香诃止泻颗粒剂提取分离和成型工艺研究

2018-11-25柯瑾梁玲朱培芳周田婷乔宏亮熊磊

云南中医中药杂志 2018年7期

柯瑾梁玲朱培芳周田婷乔宏亮熊磊

摘要：目的建立香诃止泻颗粒剂提取分离和成型工艺条件。方法采用L9（3）4正交设计法水提分离工艺进行考察，并通过单因素考察建立颗粒剂成型工艺。结果香诃止泻颗粒剂提取分离工艺优选为：12倍水，浸泡2.5 h，煎煮3次，每次1.0 h，合并煎液，药液浓缩至相对密度0.8，10 000 r/min高速离心30 min，得上清液。成型工艺优选为：上清液浓缩至相对密度1.0，按药辅比1：1.5加入辅料混匀后，泵速1.0mL/min，进风口温度130℃，出风口温度90℃，喷雾制备细粉，用95%乙醇为润湿剂制备软材后，挤出制粒。结论优化的提取、分离和成型工艺合理、可行、稳定可控，可为申报医疗机构制剂奠定基础。

关键词：香诃止泻颗粒剂;葛根素;离心分离;喷雾干燥

中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2018）07-0065-04

Study on Extraction，Isolation and Formation of Xianghe-Made Anti-Diarrhea Granules

KE Jin LIANG Ling ZHU Pei-fang YIN Na ZHOU Tian-ting QIAO Hong-liang XIONG Lei

（1. Yunnan Unversity of Traditional Chinese Medicine，Kunming 650500;

2. Puer Songmao Diancao Liuwei Pharmaceutical co. LTD，Puer 665000;

3. Julin Zixin Banruo Pharmaceutical Group Limited，Qingshi132300）

【Abstract】Objective：To establish the conditions of extraction，isolation and formation of Xianghe-made anti-diarrhea granules. Methods：The L9（3）4 orthogonal design method was used to investigate the extraction and isolation processes. And the granule formation process was established through one factor investigation method. Results：The extraction and isolation processes of Xianghe-made anti-diarrhea granules were indicated as follows：resolve Xianghe in 12 times of water; soak it for 2.5 hours，boil it for an hour，repeat for 3 times and combine the liquid，concentrate the decoction to relative density as 0.8，centrifuge it at 10 000 r/min for 30 minutes to obtain the supernatant. The formation process was preferred as follows：concentrate the supernatant to a relative density of 1.0，adjust the ratio of drug component to auxiliary component as 1 to 1.5 with 1.0mL/min of pump speed，set the air inlet temperature as 130℃，and the outlet temperature as 90℃ to spray and make fine powder，wet the soft material with 95% ethanol and form granules. Conclusion：The optimized extraction，isolation and formation processes are reasonable，feasible，stable and controllable，and can lay the foundation for the application of officially medical agents.

【Key words】Xianghe-made anti-diarrhea granules，puerarin，isolation by centrifugation，spray for drying

香诃止泻颗粒剂源于云南省名中医熊磊治疗小儿泄泻的临床效验方，临床疗效确切。本方具芳香化湿、运脾止泻之功，主治小儿脾气不运、湿浊内阻之泄泻[1]。由云南主产药材藿香、葛根、诃子、石榴皮等9味中药组成。中医认为，泄泻病变主要在脾胃，尤其与脾的运化功能失调关系密切[2]。脾主升清，胃主降浊，若脾胃失常，清气不升，浊气不降，清浊相并，下走大肠则至泄泻。前人亦有“无湿不成泻”、“湿多成五泻”之说，故治疗上总以运脾化湿为基本原则[3]。

香诃止泻汤中藿香味辛、性微温、入脾胃经，具有芳香化浊，化湿止呕之功[4];诃子性平、味酸涩，酸能收敛，澀能止泻[5]，与藿香共为君药，两药相配，共凑健脾化湿、温胃化浊、涩肠止泻之功，且有标本兼治之妙。葛根味辛甘、性凉，入脾胃经，具有生津止渴，升阳止泻之功[6]，茯苓健脾利水渗湿[7]，车前子渗湿止泻，能“利小便实大便”[8]，三药共为臣药。其余药物能行气、化湿、消痞，分别针对呕吐、痞胀、疼痛等泄泻伴随症状起辅助治疗作用。诸药合用，共凑健脾除湿、运脾化浊、行气止痛、温中固涩之效，使湿去脾运则腹泻自愈。剂型选择为疗效确切、服用方便、便于携带、成本低、口感好、儿童顺应性好的颗粒剂，既保持了传统的中医药用药特色，又能最大限度地提取并保留处方中药物的有效成分，发挥处方的综合治疗作用。同时颗粒剂还具备性质稳定、质量可控、便于规模化生产等优点，是医疗机构制剂常用剂型[9]。本研究应用新型干燥方法-喷雾干燥，该方法成型快速，辅料用量小，制得颗粒剂流动性和溶化性良好[10]。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器所用中药材均选用《中国药典》（2015版一部）收载的正品。广藿香（批号：150201）;诃子（批号：151101）;葛根（批号：150101）;石榴皮（批号：150301）;茯苓（批号：150101）;车前子（批号：151001）;白术（批号：151201）;山楂（批号：150326）;仙鹤草（批号：151201）均购自云南泰华丰功药业有限公司。葛根素对照品（批号：151102，成都普菲德生物技术有限公司）。甲醇（色谱纯，默克股份两合公司）;磷酸、乙醇（分析纯，天津市大茂化学试剂厂）;纯净水（娃哈哈公司）。

Agilent1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司）;C18色谱柱（ZOR BAX SAX-C18 4.6×250 mm，5 μm）;高速离心机（上海手术器械厂）;十万分之一分析天平（上海菁海仪器有限公司）;电子秤（余姚市金诺天平仪器有限公司）;超声波清洗机（YL-040S型，上海冠特超声仪器有限公司）;电子调温电热套（PHTW型，巩义市器华仪器有限责任公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 葛根素含量测定方法考察

1.2.1.1 色谱条件 C18色谱柱（ZOR BAX SAX-C18，4.6×250 mm，5 μm）;流动相：甲醇-水（25：75）;检测波长：250 nm;柱温：25℃;流速：1.0 mL/min。理论板数按葛根素峰计算应不低于4 000。

1.2.1.2 对照品溶液的制备取葛根素对照品适量，30%乙醇溶解，超声30 min，制成每1 mL含51 μg的溶液，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

1.2.1.3 供试品溶液制备按处方比例称取1倍量的藿香、诃子、葛根等药材，按一定条件进行煎煮，所得药液过滤、浓缩、定容至250 mL，精密吸取1.5 mL，置蒸发皿中水浴蒸干，放冷。用30%乙醇溶液溶解并转移至50 mL容量瓶中，超声30 min，放冷，补足减失重量，用0.45 μm微孔滤膜过滤，续滤液即为供试品溶液。

1.2.1.4 线性关系考察精密吸取对照品溶液1、2、4、8、12、20 μL进样，按照“1.2.1.1”项下的色谱条件测定峰面积，以葛根素峰面积（Y）对其含量（X）进行线性回归，

1.2.1.5 精密度考察精密吸取对照品溶液10 μL，重复进样6次，记录葛根素峰面积。

1.2.1.6 稳定性考察精密吸取对照品和供试品溶液各10 μL，分别于0、2、4、8、12 h进样测定，记录葛根素峰面积。

1.2.1.7 重现性考察按“1.2.1.3”项下方法制备供试品溶液，平行6份，记录峰面积，测定含量。

1.2.1.8 加样回收率考察精密量取9份供试品溶液，每份4 mL（浓度为54.40 μg/mL），置10 mL棕色容量瓶中，分别加入葛根素对照品溶液适量，按供试品溶液制备方法处理，测定，记录峰面积，计算含量。

1.2.2 提取工艺研究

1.2.2.1 吸水率测定按处方量称取药材110 g，共3份，每份加入8倍量水浸没，室温放置，分别于100，110，120，130，140，150，160 min用4号筛滤去水分，称定药材重量。计算吸水率=（药材湿重-药材干重）÷药材干重×100%。

1.2.2.2 提取条件考察[11] 以收膏率和葛根素含量综合指标，通过正交实验设计，考察加水倍数（A）、煎煮时间（B）和煎煮次数（C）工艺条件，因素水平表见表1。综合评分=收膏率÷0.2191×0.3+葛根素含量÷0.5141×0.7。

表1 提取正交因素水平表

1.2.3 分离工艺考察以收膏率降低比率为评价指标，通过正交实验设计，考察提取液相对密度（A）、离心转速（B）和离心时间（C）工艺条件，因素水平表见表2。收膏率降低比率=（分离前收膏率-分离后收膏率）÷分离前收膏率×100%，分离前收膏率为照“1.2.2.2”条件制备后测定为21.4%。

表2 离心因素水平表

1.2.4 颗粒成型工艺考察[12]

1.2.4.1 制粒方法考察以细粉得率和制粉情况为综合评价指标，考察干浸膏粉湿法制粒、稠浸膏湿法制粒和喷雾干燥制粒。

1.2.4.2 药液浓缩程度考察将离心后的物料浓缩至相对密度分别为0.8、0.9、1.0、1.1、1.2，按药辅比（干浸膏：辅料）1：2加入浓缩液中，混合后按喷雾速度0.5 mL/min，进口温度120 ℃，出口温度90 ℃进行喷雾制粒，考察浓缩程度对喷雾细粉得率和喷雾情况的影响。

1.2.4.3 泵速（进料速度）的考察将离心后的物料浓缩至一定相对密度，照“1.2.4.2”，泵速分别为0.5、1.0、1.5、2 mL/min，考察喷雾速度对喷雾细粉得率和喷雾情况的影响。

1.2.4.4 喷雾温度的考察将离心后的物料浓缩至一定相对密度和泵速，照“1.2.4.2”，進口温度分别按100、110、120、130、140、150 ℃，考察喷雾温度对喷雾细粉得率和喷雾情况的影响。

1.2.4.5 辅料用量考察[13] 按上述优化的喷雾条件，对药辅比1：1、1：1.5、1：2进行考察，以确定最佳药辅比。辅料为糊精-糖粉=1：2的混合物，前期对该比例进行考察，糊精比例高易导致颗粒剂溶液澄明度低，糖粉不仅可以作填充剂亦可作矫味剂，按该比例制备颗粒剂不仅成型性、溶化性良好，而且甜度适中，矫味效果理想。

1.2.4.6 润湿剂的考察由于本处方中成分粘性较强，故仅考虑润湿剂种类的筛选。将喷雾干燥的细粉，分别用纯净水、25%乙醇、50%乙醇、75%乙醇、95%乙醇制软材后挤出制粒，考察润湿剂种类。

2 结果与讨论

2.1 葛根素含量测定方法考察

2.1.1 线性考察葛根素峰面积和含量的回归方程：Y= 4167X-6.4036，r=1.0000，表明进样量0.051-1.02 μg范围内，葛根素峰面积与进样量有良好的线性关系，结果见图1。

图1 葛根素对照品线性关系

2.1.2 精密度考察 RSD为0.16%，实验结果表明仪器的精密度较好。

2.1.3 稳定性考察对照品溶液RSD 0.38%，供试品溶液RSD 0.29%，说明对照品、供试品溶液12 h以内稳定。

2.1.4 重复性考察 6份供试品溶液的平均含量为59.49 μg/mL，其RSD值为0.78%。说明该方法重现性良好。

2.1.5 加样回收率考察该测定方法准确可靠，结果见表3。

表3 加样回收率实验结果

2.2 提取工艺考察

2.2.1 吸收率考察吸水率为117.8%，而且浸泡150 min后，药材吸水率无明显变化，故药材浸泡时间为150 min，结果见图2。

图2 浸泡时间对药材吸水率的影响

2.2.2 正交实验结果由表4可知影响提取效果因素顺序为C>A>B，即：煎煮次数>加水倍数>煎煮时间。提取工艺的最佳条件为：A3B2C3组合，即用12倍量水煎煮3次，每次1.0 h。

表4 正交实验结果

2.3 分离工艺考察由表5可知影响分离工艺因素的顺序为药液相对密度>离心转速>离心时间。精制工艺的最佳条件为：A1B3C3，即：药液浓缩至相对密度为0.8，用10 000 r/min的高速离心机离心30 min。

表5 离心正交实验结果

2.4 颗粒成型工艺考察

2.4.1 制粒方法考察干浸膏粉按1：2药辅比与辅料混匀后，加入适当无水乙醇，形成高粘度团块，无法挤出制粒;该水提物浓缩至相对密度为1.2时，变为果冻状稠厚半流体，加入辅料后，亦形成高粘度团块，无法制粒。喷雾干燥制得细粉后用无水乙醇润湿，软材粘度适宜，可挤出制粒，故确定制粒方法为喷雾制粒。

2.4.2 药液浓缩程度考察浓缩程度低，制粒可行性良好，但是周期较长得率较低;浓缩程度高，制粒过程中易粘壁，得率较低。故将离心分离液浓缩至相对密度1.0，喷雾干燥效果较佳，结果见表6。

表6 药液浓缩程度对制粒影响结果

2.4.3 泵速考察泵速慢，不易粘壁，但是周期很长;泵速快则容易粘壁导致得率较低。泵速按1 mL/min，喷雾制粒的效果较佳、效率高，结果见表7。

表7 泵速对制粒影响结果

2.4.4 喷雾温度考察喷雾温度高利于水分干燥，但是温度过高会导致颗粒溶化后的澄明度不良，故干燥温度较佳的为130 ℃，结果见表8。

表8 喷雾温度对制粒影响结果

2.4.5 药辅比例考察喷雾制粒药辅过低颗粒易吸潮导致流动性不好，同时兼顾节省成本，最终选用药辅比为1：1.5制粒，结果见表9。

表9 喷雾温度对制粒影响结果

2.4.6 润湿剂种类考察纯净水、25%乙醇、50%乙醇和75%乙醇制徳软材粘度过大，无法挤出制粒，而95%乙醇所制软材，软硬适度，挤出制粒后，颗粒得率达到87.5%，故确定95%乙醇为润湿剂。

3 结论

香诃止泻颗粒剂提取分离工艺优选为：12倍水，浸泡2.5 h，煎煮3次，每次1.0 h，合并煎液，药液浓缩至相对密度0.8，10 000 r/min高速离心30 min。成型工艺优选为：分离液浓缩至相对密度1.0，按药辅比1：1.5加入辅料混匀后，泵速1.0 mL/min，进风口温度130 ℃，出风口温度90 ℃，喷雾制得细粉后，用95%乙醇为润湿剂制软材后挤出制备颗粒剂。该工艺稳定可控合理，所得颗粒剂流动性溶化性良好，不易吸潮。

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