建立中药材中磷化物残留量的检测方法

王 静 李欣然 余晓燕 刘 卫 陈小燕 王 华

（扬子江药业集团江苏制药股份有限公司，江苏 泰州 225321）

磷化铝是现在使用较多的粮食熏蒸类杀虫剂，也为中药材灭虫使用，因磷化铝有剧毒性，如熏蒸后通风不彻底，残余的磷化铝将对人体造成伤害[1-5]。故我们通过建立中药材中磷化物残留量检测方法，控制灭虫后药材质量，待检测结果符合标准规定方可使用。

1 相关仪器及试剂

1.1 仪器：安捷伦7890气相色谱仪NPD，型号 XPE205电子天平，型号HH-S电热恒温水浴锅，20 mL顶空进样瓶，1 mL密封性注射器。

1.2 试剂。磷化铝：来源江苏双菱化工集团有限公司，含量85%；硫酸：GR，来源 国药集团有限公司；超纯水

2 检测条件

顶空条件。平衡温度：40 ℃；定量环温度：50 ℃；传输线温度：65 ℃；平衡时间：10 min。进样持续时间：0.5 min；GC循环：15 min；样品瓶体积：20 mL。

气相色谱条件。色谱柱：毛细管色谱柱（HP-5，30 m×0.32 mm×0.25 μm）；载气：高纯氮气；载气流量：2 mL/min；进样口温度：150 ℃；柱温：180 ℃；运行时间：10 min；进样方式：分流进样，分流比90∶1；检测器温度：250 ℃；氢气：3 mL/min；空气：60 mL/min；尾吹气：30 mL/min。

3 验证方法

3.1 供试品和对照品溶液配制方法及溶液的制备。样品配制：用电子天平称取中药材粉末（过3号筛）0.5 g，称取2份样品，分别置于20 mL顶空进样瓶中，精密加入10%硫酸溶液10 mL，扎盖密封顶空瓶，将顶空瓶置于40 ℃水浴中持续振摇10 min，放入顶空样品盘中按2.检测条件测定。

对照品配制：①储备气的制备：取磷化铝10 mg，于20 mL顶空进样瓶中，使用移液枪精密加入10%硫酸溶液10 mL，立即密封顶空瓶，将顶空瓶置于40 ℃水浴中持续振摇10 min，使其充分反应，得贮备气体。储备气体需当天制备。②对照品的制备：再取1 mL气密性注射器从贮备气体中抽取0.1 mL注入已精密加入10%硫酸溶液10 mL，并扎盖封口的20 mL顶空瓶中，（为保证储备气体的准确性，一份储备气体只能抽取5次）将顶空瓶置于40 ℃恒温水浴中持续振摇10 min，使其充分混匀，得对照气体，放入顶空样品盘中按设定条件测定。

溶液的制备：硫酸溶液：取100 mL硫酸（优级纯），缓缓加入900 mL水中，待冷却后加水至1000 mL。

3.2 专属性考察：取对照品溶液一份，供试品溶液一份，空白溶液一份，对照品供试品混合溶液一份。按测定方法进样。结果：空白溶液未出现与对照品保留一致的峰，对照品供试品混合溶液峰无开裂。

3.3 准确度实验。回收率样品溶液的制备：取枳壳粉末约0.5 g，精密称定，置于顶空瓶中，平行称取6份，精密加入10%硫酸溶液10 mL至于密封顶空瓶，使用1 mL注射器从对照品气体（2）中抽取0.1 mL分别注入上述6个20 mL顶空瓶中，将顶空瓶置于40 ℃水浴中持续振摇10 min，得回收率样品溶液。

取对照品溶液（2）和回收率样品溶液，分别进样，记录色谱图结果。计算回收率样品溶液的测得浓度，计算磷化铝的回收率。经试验，回收率为93%～97%，在药典规定70%～150%范围内。计算：回收率=[样品实测面积-样品理论面积]/对照品溶液理论面积×100%。对照品溶液理论面积为3针对照品溶液的平均值。见表1。

表1 回收率样品溶液的制备

3.4 重复性试验。配制空白溶液。使用1 mL注射器从3.1.对照品溶液（2）气体中吸取0.1 mL，分别注入6个精密加入10 mL 10%硫酸溶液且扎盖密封的20 mL顶空瓶中，置于40 ℃恒温水浴中持续振摇10 min，得重复性试验溶液。计算6针对照品RSD值，RSD为2.9%。见表2。

表2 重复性试验

3.5 线性关系验证：使用1 mL注射器从3.1.对照品溶液（2）气体中吸取0.05 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL，注入已精密加入10 mL 10%硫酸溶液且扎盖密封的20 mL 顶空进样瓶中，将样品瓶置于40 ℃恒温水浴中振摇10 min，使其充分混匀，得线性对照品溶液。

将5份对照品溶液分别按设定条件测定，测定峰面积，以对照品浓度X（mg/mL）为横坐标，峰面积积分值Y为纵坐标进行线性回归。见表3。

表3 线性关系验证

4 样品测定

称取2个不同批次的中药材供试品0.5 g，各2份。同法测定空白一份。测定样品中磷化物残留，测得磷化物残留量应不得过0.05 mg/kg。

4.1 未熏蒸样品检测结果，见表4。

表4 未熏蒸样品检测结果

4.2 第一次熏蒸样品检测结果，见表5。

表5 第一次熏蒸样品检测结果

4.3 第二次熏蒸样品检测结果，见表6。

表6 第二次熏蒸样品检测结果

通过对上述药材两次熏蒸后磷化物残留进行连续监测，第一次熏蒸为通风第2天开始检测，因样品通风效果不好，检测至第5天时结果仍不符合要求。故进行第二次熏蒸试验时，加强通风效果，并从熏蒸第3天开始连续监测，第3天时，检测结果已低于0.05 mg/kg，符合规定。通风效果对磷化物消散有较大影响，灭虫后应保证足够的通风，才能达到散气效果。

5 结 论

经过验证，中药材中磷化物残留量测定方法，专属性符合规定，无杂质干扰供试品，对照品峰无开裂，准确度试验回收率为93%～97%，重复性试验RSD为2.9%，线性范围R=0.997。且通过对12批样品的检测，本方法在上述范围内测定中药材中磷化物残留量的结果准确有效，可以用于中药材灭虫后的磷化物检测。