高效液相色谱法测定盐酸丙酰左卡尼汀片中盐酸丙酰左卡尼汀的含量

肖红梅

(安徽医科大学第一附属医院药剂科、国家中医药管理局中药化学三级实验室，安徽 合肥 230001)

盐酸丙酰左卡尼汀(Propionyl-L-carnitine hydrochloride)化学名为(R)-3-羧基-2-丙酰氧基-N，N，N-三甲基-1-丙胺盐酸盐，为左卡尼汀乙酰转移酶刺激剂，可以扩张外周微动脉血管，改善微循环，临床上主要用于治疗间歇性跛行、外周微血管疾病、慢性充血性心力衰竭等[1-4]。目前仅有意大利Sigma-tau 公司上市了片剂和注射用冻干粉末，我国目前没有其任何制剂上市销售，尚处于临床研究阶段。

1 仪器与试药

1.1仪器SHIMADZU LC-20系列高效液相色谱仪(岛津SHIMADZU公司)；XP205型分析天平(0.01 mg，梅特勒-托利多仪器有限公司)；SK5200超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)；Mili-Q型超纯水制备仪(密理博中国有限公司)。

1.2试药盐酸丙酰佐卡尼汀对照品(瑞阳制药有限公司，批号：20141001)；乙酰左卡尼汀(瑞阳制药有限公司，批号：20141101)，左卡尼汀(中国药品生物制品检定研究院，批号：101041-201503)，巴豆甜菜碱(中国药品生物制品检定研究院，批号:420033-201501)，盐酸丙酰左卡尼汀片(瑞阳制药有限公司，批号：20150101、20150102、20150103，规格：500 mg)；乙腈(色谱纯、天津市光复精细化工研究所)；磷酸二氢钾、氢氧化钠均为分析纯；水(自制超纯水)。

2 方法与结果

2.1色谱条件Thermo Hypersil Aps-2 氨基柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以0.1 mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液(1.0 mol·L-1氢氧化钠溶液调 pH调至4.7)-乙腈(35∶65)为流动相，流速为1.0 mL·min-1，柱温30 ℃，检测波长205 nm。

2.2样品溶液制备

2.2.1对照品贮备液 精密称取盐酸丙酰佐卡尼汀对照品适量，加流动相溶解并稀释制成5.050 2 g·L-1作为盐酸丙酰左卡尼汀对照品贮备液。

2.2.2对照品溶液 精密量取对照品贮备液4 mL置于10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.3供试品溶液 取供试品10片，研细，精密称取细粉适量(约相当于盐酸丙酰左卡尼汀20 mg)，置10 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。

2.2.4空白辅料溶液制备 称取盐酸丙酰左卡尼汀片所用空白辅料(按处方配比)适量，加流动相振摇并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.2.5杂质贮备溶液 精密称取巴豆甜菜碱、乙酰左卡尼汀、左卡尼汀[5]适量，用流动相溶解并稀释制成含巴豆甜菜碱252 mg·L-1、乙酰左卡尼汀244 mg·L-1和左卡尼汀261 mg·L-1的混合溶液，摇匀即得。

2.2.6系统适用性试验溶液 精密称取盐酸丙酰左卡尼汀50.3 mg，置于10 mL量瓶中，先加少量流动相溶解，再加入1.0 mL杂质贮备溶液，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3方法学考察

2.3.1专属性 分别取空白辅料溶液与系统适用性溶液20 μL，在上述色谱条件下进样分析，结果显示制剂中各辅料组分与各杂质在205 nm的波长下不干扰主成分的测定，盐酸丙酰左卡尼汀峰与相邻杂质峰分离度为5.8，系统适用性符合要求。结果见表1，高效液相色谱图见图1。

表1 试验溶液的系统适用性结果

注：A为空白辅料溶液;B为对照品溶液；C为系统适应性溶液;1为盐酸丙酰左卡尼汀；2为乙酰左卡尼汀；3为左卡尼汀；4为巴豆甜菜碱图1 HPLC含量测定色谱图

2.3.2定量限的考察 取对照品溶液浓溶液，稀释20 000倍后，进样20 μL，计算盐酸丙酰左卡尼汀定量限(S/N≈10)为0.253 mg·L-1。

2.3.3线性关系的考察 分别精密吸取“2.2.1”项下对照品贮备液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL置于10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取20 μL注入液相色谱仪中，记录色谱图，以峰面积对进样浓度(g·L-1)进行线性回归，得盐酸丙酰左卡尼汀回归方程Y=808 112X+19 954，r=0.999 9。结果表明：盐酸丙酰左卡尼汀在0.505 0～5.050 2 g·L-1范围内，峰面积与进样浓度呈良好的线性关系。

2.3.4精密度试验 取“2.2.2”项下对照品溶液，精密吸取20 μL注入液相色谱仪中，重复进样6次，盐酸丙酰左卡尼汀峰面积RSD为0.34%，结果表明方法精密度良好。

2.3.5重复性试验 取盐酸丙酰左卡尼汀片(批号:20150101)10片，按“2.2.3”项下方法处理并测定，盐酸丙酰左卡尼丁的平均标示含量为100.6%(n=6)，RSD为0.83%，结果表明测定重复性好。

2.3.6稳定性试验 精密吸取“2.2.3”项下供试品溶液于0、2、4、6、8、12 h进样测定，盐酸丙酰左卡尼汀峰面积RSD为0.87%，结果表明在室温放置条件下12 h内对照品溶液基本稳定。

2.3.7加样回收率试验 按处方量称取空白辅料(按处方配比)适量，加入80%处方量的盐酸丙酰左卡尼汀对照品，混合均匀。同法称取空白辅料适量，按处方配比加入100%处方量，120%的盐酸丙酰左卡尼汀对照品。精密称取以上供试品适量(以空白辅料为固定量)，置于10 mL量瓶中，计算含量。回收率平均为100.1%，RSD为0.9%，具体数据见表2。结果表明测定方法准确、可靠。

表2 加样回收率试验(n=9)

2.4样品测定取盐酸丙酰左卡尼汀片3批，按照“2.2.3”项下方法处理并测定盐酸丙酰左卡尼汀片的含量，结果见表3。

表3 盐酸丙酰左卡尼汀片含量测定结果(n=3)

3 讨论

取盐酸丙酰左卡尼汀对照品(批号：20141001)适量，用流动相溶解稀释成适宜浓度(100 mg·L-1)，在190～400 nm的波长范围内进行紫外扫描，结果溶液在205 nm波长处有最大吸收值，因此选择205 nm为检测波长。

在选择色谱系统的过程中，参考了文献[6-8]所使用的色谱系统，发现在使用的过程中盐酸丙酰左卡尼汀峰峰形较差，拖尾因子较大，达到1.5以上，理论塔板数仅能达到2 000左右，满足不了本研究的要求，后参考欧洲药典9.0收载的左卡尼汀有关物质检测项下的色谱系统[9]，其结果盐酸丙酰左卡尼汀峰峰形较好，拖尾因子可以达到1.3以内，理论塔板数达5 000以上，与相邻的乙酰左卡尼汀杂质峰分离度达到5.0以上，各杂质峰的分离度也均符合要求，可以满足本研究的要求，最终选择本试验所用的条件为盐酸丙酰左卡尼汀片含量测定的方法。