高倍镜视野下血涂片估测法在血小板计数检测中的价值

赵 杰，赵春阳

（天津市第三中心医院 天津市肝胆疾病研究所 天津市人工细胞重点实验室卫生部人工细胞工程技术研究中心，天津 300170）

血小板（platelet，PLT）计数是衡量止血和凝血功能的重要指标，其检测结果的准确性对化疗患者和PLT输注患者以及血液疾病的诊疗都有着十分重要的作用。虽然全自动血液分析仪操作简单、快速、准确性高、重复性好，可弥补传统显微镜手工计数法操作繁琐、耗时等不足，但其在方法学方面存在一定的缺陷，不能完全排除干扰因素对检测结果的影响。当PLT计数出现假性增高或降低的异常情况时，血涂片检测和显微镜手工计数法复查就显得十分重要。如果血涂片PLT分布均匀，且无异常聚集，血涂片检测可作为PLT计数估测的有效方法[1]。本研究在高倍镜视野下估测血涂片PLT计数，将估测结果与全自动血液分析仪检测结果进行比较，评估血涂片估测法在PLT计数中的临床价值。

1 材料和方法

1.1 研究对象

收集天津市第三中心医院2016年12月—2017年4月血常规检验标本100份。根据血液分析仪PLT计数检测结果，将标本分为：＜100×109/L组（30例）、（100～300）×109/L组（35例）、＞300×109/L组（35例）。

1.2 仪器与试剂

采用ADVIA 2120i全自动血液分析仪（德国Siemens公司）及配套试剂、校准品和质控品；CX-31型普通光学显微镜（日本Olympus公司）。

1.3 方法

1.3.1 仪器法 采用ADVIA 2120i全自动血液分析仪进行PLT计数。使用E-cal校准，每天进行3个水平E-check质控，均在控。所有标本均在采集后2 h内完成检测。

1.3.2 血涂片估测法 取混匀后新鲜血液标本1滴，置于载玻片一端1 cm处或整片3/4处；左手持载玻片，右手持推片从血滴前方向后移、接触血滴，使血滴沿推片边缘展开。按血涂片推片与载玻片角度（30°、45°、60°），制备3张血涂片，分别编号为A、B、C，并进行瑞氏-吉姆萨染色。待血涂片干燥后，在每张血涂片体尾交界处红细胞平均分布且细胞间无重叠区用显微镜油镜（100×）计数10个视野，记录每个视野的PLT计数，并计算其均值。

1.3.3 相关性分析 将仪器法与血涂片检测结果进行线性回归分析，计算Z值：Z=仪器法PLT计数/血涂片每高倍镜视野下PLT计数均值。

1.3.4 验证 每份标本都制备1张头体尾分明、厚薄适宜、制片及染色良好的血涂片，分别对4个显微镜油镜下视野的PLT进行计数，并计算得到血涂片估测值（×109/L），将血涂片估测值与仪器计数值进行比较。

1.4 统计学方法

采用Excel 2007软件及SPSS 17.0软件对数据进行统计分析。相关性分析采用线性回归进行评估；验证结果采用配对t检验进行分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 相关性分析

A组、B组、C组3组仪器法PLT计数与血涂片每高倍镜视野下PLT计数均值呈高度相关（P＜0.001），Z值分别为10.00、10.07、9.98，取整数位10。见图1。

图1 仪器法PLT计数与血涂片每高倍镜视野下PLT计数均值的相关曲线

2.2 验证结果

经验证，仪器法和血涂片估测法检测结果具有较好的相关性（P=0.650）。见图2。

3 讨论

图2 仪器法与血涂片估测法PLT计数的相关曲线

PLT在生理性止血和某些病理过程中发挥着重要的作用。对手术患者而言，当PLT计数 ＞50×109/L 且PLT功能正常时，手术过程中一般不会出现明显出血；当PLT计数＜50×109/L时，可导致皮肤黏膜紫癜，患者术后可能会出现出血等现象；当PLT计数＜20×109/L时，可发生自发性出血，需预防性输注PLT，患者不宜进行手术[2]。

电阻抗法和荧光化学染色法（光学法）是目前全自动血液分析仪常规检测PLT的主要方法。然而，全自动血液分析仪无法对凝集体结构、PLT计数进行确认，这会使得仪器法PLT计数出现假性减少的现象[3]。冷球蛋白血症患者血浆中存在冷球蛋白，这些小颗粒往往会被误认为PLT，从而使PLT计数假性增加；另外，小红细胞及巨大PLT也会影响PLT计数[4]。因此，当全自动血液分析仪PLT计数减少时，应考虑PLT假性减少的情况；当出现PLT相关仪器报警提示时，应进行血涂片检测和显微镜手工计数法复查估测PLT计数。

血涂片检测和显微镜手工计数法复查除了可以对PLT进行计数之外，还可在血涂片染色后观察到PLT的形态、聚集性和分布情况。血涂片估算法可在一定程度上减少标本的复检频率，降低成本，减少标本周转时间。本研究计算出的仪器法与血涂片估测法PLT计数Z值为10。相关性分析结果显示，仪器法PLT计数与血涂片每高倍镜视野下PLT计数均值呈高度相关（P＜0.001）。通过对100份标本进行反向验证，得到血涂片估测值与仪器计数值差异无统计学意义（P=0.650）。

综上所述，在血涂片PLT分布均匀，且无PLT异常聚集的情况下，可利用Z值估测PLT计数。高倍镜视野下血涂片估测法估测PLT计数具有十分重要的意义，当出现非PLT聚集因素导致PLT计数假性增加或减少的现象时，可利用Z值估测PLT计数，同时应利用血涂片检测和显微镜手工计数法进行复查。