采用Pearson卡方检验，病例数n≤1者采用Fisher确切概率法，以P<0.05 为具有显著性差异。

2 结 果

2.1 SKA1和MMP-9蛋白在各组组织中的表达情况

SKA1和MMP-9蛋白在唾液腺腺样囊性癌组织中的表达阳性率分别为78.6%和66.7%，明显高于其在癌旁正常组织中的表达(15%和25%)，组间比较具有显著性差异(P<0.05)(表 1)。SKA1 在腺样囊性癌组织中的阳性表达主要分布于肿瘤细胞内，包括导管细胞和变异肌上皮细胞，而肿瘤间质内未见明显着色；SKA1 在腺样囊性癌癌细胞中的阳性表达表现为胞浆及/或胞核中的黄色或棕黄色颗粒沉淀(图 1)。MMP-9在腺样囊性癌组织中的表达主要表现为胞浆中的浅黄色或棕色颗粒(图 2)。

图 1 SKA1在唾液腺腺样囊性癌中的表达情况 (×200)

图 2 MMP-9在唾液腺腺样囊性癌中的表达情况 (×200)

2.2 SKA1和MMP-9蛋白与腺样囊性癌临床病理特征的关系

SKA1的表达在唾液腺腺样囊性癌TNM分期为III～IV期患者的阳性率明显高于I～II期患者(P<0.05)，在不同组织病理类型中的表达水平亦存在明显差异。40 例患者的5 年生存率为 52.5%，有2 例患者至研究结束时因随访尚不足5 年，未计入统计范围。MMP-9蛋白与唾液腺腺样囊性癌的临床分期、组织病理类型、神经侵袭及5 年生存率关系密切，组间比较具有显著性差异(P<0.05)，而与年龄、性别、淋巴结转移及局部复发差异无显著性。

2.3 SKA1与MMP-9蛋白在腺样囊性癌组织中表达的相关性

33 例SKA1阳性表达的腺样囊性癌组织中22 例为MMP-9阳性表达，而9 例SKA1阴性表达的腺样囊性癌组织中3 例为MMP-9阴性表达，统计学分析二者差异无显著性(P>0.05)(表 2)。

表 2 SKA1及MMP-9的表达与SACC临床病理特征的关系

3 讨 论

目前，SACC的研究主要聚焦于探索潜在的预后及治疗作用的分子标志物[13]，对这些肿瘤标志分子的研究为SACC 早期诊断、 分型分期、 评价预后提供了可靠指标[14]。新近发现的SKA1基因能够导致纺锤体检测点沉默[8]，与细胞周期调控及肿瘤发生发展密切相关[8,15-16]。目前已有研究表明，SKA1在非小细胞肺癌[17]、甲状腺乳头状癌[18]、恶性神经胶质瘤[19]、口腔鳞癌[20]、胃癌[21]等多种恶性肿瘤中存在过度表达，并且其表达与肿瘤预后[18]、侵袭转移[19]、凋亡相关基因[16]、顺铂耐药[17]以及化疗耐受[22]等因素相关。

本研究发现SKA1在SACC组织中的表达明显高于其在癌旁正常组织中的表达，提示SKA1在腺样囊性癌的发生过程中可能发挥着一定的作用。进一步研究发现，SKA1的表达与SACC的临床分期及组织病理类型密切相关。SKA1在临床晚期患者中的表达明显高于临床早期患者，其差异具有统计学意义，提示SKA1在腺样囊性癌的发展过程中可能也发挥着一定的作用。此外，SKA1在实性型SACC肿瘤组织类型中的表达明显高于其在筛孔状型及导管型中的表达。而目前研究发现，临床晚期及实性型肿瘤类型等因素都预示着肿瘤的不良预后[23]。虽然本研究中未发现SKA1的表达与患者的5年生存时间有必然的联系，但根据上述的研究结果，我们认为检测SKA1的表达对于SACC的预后判断可能仍具有一定的辅助价值。今后的研究中，在进一步扩大样本量进行验证。

目前，SACC高侵袭及高转移的机制尚未完全阐明。有学者研究发现，MMP-9在腺样囊性癌的侵袭转移中发挥着重要的作用[24]。本研究发现，MMP-9在SACC组织中的表达明显高于其在癌旁正常组织中的表达，且其表达与肿瘤类型、临床分期、神经侵袭及5年生存时间关系密切，其在实性型肿瘤类型、临床晚期、存在神经侵袭以及生存时间不足5年的患者中的表达明显增高。上述研究结果表明，MMP-9有助于SACC的预后判断，有望成为新的预后判断指标。

综上所述，SKA1及MMP-9在唾液腺腺样囊性癌组织中高表达，并与SACC的发生、发展及侵袭、预后有关，二者可能成为SACC预后评估指标及潜在的治疗靶点，为进一步的分子生物学研究提供了理论基础。