匹多莫德水溶液稳定性研究

于士龙 ，罗胜男 ，徐菁阳 ，崔思娇 ，汪 宇

（1.中国人民解放军第463医院，辽宁 沈阳 110042； 2.沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110000）

匹多莫德是人工合成的免疫调节剂，能显著下调由植物血凝素诱导的血单核细胞白细胞介素4（IL－4）等细胞因子的分泌，增加γ干扰素（IFN－γ）和IL－12等Th1型细胞因子的分泌，从而调节Th1／Th2细胞因子平衡。匹多莫德通过免疫功能调节机制发挥其抗细菌和病毒作用，预防和降低感染的复发[1－2]。其口服制剂市售剂量下可快速起效，服用方便，无注射疼痛，且水溶性良好，各口服剂型的生物利用度无明显差异，因而应用广泛。但由于匹多莫德的分子结构中含有2个酰胺结构，其在有水的条件下易受pH和温度等条件影响而水解。本研究中探讨了匹多莫德水溶液稳定性的影响因素[3]，考察不同条件下匹多莫德水溶液的稳定性，为其口服液体制剂或注射剂的处方工艺筛选提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪（美国SSI科学系统公司）；pHS－25型pH计（上海仪电科学仪器股份有限公司）；HNP－400GSD型综合药品稳定性试验箱（重庆宇硕实验仪器公司）；ATY224型电子分析天平（日本岛津公司）；CSF－18型超声波清洗仪（上海超声波仪器厂，功率为500 W）；DK－98－Ⅱ型恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）。

1.2 试药

匹多莫德原料药（批号为151102，江苏吴中医药集团公司）；匹多莫德对照品（中国食品药品检定研究院，含量为99.9%，批号为100588－201402）；甲醇和异丙醇为色谱纯，氢氧化钠和磷酸二氢钠为分析纯。

2 方法与结果

2.1 样品溶液制备[4]

称取匹多莫德原料药约80 g，加入2 000 mL水中，将样品水溶液置30℃水浴中，搅拌溶解，完全溶解后停止加热，冷却至室温。将样品均分成15份，以30%氢氧化钠分别调节 pH 为 1.8，2.5，3.0，3.5，4.0，4.5，5.0，5.5，6.0，6.5，7.0，7.5，8.0，8.5，9.0（分别编号为 1 ～15）。重复以上步骤，平行制备3份，作为3种不同存放条件下的试验样品。

2.2 含量测定[5－6]

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流动相：0.01mol／L 磷酸二氢钠 － 甲醇 － 异丙醇（95∶4∶1，磷酸调 pH 至 2.5）；检测波长：210 nm；柱温：30℃；流速：1.0 mL ／min。

2.2.2 溶液制备

供试品溶液：精密量取样品0.5 mL，置50 mL容量瓶中，以流动相定容至刻度，摇匀，即得。

对照品贮备液：取匹多莫德对照品适量，精密称定，加流动相溶解，即得质量浓度为0.9 g／L的溶液。

2.2.3 方法学考察

线性关系考察：精密吸取对照品贮备液适量，加流动相分别稀释成质量浓度为 0.450，0.225，0.113，0.056，0.028，0.014 g／L 的对照品溶液，分别精密吸取上述溶液各20 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积（Y）对质量浓度（X）进行线性回归，得回归方程Y＝2.530 9×104X＋15.175 2×104，r＝0.999 7（n＝6）。结果表明，匹多莫德质量浓度在0.45～0.014 g／L范围内与峰面积线性关系良好。

重复性与精密度试验：取匹多莫德对照品适量，精密称定，加流动相溶解，平行制备6份质量浓度为0.25g／L的溶液，测定含量。结果平均百分含量为99.65%，RSD为1.21%（n＝6），表明方法重复性良好。另取其中1份匹多莫德对照品溶液，精密吸取20 μL，连续进样6次，测定含量。结果平均百分含量为99.23%，RSD为0.99%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取匹多莫德对照品贮备液，分别室温放置 0，1，2，4，6 h，用 0.45 μm 微孔滤膜滤过，精密吸取20 μL，注入液相色谱仪，测定匹多莫德含量。结果的RSD为1.25%（n＝4），表明溶液在6 h内稳定。

加样回收试验：精密吸取已知含量的同一匹多莫德样品溶液6份，每份1 mL，加流动相稀释200倍，每份各精密吸取5 mL，分别精密加入对照品贮备液2.0 mL，按拟订色谱条件进样测定。结果见表1。

表1 匹多莫德加样回收试验结果（n＝6）

2.3 稳定性影响因素考察[7－8]

2.3.1 室温普通光照试验

将2.1项下制备的供试品溶液于室温和普通光照条件下保存3个月，按拟订色谱条件，分别于第0，15，30，60，90 d时测定样品中匹多莫德含量，同时检测各样品的pH。结果见表2。

表2 常温光照条件下不同pH样品含量和pH变化

2.3.2 60℃光照试验

将2.1项下制备的供试品溶液于60℃和普通光照条件下保存3个月，按拟订色谱条件，分别于第0，15，30，60，90天时测定样品中匹多莫德含量，同时检测各个样品的pH。结果见表3。

表3 60℃光照条件下不同pH样品含量和pH变化

2.3.3 室温强光（4 500 lx）[9－10]试验

将2.2.2项下制备的供试品溶液于室温和强光（4 500 lx）条件下保存3个月，按拟订色谱条件，分别于第 0，15，30，60，90 d 时测定样品中匹多莫德含量，同时检测各个样品的pH。结果见表4。

表4 室温强光（4 500 lx）条件下不同pH样品含量和pH变化

3 讨论

在室温普通光照储存条件下，4－15号样品（pH 3.5～9）的含量变化均小于10%，说明此条件匹多莫德水溶液相对稳定。其中，9－15号样品（pH 6～9）在第30天后的含量变化趋缓，均小于1.5%。由表3可知，14号和15号样品在储存期间pH变化较大，但其pH仅在30 d内变化程度较大，30 d后pH稳定在7～8范围内不变，说明当溶液pH大于8时，其最终稳定的pH为7～8。因此，在室温普通光照条件下，匹多莫德水溶液pH为3.5～8时相对稳定，pH为6～8时最稳定。

在60℃普通光照储存条件下，6－15号样品（pH 4.5～9）的含量变化均小于10%，说明此条件匹多莫德水溶液相对稳定；其中1－2号样品的含量变化均超过了50%，说明在低pH条件下升高温度更容易加速匹多莫德的分解；10－15号样品（pH 6.5～9）在第30天后的含量变化趋缓，且均小于1.5%。由表3可知，13－15号样品（pH 8～9）在储存期间pH变化较大，但其pH在30 d后变化趋缓，pH在7左右保持稳定。可知在60℃普通光照条件下，pH为4.5～8的匹多莫德水溶液相对稳定，pH为6～7.5最稳定。无论在60℃普通光照条件下，还是在室温普通光照条件下，匹多莫德水溶液的含量与pH变化趋势均一致；但60℃普通光照条件下，能使匹多莫德水溶液保持稳定的条件范围更窄。可知，高温不利于匹多莫德水溶液的稳定。

在室温强光（4 500 lx）条件下，4－15 号样品（pH 4.5～9）的含量变化均小于10%，说明此条件匹多莫德水溶液相对稳定；其中5－15号样品（pH 5～9）在第60天后的含量变化趋缓，均小于1%。由表4可知，13－15号样品（pH 8～9）在储存期间pH变化较大，但其pH在30 d后变化趋缓，基本稳定在6～7范围内。可知，在室温强光（4 500 lx）条件下，pH为 4.5～7.5的匹多莫德水溶液相对稳定，pH为5～7.5最稳定。室温强光（4 500 lx）条件下，匹多莫德水溶液的含量和pH变化趋势与其他2种条件相一致，而稳定性不如条件室温普通光照，但要强于60℃普通光照。可知，光线可以影响匹多莫德的稳定性，但并不是主要影响因素。

综上所述，匹多莫德水溶液保持稳定的最佳条件为调节pH为6～8，同时应在室温和避光条件下储存。匹多莫德水溶液主要用于注射剂和口服制剂，除了注射剂要保持特定的pH范围外，口服制剂还要受胃液pH的影响。胃液的 pH一般低于3，pH为1.8～3.0时匹多莫德水溶液最不稳定，故本研究结果可为今后进一步进行匹多莫德的制剂处方筛选和体内稳定性研究提供参考。