从猪胆中提取胆红素的研究

2018-11-02陈士朋光斌熊周迎春

江西化工 2018年5期

陈士朋姜健光斌熊周迎春

(辽宁工业大学化学与环境工程学院，辽宁锦州 121001)

胆红素是制造人工牛黄的主要原料，也是分析化学及生化研究的重要试剂。同时胆红素在医学领域有着广泛和重要的用途，因此市场上对胆红素的需求量要求巨大。但胆红素价格昂贵，而且工业上提取胆红素的收率并不理想，因此探求一种较高收率的胆红素提取方法成为了人们关注的焦点。所以本文对从猪胆中提取胆红素的条件进行了研究。

1 实验部分

1.1 药品与仪器

原料和药品：新鲜猪胆汁、氢氧化钠、盐酸、亚硫酸氢钠、氯仿、冰乙酸、无水乙醇、乙醇、氧化钙盐钙、偏重亚硫酸钠。

仪器：数显恒温水浴锅、磁力加热搅拌器、电子天平、电子分析天平、电热鼓风干燥箱、酸度计等。

1.2 胆红素提取过程

1.2.1 钙盐法提取胆红素过程：

取猪胆汁100mL于烧杯中，加入新配石灰乳，加热至沸，将钙盐冲洗，滤干。加蒸馏水调成糊状，加入1%的偏重亚硫酸钠，搅拌并快速加入冰乙酸，静置，过滤。滤渣用氯仿溶解，水浴回流提取至氯仿液无色为止。回收氯仿，加无水乙醇，抽干，产品用少量乙醇洗至流出液不显绿色。于60℃真空干燥即得胆红素精品。

1.2.2 直接法提取胆红素过程：

取猪胆汁100mL于烧杯中，加入氯仿，加热。加入NaOH溶液，调pH值，冷却。加入适量亚硫酸氢钠、氯仿，调节pH值。静置，放出氯仿溶液，重复上述步骤，将两次萃取所得溶液合并转移至蒸馏瓶中。加入适量亚硫酸氢钠，蒸馏，回收氯仿。加入少量无水乙醇，继续蒸馏。至无氯仿气味时停止蒸馏。将悬浮液过滤，蒸馏瓶用适量乙醇洗涤，洗涤液合并过滤。用蒸馏水和乙醇各洗涤1～2次，在滤纸上干燥，得胆红素晶体，装入棕色玻璃瓶中避光低温保存。

所得产品用熔点法测定熔点，与胆红素熔点理论值192℃进行比较。

2 结果与讨论

2.1 提取方法对胆红素收率的影响

保持相同的提取条件，以100ml猪胆汁为原料，水解温度90℃，水解pH10，水解时间30min，分别采用钙盐法和直接法提取了胆红素，实验结果如图1所示。由图1可以看出，利用直接法提取胆红素所得的收率较高，较钙盐法相比方法更为简单，时间相对较短，所以直接法提取胆红素较好。

图1 提取方法对胆红素收率的影响

图2 水解时间对胆红素收率的影响

2.2 水解时间对胆红素收率的影响

直接法提取过程中，保持相同的提取条件，考察水解时间分别为10min，20min，30min，40min，50min时对胆红素收率的影响。实验结果如图2所示。由图2可以看出，当水解时间为30min左右时胆红素的收率最高。如果水解时间过短，猪胆汁中的胆红素水解不完全。如果水解时间过长，已经形成的胆红素会被氧化为胆绿素，会使胆红素的收率降低。所以，水解时间30min为宜。

2.3 水解温度对胆红素收率的影响

保持相同的提取条件，考察水解温度分别为80℃，85℃，90℃，95℃，100℃下对胆红素的收率的影响。实验结果如图3所示。由图3可看出，当水解温度为85℃左右时胆红素的收率最高。温度过高会引起胆红素的氧化，难以分离，也会带走部分含有胆红素的水解液。而温度过低，则会使提取时间延长，同样引起胆红素的氧化损失。所以，胆红素在水解温度为85℃时，收率最高。

2.4 水解pH对胆红素收率的影响

保持相同的提取条件，考察水解pH分别在8、9、10、11、12下对胆红素的收率的影响。实验结果如图4所示，当水解pH为11左右时胆红素的收率最高。若水解pH过低，胆汁水解不完全，一部分胆红素会以葡萄糖醛酸胆红素酯的形式存在，从而降低胆红素的收率。而水解pH过高，容易被氧化为胆绿素，过量的碱也会与胆汁形成胆汁酸盐胶体与胆红素互溶，从而降低了胆红素的收率。所以当水解pH为11左右时胆红素的收率最高。