混合染色法在对患者进行骨髓细胞形态学检验中的应用效果

冯艳铃

（成都市双流区中医医院，四川 成都 610200）

进行骨髓细胞形态学检验是诊断血液病的主要检验方法。在进行骨髓细胞形态检验时，不仅要求检验人员熟练掌握各种异常细胞的形态，还需要保证涂片有良好的染色效果，否则极易发生误诊、漏诊[1]。临床上进行骨髓细胞形态学检验时，对骨髓涂片进行染色的常用方法有多种。使用不同染色法对骨髓涂片进行染色所获得的染色效果存在一定的差异。本次研究主要探讨使用瑞氏染色法、姬氏染液法和混合染色法对骨髓涂片进行染色处理的效果。

1 资料及方法

1.1 一般资料

本次研究的对象为2017年9月至2018年2月期间在四川大学华西医院进行骨髓细胞形态学检验的80例患者的骨髓涂片。在这80例患者中，有男性51例，女性29例；其平均年龄为（47.49±3.64）岁。

1.2 研究方法

采集这80例患者的新鲜脊髓液制作成涂片，分别用瑞氏染色法、姬氏染液法和混合染色法对涂片进行染色。对骨髓涂片进行染色的方法是：1）对患者进行常规的骨髓穿刺，抽取其新鲜的脊髓液作为检验标本。2）由专业人员将检验标本制作成涂片后，使用甲醇溶液对涂片进行固定。3）本次研究使用姬氏染色液属于原液。瑞士染色液在配置好后存放一段时间（存放的时间不低于3个月）。4）分别使用瑞氏染色法、姬氏染液法和混合染色法对骨髓涂片进行染色。对涂片进行混合染色的方法是：在涂片上滴上5滴瑞氏染色液，需确保染色液覆盖整个标本，对涂片进行1 min左右的固定。按照1:2的比例将姬氏染色液滴加到涂片上，待其混匀充分后再静置一段时间即可。5）在染色完成后的 5 min、10 min、20 min、30 min、1 h、1.5 h和 2 h，在显微镜下对涂片进行观察。6）使用模糊数字法判定骨髓涂片染色效果的评分。将染色效果较差，无法对细胞质进行有效辨别且细胞轮廓较模糊的涂片判定为0分；将染色效果佳，有清晰的细胞结构且细胞浆与细胞核差别明显的涂片判定为10分。

1.3 观察指标

观察使用这三种染色法对骨髓涂片进行染色的效果。

1.4 统计学处理

将本次研究中的数据录入到SPSS22.0软件中进行处理，计量资料用（±s）表示，采用t检验，计数资料用%表示，采用χ²检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

与使用姬氏染色法和瑞氏染色法相比，用混合染色法对骨髓涂片进行染色效果的评分更高，P＜0.05。使用姬氏染色法和瑞氏染色法对骨髓涂片进行染色效果的评分相比，P＞0.05。详见表1。

表1 用这三种染色法对骨髓涂片进行染色效果评分的比较（分，±s）

表1 用这三种染色法对骨髓涂片进行染色效果评分的比较（分，±s）

注：*与瑞氏染色法和姬氏染色法相比， P＜0.05。

染色方法 5 min 10 min 20 min 30 min 1 h 1.5 h 2 h瑞氏染色法 1.71±0.19 2.52±0.20 3.82±0.31 5.48±1.62 7.32±0.51 5.06±0.82 3.14±0.34姬氏染色法 1.61±0.29 2.95±0.30 3.60±0.53 5.32±1.55 6.91±0.30 4.28±0.69 3.28±0.49混合染色法 3.92±0.31* 5.36±0.40* 7.01±0.49* 8.95±0.34* 9.32±0.21* 8.83±0.22* 8.35±0.23*

3 讨论

相关的研究结果显示，髓液涂片的染色效果会直接影响到检验人员对其中血细胞形态的观察结果。这是因为，骨髓涂片的染色效果若未达理想状态，就无法准确地辨别其中细胞的异常形态及特殊结构，进而导致相关疾病的漏诊、误诊[2]。张红祥等[3]的研究表明，影响髓液涂片染色效果的因素较多，如涂片的厚度与薄度、染色液的成熟度、染色时间的长短、染色液的温度等。有研究表明，只要达到“长时间及低浓度”的染色要求，就可确保涂片的染色效果具有明显的层次感，达到理想的染色效果。瑞氏染色法对细胞核具有良好的染色反应，但对细胞质的染色效果却相对较差；姬氏染色法的染色效果与瑞氏染色法的染色效果相反。因此，可采取混合染色法对骨髓涂片进行染色，以充分融合瑞氏染色法和姬氏染液法的优点，使涂片获取最佳的染色效果。在对骨髓涂片混合染色时，需先用姬氏染液对其进行染色处理，再用瑞氏染色液对其进行染色处理，以便获得良好的染色效果。这是因为，姬氏染液的溶解度可在甲醇溶液中达到理想的状态，瑞氏染色液可在甘油中达到理想的溶解度。本次研究的结果显示，与使用姬氏染色法和瑞氏染色法相比，用混合染色法对骨髓涂片进行染色效果的评分更高，P＜0.05。使用姬氏染色法和瑞氏染色法对骨髓涂片进行染色效果的评分相比，P＞0.05。这说明，在进行骨髓细胞形态学检验中使用混合染色法对骨髓涂片进行染色，可获得理想的染色效果。笔者对本次研究总结如下：1）对骨髓涂片进行混合染色后，在5 min时其染色的效果不太理想，在20 min～1 h时其染色效果理想，在2 h后其染色效果呈下降的趋势（即随着染色时间的增加，染色效果越来越差）。2）进行混合染色可使骨髓细胞具有较强的染色对比效果，使骨髓细胞浆能够表现出蓝色状态，并使骨髓细胞核表现出紫红色状态（这两者之间有明显的区别），而且涂片的整体染色效果具有明显的层次感，便于检验人员深入地观察细胞的结构，仔细地鉴别骨髓中的幼稚细胞。