采用HPLC法检测三子养亲汤水煎液中主要成分含量

金典，刘佳玲，王丽娟，张博达，李俊玲，陈思敏

三子养亲汤是临床常用方，主要用于治疗慢性支气管炎、咳嗽、小儿喘息性肺炎等[1]。该方剂由白芥子、莱菔子和紫苏子三味药按一定比例组方。药典中规定紫苏子中迷迭香酸含量为质量评价的重要指标，白芥子和莱菔子质量评价指标为芥子碱硫氰酸盐。研究表明复方三子养亲汤中镇咳、平喘的有效部位集中在低极性，即石油醚提取物和乙醇提取物，而祛痰部位主要集中在高极性，即水提物[2]。临床常用剂型为水煎液，沿用药典中规定质控指标是否合理，有待验证。因此，本课题组采用HPLC法对三子养亲汤中紫苏子的迷迭香酸和白芥子及莱菔子的芥子碱硫氰酸盐分别进行含量检测，并用相同方法对其复方制剂水煎液中相应成分也进行测定。该实验一方面可对三子养亲汤水煎剂的疗效物质基础进行初步探索，另一方面也为三子养亲汤复方质量控制相关指标的拟定提供初步的实验依据。

1 仪器与药品

1.1 仪器及试剂

Agilent Technologies高效液相色谱仪、ULTRASONIC CLEANER 洁拓超声波机械超声波清洗机、优普纯水制造系统（上海优普实业有限公司）远红外可控调温电炉（四川成都市聚森电器厂）、电子天平（深圳市无限量衡器有限公司）；

芥子碱硫氰酸盐（成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST-HPLC）、迷迭香酸（成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST-16040512）。

1.2 样品制备

莱菔子(吉安康药业有限公司生产)、白芥子(四川博仁药业有限公司生产)、紫苏子（四川恒康源药业有限公司生产）均购买于成都中医药大学附属医院。

白芥子：按药典方法将白芥子打粉过筛后，进行甲醇提取后超声处理，相同方法提取三次，合并滤液，减压回收溶剂，残渣加入乙腈-0.08 mol·L-1磷酸二氢钾溶液（10:90）溶解，过滤后转移定容后备用[3]。

莱菔子：按药典规定方法将莱菔子进行打粉过筛，取莱菔子粉末加入70%甲醇进行超声处理，补足损失甲醇重量，摇匀，滤过杂质后，取续滤液，置于棕色容量瓶内保存[4]。

紫苏子：按药典规定方法将紫苏子进行打粉后过筛，紫苏子粉末加入到80%甲醇中加热回流2 h，冷却至室温，加一定80%甲醇补足损失重量，摇匀，滤过杂质，取续滤液，即得[5]。

三子养亲汤：将紫苏子、莱菔子、白芥子三味药按1:1:1混合后，炒爆，取混匀炒爆后的三子，进行打粉，过筛后去一定混合粉末加入70%甲醇中，盖紧塞子，连同锥形瓶和塞子一同称定重量，进行超声处理（条件：功率250 w，频率50 KHz，时间30分钟），冷却至室温后，再次连同锥形瓶及塞子称定重量，用70%甲醇补足减少的重量后，摇匀，滤过杂质后，取续滤液，即得。

1.3 标准品制备

取迷迭香酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成80 μg·mL-1的溶液；取芥子碱硫氰酸盐对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.2 mg·mL-1的溶液。备用。

2 方法与结果

2.1 采用HPLC对三子养亲汤中紫苏子、白芥子、莱菔子中质控物质进行含量测定

2.1.1 色谱条件 色谱柱：C18柱（4.6×250 mm，5μm），流动相：甲醇-0.1%甲酸（40:60），流速：1 mL·min-1，检测波长：330 nm，柱温：29 °C。

按照药典规定实验方法，用上述条件对紫苏子、白芥子、莱菔子及三子养亲汤中相应成分进行含量测定。

2.1.2 结果

图1 迷迭香酸标准品图

图2 紫苏子供试品溶液

如图1图2所示，紫苏子供试品与迷迭香酸供试品均在保留时间为7.6 min左右出峰，计算得到紫苏子供试品溶液中迷迭香酸含量为0.423%。根据药典记载，所含迷迭香酸不得少于0.25%，所以该紫苏子的质量符合规定。

图3 芥子碱硫氰酸盐含量

图4 莱菔子供试品溶液

如图3图4所示，莱菔子供试品溶液与芥子碱硫氰酸盐均在保留时间为3.4 min左右出峰，计算莱菔子供试品溶液中芥子碱硫氰酸盐含量为0.344%。

图5 白芥子供试品溶液

如图3图5可见，白芥子供试品溶液与芥子碱硫氰酸盐均在保留时间为3.4 min左右出现了一个明显的峰，计算可得白芥子供试品溶液中芥子碱硫氰酸盐含量为0.169%。

含量%迷迭香酸标准品 7.668 472.21954 29.41734 100紫苏子供试品 7.569 6244.33350 425.87372 98.0447 0.423芥子碱硫氰酸盐标准品 3.432 6960.88818 809.21729 92.7584莱菔子供试品 3.401 2996.05933 410.16104 85.7029 0.344白芥子供试品 3.474 2951.71094 377.72601 87.9106 0.169保留时间min峰面积mAU*s峰高mAU峰面积%

2.2 采用HPLC对复方三子养亲汤中迷迭香酸、芥子碱硫氰酸盐进行含量测定

2.2.1 色谱条件：同2.1下色谱条件

2.2.2 结果

图6 复方三子养亲汤甲醇提取物供试品溶液

如图6在保留时间为3.8 min左右出现明显的峰，计算得芥子碱硫氰酸盐含量为0.333%。复方三子养亲汤中未检测出迷迭香酸的峰。

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3 讨论

三子养亲汤在临床上大量用于治疗咳嗽、哮喘等症状研究白芥子在不同溶媒提取下提取物的镇咳祛痰平喘药理作用时发现镇咳成分极性偏小，祛痰成分极性偏大，水溶性大；平喘成分的极性小，脂溶性大[6]。因此推断在三子养亲汤水煎液中，白芥子水提物的成分中祛痰作用大于镇咳和平喘作用。张巍峨等人研究莱菔子提取物的镇咳、祛痰、平喘作用，结果表明炒莱菔子醚提取物和生莱菔子醇提取物大剂量组具有较强的镇咳、祛痰作用[7]。当病症侧重不同时，我们可以选取君药，分食积重君莱菔子；痰阻重君白芥子；气逆重君紫苏子。合而用之可使气顺而痰消，食积得化，咳喘得平。本实验用药典的方法进行单味药的含量测定，结果显示单味药的有效成分含量在药典所规定的范围内，即单味药物的质量符合药典规定。而配伍水煎煮后，迷迭香酸未能经过高效液相法检测出来，而芥子碱硫氰酸盐的含量也随着水煎煮方法下降。说明配伍并不只是简单的化学成分加和作用，而是复杂的物理化学变化。因此要针对不同模型给药时，就要从多方面因素来考虑紫苏子、莱菔子和白芥子的配伍量效关系。