不同增溶剂对鱼金注射液稳定性的影响

何俊婷 ，张芳侠 ，曹爱兰 ，王景峰 ，惠选柱

（1.陕西医药控股医药研究院有限公司，陕西 西安 710075； 2.陕西中药研究所，陕西 西安 710075； 3.陕西医药控股山海丹药业有限公司，陕西 西安 710075； 4.陕西省中药提取分离与制剂工艺工程研究中心，陕西 西安 710075）

鱼金注射液是由鱼腥草、金银花经重蒸馏得到的芳香水制成的纯中药制剂，用于急性上呼吸道感染、急性支气管炎[1]。鱼腥草与金银花的芳香水为乳白色混悬液，需加入吐温－80增溶，使其成为澄明溶液。增溶剂的添加是中药注射剂提高有效成分溶解度、保证溶液稳定的常用方法，也是影响中药注射剂质量和安全性的关键技术[2]。吐温－80是一种聚合物，稳定性不佳，含有大量杂质或降解产品，是引发急性过敏症状的主要原因[3－4]。本研究中采用羟丙基－β－环糊精、磺丁基 －β－环糊精、甲基－β－环糊精作为吐温－80的替代品。其中，羟丙基－β－环糊精相对表面活性和溶血活性比较低，且对肌肉无刺激性，是一种理想的注射剂增溶剂[5]；磺丁基－β－环糊精是阴离子型高水溶性环糊精衍生物，有较好的增溶作用，能降低肾毒性、缓和药物溶血性等；甲基－β－环糊精能很好地对药物进行分子包合，从而提高药物的稳定性、水溶性、安全性[6－8]。采用3种不同的替代吐温－80的增溶剂制备鱼金注射剂，通过稳定性考察在温度和光线的影响下制剂随时间变化的规律，为产品生产、储存、包装等提供科学依据[9]，为辅料及稳定性研究、鱼金注射液再研究、再评价工作的重要切入点。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 7890A型气相色谱仪（美国安捷伦公司）；AG－135型电子分析天平（德国，MettlerToledo）；WD－A型药物稳定性检查仪（天津药典标准仪器厂）。

1.2 试药

羟丙基－β－环糊精（西安德立生物化工有限公司，批号为 171002）；磺丁基－β－环糊精（批号为170301），甲基 －β －环糊精（批号为 170301），均为淄博千汇生物科技有限公司产品；吐温－80（分析纯，上海申宇医药化工有限公司）；活性炭（上海活性炭厂有限公司，批号为160305）；甲基正壬酮对照品（批号为111640－201005），乙酸龙脑酯对照品（批号为110759－200303），芳樟醇对照品（批号为 1503－200001），均由中国食品药品检定研究院提供；鱼金注射液（批号分别为 20170103，20170104，20170105），鱼腥草、金银花芳香水，均为陕西医药控股集团山海丹药业有限责任公司产品；磷酸盐标准缓冲液（pH＝6.86，25℃，上海虹北试剂厂）；水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 制备方法

取鱼腥草4 kg，金银花2 kg，加水8倍量，水蒸气蒸馏，收集馏液6 000 mL，将蒸馏液进行重蒸馏，收集馏液近1 000 mL，鞣质项检查合格后，用稀释法分次加入增溶剂，混匀，再依次加入焦亚硫酸钠、氯化钠和枸橼酸钠溶液适量调节pH为5.9～6.5，搅匀，配制至1 000 mL，滤过，再用 0.45 μm微孔滤膜，精滤 3次，取滤液，灌装，流通蒸气灭菌30 min，即得。鱼腥草、金银花重蒸馏得到的芳香水为微带乳（黄）色的液体，经试验验证，当加入0.50%羟丙基 －β－环糊精或1.50%磺丁基－β－环糊精或0.45%甲基－β－环糊精增溶后，肉眼可见鱼腥草、金银花重蒸馏溶液变澄清。

2.2 检查

取供试品溶液，照2015年版《中国药典（四部）》不溶性微粒检查法（通则0903）测定，可见异物检查法（通则0904）测定，pH测定法（通则0631）测定。结果显示，3种不同增溶剂配制的鱼金注射液各项检测指标均符合规定。

2.3 含量测定

色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为键合交联聚乙二醇为固定液的毛细管柱（DM WAX气相色谱柱，30 m ×0.32 mm，0.25 μm ）；起始温度 70 ℃ ，维持5 min，再以5℃ ／min的速率升温至140℃，维持2 min，再以30℃ ／min的速率升温至 250℃，维持 5 min；进样口温度230℃；检测器温度280℃。理论板数按甲基正壬酮峰计应不低于2 000。在此条件下的色谱图见图 1。

图1 气相色谱图

溶液制备：分别取甲基正壬酮、乙酸龙脑酯及芳樟醇对照品适量，精密称定，分别加乙酸乙酯制成每1 mL分别含 100，25，10 μg 的溶液，即得对照品溶液。精密量取鱼金注射液25 mL，置具塞试管中，加入乙酸乙酯5 mL，再加氯化钠5 g，振摇3 min，分取乙酸乙酯层，再加入乙酸乙酯5 mL，振摇3 min，分取2次乙酸乙酯层提取液，定容至10 mL容量瓶中，摇匀，作为供试品溶液。

含量测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1 μL，注入气相色谱仪，测定，计算，结果见表1。

表1 不同增溶剂配制样品含量测定结果（ g／mL）

2.4 影响因素试验

高温试验：取鱼金注射液，60℃条件下放置10 d，于0，5，10 d时取样检测。与0 d比较，供试品性状、含量、pH、可见异物、不溶性微粒均未发生显著变化。

强光照射试验：供试品于照度为（4 500±500）lx条件下放置 10 d，在0，5，10 d时取样检测。供试品性状、含量、pH、可见异物、不溶性微粒均未发生显著变化。

低温冻融试验：低温试验中，分别将鱼金注射液置冰箱中，在4℃条件下观察2 d，然后取出样品置40℃加速条件下考察2 d，反复循环3次。冻融试验中，分别将3批鱼金注射液置低温冰箱中，在－20℃条件下观察2 d，然后取出样品置40℃加速条件下考察2 d，反复循环3次。取样检查外观色泽、可见异物、不溶性微粒、pH及甲基正壬酮、乙酸龙脑酯、芳樟醇含量，结果见表2。

加速稳定性试验：供试品溶液在（40±2）℃条件下放置 6 个月，在 0，1，2，3，6 个月时分别取样，检查供试品性状（无色、澄明）、含量、pH、可见异物（符合规定）、不溶性微粒。结果见表3。显示3种增溶剂样品均未发生显著变化。

表2 低温冻融稳定性试验结果

3 讨论

3.1 稳定性试验

对鱼金注射液外观形状、不溶性微粒、pH、可见异物及含量测定进行了全面分析。结果表明，影响因素试验对鱼金注射液稳定性无明显影响。低温冻融试验结果表明，试验前后，3组供试品pH、不溶性微粒、有效成分含量变化不大，前后均符合质量标准要求。因此，低温及冷冻对3种增溶剂配制的鱼金注射液稳定性基本无影响。

3.2 加速稳定性试验

羟丙基－β－环糊精、甲基－β－环糊精组供试品外观形状、不溶性微粒、pH、可见异物及含量均未发生明显变化；磺丁基－β－环糊精组供试品溶液在经过6个月加速稳定性试验后，不溶性微粒量增多，供试品外观有轻微的乳光产生。磺丁基－β－环糊精作为增溶剂，添加量为1.5%时才可使鱼金注射液澄清，辅料用量较大，但增溶效果相对较差，制剂稳定性不佳，因此其不适用于鱼金注射液的增溶。

表3 不同增溶剂下供试品溶液加速稳定性试验结果

3.3 后续研究方向

截至目前，已完成6个月长期加速稳定性研究，3种增溶剂制备的鱼金注射液各项指标均符合规定，未来将继续对羟丙基－β－环糊精、甲基－β－环糊精组供试品进行长期稳定性研究。