紫黄银金甘组方对鸡NDV抗体效价、体重和料肉比的影响

骆雨欣，阎 俊，季凤艳 ，焉智伟，单文琪，李金凤，张师源，李敬双⋆

（1.锦州医科大学，辽宁 锦州 121001；2.辽宁省瓦房店市李官动物卫生监督所，辽宁 瓦房店 116300；3.辽宁省葫芦岛市建昌县黑山科动物卫生监督所，辽宁 建昌 125300）

鸡群生产性能的高低主要取决于传染病尤其是病毒性传染病的防控效果，目前病毒性传染病的控制主要采取疫苗防疫的方法，而免疫失败时有发生，免疫增强剂是提高免疫效果的有效措施。化学免疫增强剂药物残留量大，对食品卫生造成危害，易造成生产性能降低[1]。中药免疫增强剂药物残留量小，安全性好，能延长免疫时间，有的还能提高生产性能。特别是复方中药免疫增强剂通过药物配伍药效更佳，越来越受到科研人员的重视[2]。

紫锥菊、黄芪、银杏、金银花和甘草都是我国传统的中药，广泛应用于医学和兽医临床。紫锥菊主要含有多酚类（主要包括菊苣酸、绿原酸、咖啡酸和紫锥菊皂甙）、黄酮类、多糖类和挥发油等，具有抗病毒、抗菌、抗炎、抗氧化和提高免疫力等功效[3]。黄芪主要含有黄芪多糖、黄酮和三萜皂甙类等，具有增强免疫、抗菌、降血压、益气和活血等功效[4]。银杏主要含有银杏黄酮、萜内酯、儿茶素和多酚类等，具有增强免疫功能、抗菌、消炎、抗病毒、改善心血管和降血脂等功效[5]。金银花主要含有绿原酸类、三萜皂苷类、黄酮类和挥发油等，具有提高免疫力、抗菌、清热解毒、保肝利胆和降血脂等功效[6]。甘草主要含有三萜类、黄酮类和多糖类等，具有增强免疫、抗菌、抗病毒和抗过敏等功效[7]。我国是世界上研究甘草最早的国家，在《神农本草经》中就有记载，称为“中药之王”[8]。本研究按照中医和中兽医理论，辨证施治的原则，依据紫锥菊、黄芪、银杏叶、金银花和甘草的性能与功效，采用紫锥菊、黄芪、银杏叶、金银花和甘草提取物（简称紫黄银金甘）组方，探讨紫黄银金甘组方对鸡的免疫功能和生产性能的影响，为复方中药的开发和利用提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物1日龄海兰褐公鸡雏，购自锦州医科大学实习农场。

1.1.2 饲料雏鸡配合饲料购自大成农技（葫芦岛）有限公司。

1.1.3 疫苗和试剂鸡新城疫活疫苗（La sota株）购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（批号201702）；肝素抗凝管购自南京奥多福尼生物科技有限公司（批号20170422）；鸡新城疫病毒血凝抑制试验抗原购自中国兽医药品监察所（批号201703）。

1.1.4 试验药品紫锥菊提取物主要成分为紫锥菊多酚（菊苣算、绿原酸、咖啡酸和紫锥菊皂甙），总酚含量4%；黄芪提取物（批号为RL170316）主要成分为黄芪多糖，总含量90%（批号为RL170401）；银杏叶提取物主要成分为萜内酯类和黄酮类，黄酮含量24%～26%，萜内酯含量8%～10%（批号为RL170410）；金银花提取物主要成分为绿原酸，总含量30%（批号为RL170415）；甘草提取物主要成分为甘草甜素、后幕比檀素、槲皮素、刺芒柄花素、甘草甙、甘草类黄酮和甘草酸，总含量30%（批号为RL170418）。均购自西安瑞林生物科技有限公司。左旋咪唑购自广东华南药业集团有限公司（批号为201702）。

1.2 方法

1.2.1 紫黄银金甘药液的制备 紫锥菊、黄芪、银杏叶、金银花和甘草提取物粉剂均为水溶性。按质量份数，将紫锥菊、黄芪、银杏叶、金银花和甘草提取物粉剂混合成紫黄银金甘粉剂（紫锥菊、黄芪、银杏叶、金银花和甘草提取物粉剂分别占40%、20%、20%、10%和10%），分别取紫黄银金甘粉剂20、40和80 g加自来水稀释至1 L，即为20、40和80 g/L紫黄银金甘药液[9-10]。

1.2.2 试验分组与饲养方法利用1日龄海兰褐公鸡雏，设20、40和80 g/L紫黄银金甘组、空白对照组和阳性对照组，每组60只。自由采食、饮水。1日龄开始，在20、40和80 g/L紫黄银金甘组饮水中加入紫黄银金甘（分别按20、40和80 g/L加入紫黄银金甘），在阳性对照组的饮水中加入左旋咪唑（按0.05 g/L加入左旋咪唑），连喂28 d。7日龄所有鸡用鸡新城疫活疫苗免疫，操作与用量参考疫苗说明书进行。

1.2.3 紫黄银金甘对NDV抗体效价的影响

1.2.3.1 分离血清 在21、28、35和42日龄，不同浓度中药组、空白对照组和阳性对照组分别随机抽取20只鸡，翅静脉采血分离血清，2 000 r/min 4℃离心5 min。

1.2.3.2 1%鸡红细胞悬液制备 用成年未进行新城疫疫苗免疫的公鸡，翅静脉采血20 mL，加入肝素抗凝管中，2 000 r/min离心10 min，弃上清，加100 mL生理盐水洗涤血细胞，2 000 r/min 4℃离心10 min，弃上清，反复3次，至上清液透明，收集沉淀的红细胞用生理盐水配制成1%的悬液。

1.2.3.3 血凝和血凝抑制试验检测NDV抗体效价按照姚火春[11]试验方法操作，在96孔“V”形微量反应板上进行。

1.2.4 紫黄银金甘对鸡体重的影响 于7、14、21、28、35、42和49日龄，不同浓度中药组、空白对照组和阳性对照组每组分别随机抽取16只鸡，称量体重。

1.2.5 紫黄银金甘对料肉比的影响 不同浓度中药组、空白对照组和阳性对照组每组设3个小组，每小组10只。在7、14、21、28、35、42和49日龄，每小组称取消耗饲料量和鸡重量，料肉比=消耗饲料重（kg）/鸡体重（kg）。

1.2.6 统计学处理 数据用平均数±标准差表示，用统计软件SPSS 17.0进行一维方差分析组间差异显著（P＜0.05）和极显著（P＜0.01）。用相同字母表示差异无统计学意义的各组，用不同字母表示差异有统计学意义的各组；字母A表示均值最大组，B、C、D按大小顺序分别表示有统计学意义（P＜0.01）的其他各组，用字母a表示均值最大组，b、c、d、e按大小顺序分别表示有统计学意义（P＜0.05）的其他各组。

2 结果与分析

2.1 紫黄银金甘对N N D D V V抗体效价的影响 紫黄银金甘对NDV抗体效价的影响见表1。

阳性对照组、紫黄银金甘各浓度组与空白对照组比较：21日龄和28日龄，阳性对照组、紫黄银金甘各浓度组NDV抗体效价均极显著（P＜0.01）高于空白对照组。35日龄和42日龄，阳性对照组NDV抗体效价显著（P＜0.05）高于空白对照组，紫黄银金甘各浓度组NDV抗体效价均极显著（P＜0.01）高于空白对照组。表明在刺激NDV抗体产生上紫黄银金甘具有促进作用。

表1 紫黄银金甘对NDV抗体效价（Log2）的影响Table 1 Effect of ZHYJG on NDV Antibody Titers

紫黄银金甘各浓度组与阳性对照组比较：21日龄，紫黄银金甘各浓度组NDV抗体效价与阳性对照组均无统计学意义（P＞0.05）。28日龄，20 g/L和40 g/L紫黄银金甘组NDV抗体效价与阳性对照组均无统计学意义（P＞0.05）。35日龄和42日龄，40 g/L紫黄银金甘组NDV抗体效价显著（P＜0.05）高于阳性对照组；20 g/L和80 g/L紫黄银金甘组NDV抗体效价与阳性对照组均无统计学意义（P＞0.05）。表明在刺激NDV抗体产生上紫黄银金甘药物的有效性。

紫黄银金甘各浓度组之间比较：21日龄，40 g/L紫黄银金甘组NDV抗体效价高于20 g/L和80 g/L紫黄银金甘组，无统计学意义（P＞0.05）。28日龄，40 g/L紫黄银金甘组NDV抗体效价极显著（P＜0.01）高于80 g/L紫黄银金甘组，且显著（P＜0.05）高于20 g/L紫黄银金甘组。35日龄和42日龄，40 g/L紫黄银金甘组NDV抗体效价高于20 g/L和80 g/L紫黄银金甘组，无统计学意义（P＞0.05）。表明40 g/L紫黄银金甘组对刺激NDV抗体产生的效果优于20 g/L和80 g/L紫黄银金甘组。

2.2 紫黄银金甘对鸡体重的影响 紫黄银金甘对鸡体重的影响见表2。

表2 紫黄银金甘对鸡体重的影响Table 2 Effect of ZHYJG on Chicken Weight

阳性对照组、紫黄银金甘各浓度组与空白对照组比较：各日龄，阳性对照组、紫黄银金甘各浓度组鸡体重均极显著（P＜0.01）高于空白对照组。表明在促进鸡生长发育上紫黄银金甘能够发挥作用。

紫黄银金甘各浓度组与阳性对照组比较：7日龄，40 g/L紫黄银金甘组鸡体重与阳性对照组无统计学意义（P＞0.05）。14、21、28和35日龄，20 g/L和40 g/L紫黄银金甘组鸡体重与阳性对照组均无统计学意义（P＞0.05）。42日龄，20 g/L和40 g/L紫黄银金甘组鸡体重均极显著高于阳性对照组（P＜0.01）；80 g/L紫黄银金甘组鸡体重与阳性对照组无统计学意义（P＞0.05）。49日龄，紫黄银金甘鸡增重各浓度组均极显著高于阳性对照组（P＜0.01）。表明在促进鸡生长发育上紫黄银金甘药物的有效性。

紫黄银金甘各浓度组之间比较：7日龄，40 g/L紫黄银金甘组鸡体重显著（P＜0.05）高于20 g/L和80 g/L紫黄银金甘组；14、21、28和35日龄，40 g/L紫黄银金甘组鸡体重极显著（P＜0.01）高于80 g/L紫黄银金甘组，高于20 g/L紫黄银金甘组无统计学意义（P＞0.05）；42日龄和49日龄，40 g/L紫黄银金甘组鸡体重极显著（P＜0.01）高于20 g/L和80 g/L紫黄银金甘组。表明40 g/L紫黄银金甘组对促进鸡的生长发育效果优于20 g/L和80 g/L紫黄银金甘组。

2.3 紫黄银金甘对料肉比的影响 紫黄银金甘对料肉比的影响见表3。

阳性对照组、紫黄银金甘各浓度组与空白对照组比较：各日龄，阳性对照组、紫黄银金甘各浓度组料肉比均极显著（P＜0.01）低于空白对照组。表明在降低料肉比上紫黄银金甘能够发挥作用。

紫黄银金甘各浓度组与阳性对照组比较：7日龄和14日龄40 g/L紫黄银金甘组、21、28、35、42和49日龄20 g/L和40 g/L紫黄银金甘组各日龄料肉比与阳性对照组无统计学意义（P＞0.05）。表明在降低料肉比上紫黄银金甘药物的有效性。

表3 紫黄银金甘对鸡料肉比的影响Table 3 Effect of ZHYJG on Chicken Feed Conversion Ratio

紫黄银金甘各浓度组之间比较：7日龄，40 g/L紫黄银金甘组料肉比显著（P＜0.05）低于80 g/L紫黄银金甘组；低于20 g/L紫黄银金甘组无统计学意义（P＞0.05）。14、21、28、35和42日龄，40 g/L紫黄银金甘组料肉比极显著（P＜0.01）低于80 g/L紫黄银金甘组；低于20 g/L紫黄银金甘组无统计学意义（P＞0.05）。表明40 g/L紫黄银金甘组对降低料肉比的效果优于20 g/L和80 g/L紫黄银金甘组。

3 讨论

3.1 紫黄银金甘对 N D V抗体效价的影响NDV抗体的高低决定着鸡对NDV的抵抗力以及鸡群的感染程度。张月等[12]研究苜蓿多糖对新城疫弱毒苗免疫鸡所产生的免疫调节作用，选择1日龄海兰雏鸡120羽，随机分为4组，每组30羽，7日龄每羽用鸡新城疫活疫苗（La Sota株）免疫，28日龄以相同剂量进行加强免疫。其中3个试验组从7日龄开始分别肌肉注射低、中、高剂量（10、25、50 μg/mL）的苜蓿多糖，对照组注射生理盐水，1次/d，连用7 d。于14、21、28、35、42、49、56日龄，通过静脉采血，用微量法检测血清中新城疫病毒血凝抑制（HI）抗体效价。结果苜蓿多糖能够显著提高血清中新城疫病毒HI抗体效价，中剂量组免疫后期抗体存在时间长，抗体高峰期持续时间也长。甘辉群等[13]利用黄芪、白术、党参、甘草和板蓝根组成的复方制剂（黄芪占40%、党参占20%、白术占20%、板蓝根占15%、甘草占15%），用海兰褐雏鸡设阴性对照组、阳性对照组、复方制剂低、中、高剂量组（按10、20和40 g/kg体重灌服复方制剂，1次/d，连喂5 d），7日龄时除阴性对照组不免疫，其他各组用新城疫灭活疫苗皮下注射。14、21、28、35和42日龄采用微量板法测定抗体效价，结果复方中药制剂能提高NDV抗体效价。柳风祥等[10]利用黄芪、淫羊藿、党参和甘草等中药提取物（黄芪占40%、淫羊藿占25%、党参占25%、甘草占10%），用海兰褐雏鸡设不接病毒对照组，感染网状内皮组织增生症病毒诱发了免疫抑制组，中药提取物在1日龄开始饮水加入2%，直到试验结束。7日龄滴鼻、点眼和肌肉注射新城疫弱毒疫苗。28、35、42日龄采用血凝抑制试验测定NDV抗体效价，结果中药提取物能提高NDV抗体水平。靳双星等[14]利用板蓝根、茯苓、连翘、黄芪、枳实、山楂和白术组成的复方中药制剂，用AA肉仔鸡设对照组、复方中药制剂低、中、高剂量组（饮水中加入0.5%、1%、1.5%的复方中药制剂，连用28 d），7日龄用NDClone-30疫苗滴鼻点眼，14日龄用IBDV疫苗滴口。14、21、28和35日龄采用琼脂扩散沉淀反应测定抗体效价，结果复方中药制剂能提高NDV和IBDV抗体效价。本研究结果，紫黄银金甘能够提高NDV抗体水平，40 g/L紫黄银金甘组效果最好。与上述结果是一致的，说明紫黄银金甘可以调节动物体液免疫功能，增强动物免疫应答能力。

本研究结果显示，NDV抗体效价，21日龄和28日龄紫黄银金甘组与阳性对照组无明显的优势，35、42和49日龄随日龄的增加，紫黄银金甘组越来越好于阳性对照组。表明28日龄停止给药后，紫黄银金甘比化学药物在体内停留时间长，能延长体液中高效价抗体水平的持续时间，从而提高疫苗对动物的保护率，对动物疫病的防控制具有重要作用。

3.2 紫黄银金甘对鸡生产性能的影响牛小飞[9]研究利用黄芪和紫锥菊组方研究对肉鸡生长发育的影响，黄芪和紫锥菊组方促进肉鸡生长发育，降低料肉比，从而提高生产性能。其作用是中药组方本身含有的多糖成份，有显著的营养作用，能满足肉鸡增重的生产需要；中药组方能增强机体的免疫功能，发病率越低生长发育就越快。赵天章等[15]利用黄芪多糖研究对仔鸡免疫功能和生产性能的影响，用1日龄艾维茵肉仔鸡，按常规免疫程序进行免疫。设黄芪多糖不同浓度组（基础日粮加黄芪多糖2%、1%、0.5%和0.1%）和空白对照组，14、28和42日龄测平均料肉比、日采食量和日增重；28日龄和42日龄测外周血T淋巴细胞表面标志和NDV抗体效价，结果显示，黄芪多糖能够提高外周血T淋巴细胞CD4+/CD8+的比值和NDV抗体效价；降低平均料肉比，提高平均日采食量和日增重。本研究结果，紫黄银金甘能够促进鸡的生长发育，降低料肉比。其作用是紫黄银金甘能够增强机体的免疫调节功能，发病率越低生长发育就越快；紫黄银金甘组方中的黄芪多糖对鸡生长起到了营养作用；紫黄银金甘对于提升营养吸收方面可能起到了重要的生物学效应。

4 结论

紫黄银金甘可通过提高NDV抗体效价，来提高机体的免疫功能。可通过促进鸡的生长发育，降低料肉比，来提高鸡的生产性能。