肝癌组织CtBP1、E-钙黏蛋白的表达与临床意义*

崔中锋，李 格，王丽花，李 宁

（河南省传染病医院检验科，河南郑州 450000）

原发性肝癌为我国高发恶性肿瘤，其病因和具体分子机制尚不明确，一般认为肝癌是由多种因素共同作用的结果。随着医学研究的不断深入，众多学者认为肿瘤因子等在肝癌的发病中具有重要作用[1]。羧基末端结合蛋白（CtBP）可抑制多种肿瘤抑制基因转录，介导肿瘤发生，与肿瘤的发生发展关系密切[2]。E-钙黏蛋白为钙依赖性跨膜蛋白，对细胞组织重构具有重要作用，其表达缺失会提高肿瘤细胞的侵袭能力[3]。目前，关于CtBP1、E-钙黏蛋白在肝癌组织中的表达及相互关系的报道较少。为此，本研究采用免疫组化法检测了肝癌组织CtBP1、E-钙黏蛋白表达的变化，以期为探究肝癌的发生发展机制提供数据支持。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2015年1月至2018年1月我院收治的200例经手术病理检查确诊的肝癌患者，男119例，女81例，年龄36～85岁，平均年龄（62.39±9.87）岁；肿瘤直径：＞5cm 46例，≤5cm 154例；TNM分期：I期84例，II期116例；肿瘤分化程度：低+中分化142例，高分化58例；淋巴结转移67例，未转移133例。所有患者均进行肝癌切除手术，并于手术中取肝癌组织和癌旁组织（距离病灶边缘2～5cm）标本。

1.2 方法

1.2.1 抗体与仪器：鼠抗人CtBP1多克隆抗体、鼠抗人E-钙黏蛋白多克隆抗体均由美国Santa Cruz公司提供，免疫组织化学试剂盒由北京中杉金桥公司提供。石蜡切片机由德国LEICA公司提供，组织包埋机由常州中威仪器公司提供，组织脱水机由日本樱花公司提供，恒温培养箱由常州澳华仪器有效公司提供。

1.2.2 免疫组织化学染色及定量分析：所取肝癌和癌旁组织均使用甲醛固定后常规石蜡包埋，连续切片，片厚4 μm。采用免疫组织化学染色法检测CtBP1和E-钙黏蛋白的表达情况，一抗工作浓度为1：100，DAB显色，迈耶苏木素复染。阴性对照用PBS代替一抗。

高倍镜下（×400）随机选取10个视野，各视野细胞数超过200个，由3名病理医师对免疫组织化学染色结果进行评定。CtBP1和E-钙黏蛋白阳性表达评估标准[4]：CtBP1主要在细胞核中表达，＞75%的细胞染成棕黄色为阳性；E-钙黏蛋白主要在细胞膜和细胞质中表达，＞25%的细胞膜完整着色为阳性。

1.3 统计分析 计数资料用[n（%）]表示，采用卡方检验；以Spearman相关分析分析肝癌组织CtBP1、E-钙黏蛋白表达的相关性。上述统计分析均使用SPSS 20.0统计软件，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CtBP1、E-钙黏蛋白的表达情况 肝癌组织CtBP1的阳性表达率明显高于癌旁组织（P＜0.05），E-钙黏蛋白的阳性表达率明显低于癌旁组织（P＜0.05）。见表1：

表1 肝癌和癌旁组织CtBP1、E-钙黏蛋白阳性表达率比较[n（%）]

2.2 CtBP1、E-钙黏蛋白表达与肝癌临床病理特征关系CtBP1、E-钙黏蛋白表达与性别、年龄、肿瘤大小无关（P＞0.05）。CtBP1、E-钙黏蛋白表达与TNM分期、分化程度和淋巴结转移有关（P＜0.05）：TNM分期II期、低+中分化、有淋巴结转移者CtBP1蛋白的表达明显升高，E-钙黏蛋白的表达明显降低。见表2：

表2 CtBP1、E-钙黏蛋白表达与肝癌临床病理特征关系

2.3 肝癌组织CtBP1、E-钙黏蛋白表达的相关性 肝癌组织CtBP1表达与E-钙黏蛋白表达呈负相关关系（P＜0.05）。见表3：

表3 肝癌组织中CtBP1、E-钙黏蛋白表达相关性分析

3 讨论

肝癌发病机制复杂，目前认为乙肝病毒和丙肝病毒感染、黄曲霉素、酒精、亚硝胺类物质、肝硬化等均可导致肝癌发生[5]。近年来，众多学者从分子层面对肝癌进行研究，发现多种蛋白直接或间接参与了肝癌的发生和发展。

CtBP1是一种广泛存在于细胞核中的蛋白质，能够下调多种肿瘤抑制基因的表达，并能通过干扰上皮细胞黏液分子的表达影响多种细胞的生物学行为，如促进上皮间质转化（EMT）和肿瘤血管生成，因此，CtBP1对肿瘤的发生发展具有促进作用[6]。并且有研究显示[7]，干扰CtBP1表达可抑制肝癌细胞的生长，促进肝癌细胞凋亡。本研究发现，肝癌组织CtBP1的阳性表达率明显高于癌旁组织，并且肝癌组织CtBP1表达与TNM分期、分化程度和淋巴结转移有关，进一步提示了CtBP1与肝癌的发生、分化及转移有关。

E-钙黏蛋白为钙依赖性黏附蛋白家族中的重要成员，可在Ca2+的参与下介导细胞间的黏附，其表达下降或缺失是发生EMT的显著特征，可降低细胞间的粘附力，从而促进肿瘤的侵袭和转移[8]。已有研究证实[9-10]，E-钙黏蛋白表达降低与胃癌、乳腺癌等肿瘤的发生发展有关。本研究发现，肝癌组织E-钙黏蛋白的阳性表达率明显低于癌旁组织，并且肝癌组织E-钙黏蛋白的表达亦与TNM分期、分化程度和淋巴结转移有关，说明E-钙黏蛋白表达下调或缺失对肝癌细胞浸润及转移具有促进作用。

有研究发现，E-钙黏蛋白是CtBP1抑制作用的靶基因之一，CtBP1阳性表达升高可使E-钙黏蛋白的阳性表达受限[12]。本研究亦证实，肝癌组织CtBP1表达与E-钙黏蛋白表达呈负相关关系。

综上所述，肝癌组织CtBP1、E-钙黏蛋白的表达均发生了明显异常变化，并且肝癌组织二者的表达均与肝癌TNM分期、分化程度及淋巴结有关，且CtBP1和E-钙黏蛋白之间可能存在调控关系，联合检测CtBP1、E-钙黏蛋白有望成为评估肝癌恶性生物学行为的指标。