H7N9禽流感患者外周血3种主要固有免疫细胞的变化及意义

崔娟娟， 孙 蔚， 张 星， 朱义玲， 居颂光

（苏州大学附属第一医院感染科，江苏 苏州 215006）

2013年3月，在上海及安徽3例已死亡的患者体内首次分离出一种新型的禽流感病毒H7N9，该病毒可导致严重的致死性呼吸系统疾病[1]。苏州大学附属第一医院是苏州市H7N9禽流感的定点收治医院，该院感染病科近5年来共收治26例H7N9禽流感患者，其中18例好转、7例死亡，另有1例自行出院，预后不明。目前认为H7N9禽流感患者机体免疫系统功能状况是决定病情发展和预后的重要因素。免疫系统包括免疫器官、免疫细胞和免疫分子，其中免疫细胞分为固有免疫细胞和适应性免疫应答细胞。本研究旨在探讨H7N9禽流感患者部分固有免疫细胞的变化，并阐明其变化的临床意义。

1 材料和方法

1.1 研究对象

参照《人感染H7N9禽流感诊疗方案》（2014年版）[2]，选取2013年4月—2017年4月苏州大学附属第一医院收治的H7N9禽流感患者（感染组）25例，其中男20例、女5例，年龄20～83岁。根据患者临床治疗转归分为好转组（18例）和死亡组（7例）。以同期苏州大学附属第一医院体检健康者25名作为正常对照组，其中男16名、女9名，年龄25～75岁。2个组之间性别、年龄差异均无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 检测方法

采用肝素钠抗凝管采集感染组住院第2天清晨、正常对照组体检当日清晨静脉血2 mL，上下颠倒混匀5次后备用。治疗后所测数据均为患者最后1次抽血检测结果。外周血自然杀伤（natural killer，NK）细胞、NK T细胞、单核细胞百分率采用XL AT09010流式细胞仪（美国Beckman-Coulter公司）及配套试剂检测，检测数据采用Flowjo7.6软件分析。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行统计分析。呈正态分布的数据以x ±s表示，组间比较采用t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 感染组与正常对照组外周血NK细胞、NK T细胞、单核细胞百分率比较

与正常对照组比较，感染组治疗前外周血NK细胞百分率差异无统计学意义（P＞0.05），NK T细胞百分率明显降低（P=0.001 8），而单核细胞百分率明显升高（P=0.006 2）。见表1。

表1 感染组与正常对照组3种固有免疫细胞百分率比较（%，）

表1 感染组与正常对照组3种固有免疫细胞百分率比较（%，）

注：与正常对照组比较，*P＜0.05

组别 例数 NK细胞 NK T细胞 单核细胞感染组 25 18.47±2.04 11.31±1.20*14.27±3.73*正常对照组 25 16.68±2.30 18.53±1.72 2.81±0.43

2.2 H7N9禽流感患者中好转组与死亡组治疗前后外周血NK细胞、NK T细胞、单核细胞百分率比较

治疗前，好转组NK细胞百分率高于死亡组（P=0.027 1），而2个组之间NK T细胞、单核细胞间差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

与治疗前相比，好转组治疗后外周血NK细胞百分率明显下降（P=0.044 4），NK T细胞百分率明显升高（P=0.039 0），而单核细胞百分率差异无统计学意义（P＞0.05）。死亡组治疗前后外周血NK细胞、NK T细胞、单核细胞百分率差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 好转组与死亡组治疗前后外周血NK细胞、NK T细胞、单核细胞百分率比较 （%，）

表2 好转组与死亡组治疗前后外周血NK细胞、NK T细胞、单核细胞百分率比较 （%，）

注：与死亡组治疗前比较，*P＜0.05；与同组治疗前比较，#P＜0.05

组别 例数 NK细胞 NK T细胞 单核细胞好转组治疗前 18 20.00±2.52*11.55±1.34 16.39±4.74治疗后 18 12.65±2.30#15.58±1.24#23.42±4.18死亡组治疗前 7 13.57±1.81 10.55±2.89 7.47±2.81治疗后 7 12.62±2.32 4.25±0.73 5.50±1.82

3 讨论

免疫细胞分为适应性免疫应答细胞（CD4+T细胞、CD8+T细胞、B淋巴细胞）和固有免疫的组成细胞（NK细胞、NK T细胞、单核细胞等）。如果这些细胞在数量上或功能上发生变化，机体免疫平衡将被打破，导致疾病发生或病情恶化。

本研究结果显示，与正常对照组比较，感染组治疗前外周血NK T细胞百分率明显降低，而单核细胞百分率明显升高。治疗前，H7N9禽流感患者中好转组NK细胞百分率高于死亡组，提示NK细胞百分比可能与患者的预后相关，若NK细胞百分比较高，则预后较好；好转组治疗后NK细胞百分率降低，NK T细胞百分率升高，证明治疗后好转的H7N9禽流感患者固有免疫细胞水平向正常转变，固有免疫功能趋于正常。

黄燕等[3]发现H7N9禽流感患者好转组治疗后外周血Th1细胞百分率较治疗前明显下降（P＜0.05），可能与患者NK细胞水平下降，分泌的γ-干扰素（interferon gamma，IFN-γ）减少有关。单核细胞作为抗原提呈细胞，可将抗原肽-主要组织相容性复合物（major histocompatibility complex，MHC）Ⅱ类分子复合物提呈给CD4+T细胞，促进其发挥功能。本研究结果显示，感染组外周血单核细胞百分率较高，与毛会军等[4]的研究结果（H7N9禽流感患者治愈组治疗后外周血CD4+T绝对数较治疗前升高）相符。NK T细胞治疗后上升可能与其杀伤病毒感染的靶细胞的功能相关。

JI等[5]对28例H7N9禽流感患者预后影响因素分析显示，≥60岁[比值比（odds ratio，OR） =30.0，95%可信区间（confidence interval，CI） 2.85～315.62]、有基础肺部疾患（OR=14.40，95%CI 1.30～159.52）、高血压（OR=6.67，95%CI 1.09～40.43）是死亡的危险因素。本研究中死亡组年龄为60～83岁，并伴有高血压等慢性疾病，可能是其死亡的原因之一。

有研究结果显示，H7N9感染者与重症急性呼吸综合征及H5N1禽流感一样存在突发的细胞因子风暴[6]，机体的免疫平衡状态被打破，表现为免疫抑制作用弱而炎症反应强的相对过激或亢进状态。本研究结果显示，H7N9禽流感患者好转组外周血NK细胞、NK T细胞百分率治疗前后差异均有统计学意义（P＜0.05），而死亡组治疗前后差异均无统计学意义（P＞0.05）。由此说明细胞免疫异常在此类病毒性流感的发病机制中作用明显，治疗后若患者免疫失衡状态得以改善，可能有较好的临床预后。因此，监测H7N9禽流感患者免疫细胞相关指标，对患者预后评估具有重要的参考价值。由于本研究中H7N9禽流感患者例数较少，26例患者中有1例自动出院，预后不明。此外，患者诊疗是否及时直接影响着病程长短及预后，且患者年龄偏高，部分患者还同时存在一定的基础疾病，研究数据可能存在一定偏差。