肝细胞癌R0切除术后患者预后与细胞外基质重构相关蛋白和缝隙连接蛋白水平相关性研究

刘雪梅 骆 雯 刘 黎

遂宁市中心医院肿瘤科 (四川 遂宁， 629000)

肝细胞癌(HCC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，其预后较差，并且是中国东南沿海地区肿瘤相关死亡的首要原因[1，2]。HCC的发病率和死亡率有逐年升高的趋势，手术切除或肝移植仍然是唯一可能达到根治性治疗的措施[3]。恶性肿瘤切除术的根治程度与残留肿瘤的分级相关，其中R0切除是肝细胞癌治疗的最主要手段，但即使是根治性切除的患者仍有较高的术后复发率(5年复发率高达 70%)，严重影响患者的长期生存[4]。基质金属蛋白酶是细胞外基质降解与重构的关键酶，与多种恶性肿瘤的转移、恶化和增殖过程密切相关[5，6]。本研究对肝细胞癌R0切除术后患者预后与血清中细胞外基质重构酶和缝隙连接蛋白(Connexins)水平相关性进行研究，为临床诊断和治疗提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 回顾性分析2006年1月至2016年12月我院接受肝细胞瘤R0切除的120例患者的临床资料，其中男68例，女52例，年龄60～72岁，平均(66.6±7.9)岁。所有患者均实施肝部分切除术，且每位患者临床病理资料完整。患者纳入标准：①初发的原发性肝细胞癌，术前未做过任何治疗，且不同时伴发其他器官肿瘤；②术中检查无淋巴结及远处转移；③术前肝功能Child-Pugh分级A级或部分肝功能较好的 B 级患者；④均为限期手术且术中不联合其他器官切除术(除胆囊外)。所有病例均由术后病理切片证实为原发性肝细胞癌。

1.2 手术治疗方法 依据患者肿瘤的发生位置、肝脏的储备功能和患者经切除术后肝脏剩余容量决定采取的肝切除术。手术原则上采用解剖性肝脏切除，但对肝脏储备功能较差的患者和肝脏切除术后剩余肝容量不足的患者采用部分肝脏切除术。对有血管侵犯的患者，在术后30d内实施经皮肝动脉栓塞化疗术(顺铂40mg、吡柔比星40mg、碘化油5ml)。

1.3 分析指标 分析患者预后与血清基质金属蛋白酶MMP2、MMP9和基质金属蛋白酶抑制剂TIMP1、TIMP2及Connexin40、Connexin43蛋白、淋巴细胞计数、AFP和CEA水平的相关性。

1.4 随访 患者术后3个月内每月复查1次，此后每2个月复查1次，未能按时复查患者进行电话回访。随访日期截至2016年12月或患者死亡时。怀疑患者发生肝内复发或肝外转移时，采取上腹部CT、肺部CT及MR检查进行确诊。

1.5 统计学方法 统计学软件采用SPSS 18.0进行，计量资料数据以均值±标准差表示；计数资料数据用计数和百分比表示。分类变量采用χ2检验或Fisher确切概率法分析，Kaplan-Meier法计算患者术后生存率，并绘制总体生存曲线。生存曲线间的比较采用Log-Rank检验。

2 结果

2.1 120例患者预后与血清MMPs水平的相关性 患者预后与血清MMP2、MMP9水平密切相关，患者生存率随着MMP2和MMP9蛋白表达的增强，逐渐下降，见图1、2。

图1 120例患者预后与血清MMP2水平的相关性图

图2 120例患者预后与血清MMP9水平的相关性图

2.2 肝细胞癌R0切除术后患者预后与血清TIMPs水平的相关性 患者预后与TIMP1和TIMP2水平密切相关，随着血清TIMP1和TIMP2蛋白表达的增强，患者的生存率下降，见图3、4。

图3 120例患者预后与血清TIMP1水平的相关性图

图4 120例患者预后与血清TIMP2水平的相关性图

2.3 肝细胞癌R0切除术后患者预后与血清缝隙连接蛋白水平的相关性 患者预后与血清Connexin40和血清Connexin43水平密切相关，随着血清Connexin40和Connexin43蛋白表达的降低，患者的生存率下降，见图5、6。

图5 120例患者预后与血清Connexin40水平的相关性图

图6 120例患者预后与血清Connexin43水平的相关性图

2.4 120例患者预后与血常规指标的相关性 患者预后与淋巴细胞计数密切相关，随着淋巴细胞计数的降低，患者的生存率下降，见图7。

图7 120例患者预后与淋巴细胞计数的相关性图

2.5 肝细胞癌R0切除术后患者预后与血清AFP和CEA水平的相关性 患者预后与AFP和CEA表达水平密切相关，随着血清AFP和CEA水平的升高，患者的生存率下降，见图8、9。

图8 120例患者预后与血清AFP水平的相关性图

图9 120例患者预后与血清CEA水平的相关性图

3 讨论

肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，也是引起死亡的最主要的恶性肿瘤。随着现代诊疗技术的进步，肝癌患者的生存率有所提高，但患者术后高复发率仍是影响手术效果和患者预后的关键因素。本研究在对肝细胞癌R0切除术后患者预后与血清中细胞外基质重构酶和Connexins蛋白水平相关性进行研究时发现肝细胞癌R0切除术后患者预后与血清MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2、Connexin40、Connexin43水平、淋巴细胞计数、血清AFP和CEA水平密切相关，且随着MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2、AFP和CEA蛋白表达的增强及Connexin40、Connexin43、淋巴细胞计数的降低，患者的预后变差。结果表明，肝细胞癌R0切除术后患者预后与基质金属蛋白酶及其抑制剂表达呈负相关，而与Connexins水平呈正相关。

缝隙连接蛋白是肿瘤细胞物质、能量和信息交换的主要通道，也是肿瘤细胞增殖、转移和凋亡过程的关键调控蛋白[7，8]。在分析BRMS1和Connexin43蛋白异常表达与甲状腺癌发生发展关系的研究中发现缝隙连接蛋白表达异常与甲状腺癌的发病及患者的预后过程密切相关[9]，且Connexin43基因修饰对人胆囊癌GBC-SD细胞增殖和迁移能力产生明显的影响[10]。以往的研究发现牵牛子酒提取物对Lewis肺癌的抗肿瘤和抗转移作用与其调控肿瘤细胞缝隙连接蛋白的表达有关[11]，而蛋白酶活化受体1活化或抑制对鼻咽癌细胞迁移侵袭的影响也与其调控缝隙连接蛋白43的表达有关[12]。汪灵芝等[13]也发现依托咪酯对神经胶质瘤细胞缝隙连接通讯的影响主要是通过调节缝隙连接蛋白表达实现。本研究也发现肝细胞癌R0切除术后患者预后随着Connexin 40和Connexin 43蛋白表达的降低而变差。

基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达是肿瘤细胞增殖和转移过程的主要调控蛋白，也与患者的临床分期和预后密切相关[14，15]。以往的研究发现垂体肿瘤转化基因1、MMP2及MMP9与胃癌患者的临床分期及预后密切相关[16]，且脂联素与MMP9在非小细胞肺癌组织中的表达与肿瘤血管生成过程紧密联系[17]。同时，MMP2、MMP9及其抑制剂MMI-166参与了恶性肿瘤的发生和发展过程[18]，且MMP9的表达水平与儿童及成人中耳胆脂瘤的病变过程有关[19]。本研究也发现肝细胞癌R0切除术后患者预后随着MMP2、MMP9、TIMP1和TIMP2蛋白表达的增强而变差。

因此，肝细胞癌R0切除术后患者预后与基质金属蛋白酶及其抑制剂表达呈负相关，而与Connexins水平呈正相关。