CELL-DYN-Sapphire 与XN-9000血液分析仪有核红细胞计数准确性的比较及应用

张 驰，李 琴，张洪波，管 青

（华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科，湖北 武汉 430030）

有核红细胞（nucleated red blood cell，NRBC）属于未成熟红细胞，因各种原因使骨髓红系幼稚细胞被释放而出现在外周血中。刚出生的婴幼儿外周血中可见NRBC，随年龄增长会从血液中消失。成人外周血一旦发现NRBC，则大多为病理状态，提示血液疾病的可能，如各类增生性贫血、白血病、红白血病、骨髓异常增生综合征、髓外造血等，应追踪检查和诊断，并及时对患者进行治疗[1-2]。长期以来，NRBC计数都依赖于显微镜形态学镜检，该法虽为金标准，但也存在形态学技术要求高、工作量大、效率低等缺陷。随着科技的发展，现在很多血液分析仪已具备自动化检测NRBC的功能[3-5]，有自动化程度高、检测速度快、血样用量少、生物危害小等优点，但各种仪器各有特点，也给检验人员选择带来了困难。本研究旨在通过评价XN-9000血液分析仪（以下简称XN-9000）和CELL-DYN-Sapphire血液分析仪（以下简称CD-Sapphire）检测NRBC的性能，并与人工显微镜镜检进行比对，根据其检测性能制定合适的NRBC复检规则。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取华中科技大学同济医学院附属同济医院住院患者113例，其中男62例、女51例，年龄0～73岁，包括增生性贫血49例、新生儿21例、白血病17例、肝癌5例、胃癌2例、其他19例。采用真空采血管（美国BD公司）采集所有患者静脉血2 mL，乙二胺四乙酸二钾抗凝，并在3 h内完成检测。

1.2 仪器与试剂

CD-Sapphire及配套试剂、质控品（美国雅培公司）、XN-9000及配套试剂、质控品（日本Sysmex公司）、SP-1000i全自动推片机（日本Sysmex公司），Leica光学显微镜（德国Leica公司）、瑞氏-吉姆萨染液（珠海贝索公司）。

1.3 方法

1.3.1 仪器法 严格按仪器标准操作规程操作，检测前进行保养、校准及性能评价，每天1次室内质控在控，CD-Sapphire选择“CBC+Resistant 红细胞[L++]通道”（难溶红细胞模式）检测，XN-9000选择WNR通道[白细胞（WBC）+NRBC通道]检测，检测结果保留2位小数，以个NRBC/100个WBC表示。

1.3.2 镜检法 取乙二胺四乙酸二钾抗凝血标本，在SP-1000i全自动推片机上制备标准血片，如血量达不到仪器制片要求，按《全国临床检验操作规程》（第4版）[6]要求手工制片并染色。每份标本制片2张，由2名细胞形态学经验丰富的主管技师每张各计数200个WBC，同时计数NRBC数量，计算均值。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 2种仪器检测NRBC与镜检法NRBC计数总体结果比较

采用镜检法、CD-Sapphire、XN-9000检测105例标本的NRBC，结果分别为（7.89±1.25）、（11.07±1.37）、（8.67±1.24）NRBC个/100个WBC。

2.2 2种仪器检测NRBC的敏感性和特异性

以镜检法为金标准。镜检法计数NRBC＞0，仪器法检测NRBC＞0为真阳性；镜检法计数NRBC＞0，仪器法检测NRBC=0为假阴性；镜检法计数NRBC=0，仪器法检测NRBC＞0为假阳性；镜检法计数NRBC=0，仪器法NRBC=0为真阴性。2种仪器的敏感性和特异性见表1。

表2 CD-Sapphire、XN-9000检测NRBC的性能比较

2.3 2种仪器检测NRBC与镜检法NRBC计数的相关性分析

相关性分析显示2种仪器与镜检法的NRBC计数结果均呈正相关。CD-Sapphire与镜检法的回归方程为Y=0.947X+3.604（r=0.867，P＜0.05），见图2。XN-9000与镜检法的回归方程为Y=0.968X+1.036（r=0.974，P＜0.05），见图3。

2.4 2种仪器与镜检法NRBC计数的一致性分析

Bland-Altman差异图显示，CD-Sapphire与镜检法计数结果差异的95%一致性界限为（-11.05～17.41）个NRBC/100个WBC，偏移为3.18个NRBC/100个WBC，见图4；XN-9000和镜检法计数结果差异的95%一致性界限为（-5.08～6.64）个NRBC/100个WBC，偏移为0.78个NRBC/100个WBC，见图5。XN-9000与镜检法的一致性优于CD-Sapphire。

图1 CD-Sapphrie与镜检法NRBC计数的相关性

图3 XN-9000与镜检法NRBC计数的相关性

图4 CD-Sapphrie与镜检法NRBC计数的偏移分析

图5 XN-9000与镜检法NRBC计数的偏移分析

2.5 2种仪器的NRBC镜检规则的建立

选择仪器法检测NRBC＞0的数据，再以镜检法作为参考绘制ROC曲线（镜检法≥1个NRBC/100WBC为阳性）。CD-Sapphire和XN-9000的曲线下面积分别为0.85和0.96。见图6。

当CD-Sapphire设定NRBC≥3.70个NRBC/100个WBC为镜检规则时，敏感性（81.9%）和特异性（77.8%）最佳，NRBC检出的假阳性率为22.63%，假阴性率为20.76%；当XN-9000设定NRBC≥2.42个NRBC/100个WBC为镜检规则时，敏感性（82.6%）和特异性（94.4%）最佳，NRBC检出的假阳性率为7.60%，假阴性率为18.10%。根据ISO 15189的要求，血常规指标镜检的复检规则必须符合假阴性率≤5%[7-8]，所以当CD-Sapphire设定NRBC≥1.38个NRBC/100WBC为镜检规则时，假阳性率为55.56%，假阴性率为4.17%；当XN-9000设定NRBC≥1.26个NRBC/100个WBC为镜检规则时，假阳性率为22.20%，假阴性率为4.20%。见表3。

图6 CD-Sapphire、XN-9000结果的ROC曲线

表3 CD-Sapphire和XN-9000检测NRBC不同镜检规则下检测性能的比较

3 讨论

外周血中NRBC的出现代表一种病理状态，对大多数血液分析仪WBC计数与分类计数有一定干扰。因此，NRBC的准确检测有着较为广泛的意义。采用全自动血液分析仪进行NRBC检测是近年来的新技术，逐渐应用于临床[9]。CDSapphire是美国雅培公司生产的新一代血液分析仪，在传统电阻抗和流式细胞术基础上，增加了半导体激光和核酸荧光染色技术，并采用多角度偏振光散射来检测NRBC[10-12]。XN-9000血液分析仪采用WNR通道（即WBC/嗜碱性粒细胞和NRBC检测通道）检测NRBC，该通道专用于WBC、嗜碱性粒细胞和NRBC计数，并针对WBC增加了NRBC自动修正功能。

本研究以镜检法NRBC计数为金标准，与CD-Sapphire和XN-9000检测NRBC的结果进行比对分析。CD-Sapphire与XN-9000在检测NRBC方面与镜检法都具有良好的相关性，但XN-9000与镜检法相关性（r=0.974）优于CDSapphire（r=0.867）。XN-9000检测NRBC的敏感性和特异性（98.61%和90.24%）略好于CD-Sapphire（95.83%和56.10%），曲线下面积为0.96，也高于CD-Sapphire（0.85）。Bland-Altman差异图显示XN-9000与镜检法有更好的一致性（偏移为0.78个NRBC/100个WBC）。为避免NRBC干扰WBC计数的结果，对于出现NRBC的血液标本应进行人工显微镜镜检[12-13]。所以根据不同种类血液分析仪的性能制定各自合适的NRBC镜检规则十分必要。本研究结果显示，在满足假阴性率≤5%的条件下，XN-9000和CD-Sapphire NRBC镜检阈值差别不大，分别为≥1.26个NRBC/100个WBC和≥1.38个NRBC/100个WBC，但XN-9000假阳性率（22.20%）要低于CD-Sapphire（55.56%），可减少无效复检的数量。因此，各实验室应根据自身特点和需求，选择适合本实验室的血液分析仪。