水分测定仪-卡氏干燥炉联用测定注射用重组人干扰素α2a中水含量

冯雪，李帅，郑欣，苍鹏，杨红育

（长春生物制品研究所有限责任公司，吉林长春 130012）

注射用重组人干扰素α2a是由高效表达人干扰素α2a基因的大肠杆菌，经发酵、分离和高度纯化后获得的冻干制剂，含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素[1]，主要用于治疗病毒性疾病及肿瘤。水分含量是注射用重组人干扰素α2a的一项重要指标，影响药品的外观、性状、含量、稳定性等。水分含量越低，药品越能长期稳定的储存。

本文参照《中国药典》2015年版通则0832水分测定法中容量滴定法，利用水分测定仪-卡氏干燥炉联用技术测定注射用重组人干扰素α2a中水分含量，其原理为样品在干燥炉内加热，使其水分在高温下蒸发释放，蒸发出来的水分由干燥载气（空气或氮气）推送入水分测定仪进行测定[2]。联用干燥炉可自动完成测定，提高工作效率；密封盖能够保证样品在测定过程中不受环境的影响，同时避免了样品在滴定杯中的相互干扰，使滴定杯始终保持良好的状态，测定结果重复性好，准确度高。

1 实验部分

1.1 主要仪器

V30水 分 测 定 仪（METTLER TOLEDO）、Stromboli加热炉样品转换器（METTLER TOLEDO）、XS205型电子天平（METTLER TOLEDO）。

1.2 试剂

无水甲醇（国药集团化学试剂有限公司）、1 mg/mL费休氏试液（Merck）、2 mg/mL费休氏试液（Merck）、5 mg/mL费休氏试液（Merck）、固体标准水（Merck）。

1.3 实验样品

注射用重组人干扰素α2a（长春生物制品研究所有限责任公司）。

1.4 测定步骤

1.4.1 操作条件

加热炉样品转换器加热温度：（150±2）℃；加热炉样品转换器加热时间：10 min；费休氏试液滴定度：1 mg/mL、2 mg/mL、5 mg/mL。

1.4.2 样品测定

启动仪器，加入适量无水甲醇，待仪器平衡后，用10 μL微量进样器量取经称量的10 μL纯化水（精确至0.01 mg）加入到滴定杯中，仪器显示质量后按“确定”键，仪器开始自动滴定，到达终点时，屏幕显示费休氏试液的滴定度。按此法标定三次，取三次标定的平均值，即为本次费休氏试液的滴定度。

将注射用重组人干扰素α2a捣碎，称取样品适量（精确至0.01 mg），记录样品质量，将样品密封后置于卡氏干燥炉上。在水分测定仪输入样品质量，用费休氏试液滴定至终点。

2 结果与讨论

2.1 加热炉样品转换器加热温度及终止时间的选择

加热炉样品转换器的温度直接影响样品中水分的蒸发；终止条件也是影响测定结果的关键因素，加热时间太短，样品中的水分未完全蒸发，导致测定结果偏低；加热时间太长，则延长了测定时间，环境因素的影响变大，因此需要选择合适的终止时间和加热温度[3]。试验分别选择自动终止、加热10 min和加热15 min作为终止条件，在不同的终止条件下分别选择了140、150、160 ℃作为加热温度，每种条件下连续进样6次。结果见表1、表2、表3。结果表明，当选择自动终止条件时，三个加热温度的样品结果的RSD相对较大；当选择10 min和15 min作为终止条件时，加热温度为150 ℃和160 ℃时，样品结果的差异较小。因此选择加热温度150 ℃，终止条件为10 min比较合适。

表1 自动终止条件下不同加热温度的样品水分测定结果

表2 加热10 min条件下不同加热温度的样品水分测定结果

表3 加热15 min条件下不同加热温度的样品水分测定结果

2.2 称样量的选择

在150 ℃加热10 min的测定条件下，样品称样量也会对测定结果有影响[4]。分别称取0.03g、0.04g、0.05g、0.06g、0.07g、0.08g、0.09 g、0.10g、0.11g、0.12g的 样品质量，考察样品称样量对测定结果的影响，结果见图1。从图中可以看出，仪器测得样品水分含量随着加入样品质量的增大逐渐趋于稳定，当单次加入的样品质量较小时，测得结果偏高[5]。称量样品质量在50～120 mg结果无明显差异。

图1不同样品质量的测定结果

2.3 费休氏试剂滴定度对测定结果的影响

在150 ℃加热10 min的测定条件下，不同滴定度的费休氏试剂对测定结果有影响。分别采用滴定度为1 mg/mL、2 mg/mL、5 mg/mL的费休氏试剂，考察不同滴定度的费休氏试剂对测定结果的影响，结果见表4。结果表明，不同滴定度的费休氏试液对测定结果无明显差异。

表4 不同滴定度的测定结果%

2.4 重复性试验

在150 ℃加热10 min的测定条件下，采用滴定度为1 mg/mL的费休氏试剂，用卡氏干燥炉自动进样法测定样品中水分含量，样品测定6次，计算6次结果的相对标准偏差（RSD%）数据见表5。结果表明测定结果具有良好的重复性。

表5 重复性试验结果

2.5 回收率试验

在样品中加入精密称取的标准水加标水平分别为 0.3 mg、0.4 mg、0.5 mg，在 150 ℃加热 10 min的测定条件下，采用滴定度为1 mg/mL的费休氏试剂，每个加标水平重复测定3次，经测定，加标回收率在91.8%～100.1%，结果见表6。

3 结论

本文考察了影响水分测定仪-卡氏干燥炉联用法测定注射用重组人干扰素α2a中水分含量的因素，建立了该制品水分的检测方法。研究结果表明，加热温度及加热时间对该制品水分的测定具有一定影响。实验也考察了样品称量质量及费休氏试剂滴定度对测定结果的影响。当样品称量质量较小时，天平称量误差及仪器漂移引起的误差将对实验结果产生显著影响，实验结果明显偏高；费休氏试剂滴定度对测定结果无显著影响。实验使用固体标准水对实验方法进行确证，实验结果相对稳定。因此，采用水分测定仪-卡氏干燥炉联用测定注射用重组人干扰素α2a中水分含量，选择干燥炉150 ℃加热10 min，样品称量质量50～120 mg作为检测条件时，其操作过程方便简洁，且方法准确可靠，符合实际样品的检测需求。

表6 准确度试验结果