深低温保存红细胞技术的研究及临床应用

何国松 曾波

【摘 要】

冰冻红细胞是针对稀有血型开展的项目，解冻去甘油红细胞是稀有血型患者急救输血最常用的成分血。

【关键词】 深低温；红细胞；临床应用

【中图分类号】R181.3+2 【文献标志码】

B 【文章编号】1005-0019（2018）14-206-01

冰冻红细胞是针对稀有血型开展的项目，解冻去甘油红细胞是稀有血型患者急救输血最常用的成分血。本次实验在保证血液质量的前提下，尽量缩短手工制备解冻去甘油红细胞的耗时，延长血液保存期限，及时、有效的为病人提供所需血液成分。

成立14年来，稀有血型库建立在册的稀有血型献血者A型81人，5人无联系；B型65人，7人无联系；O型89人，8人无联系；AB型19人，3人无联系，稀有血型献血者分布文山8县市，急需血液时不能及时采集。临时在紧急情况下一袋RH（D）阴性血用到患者身上之前要经历一个漫长的过程，所以开展冰冻红细胞项目势在必行，解冻去甘油红细胞制备过程研究应用是稀有血型患者的福音。

1 项目研究的目的及意义

1.1 RH（D）阴性患者的紧急输血 由于RH（D）阴性血型在我国所占的比例极少（0.3%），常规低温保存的血液期限短，所以在病人需要时都不能及时供应[1]，但在开展冰冻红细胞项目后，所有采集到的RH（D）阴性血液在规定时间内都进行冰冻保存，在病人需要时解冻去甘油后就能及时输入患者体内。

1.2 新生儿溶血病换血治疗由抗-D抗体引起的新生儿溶血病，是所有血型抗体引起溶血病中最严重的一种，它发病快、病程短、愈后差，如果不及时进行血液置换甚至会有生命危险[2]。项目的开展也为新生儿溶血病患者带来了更多的福音。

1.3 自然灾害和战略储备开展冰冻红细胞项目后血液的保持期限由35天延长至了十年，在遇到特大自然灾害或非常时期时可以及时供给血液挽救生命，是自然灾害和战备的坚强后盾。

2 采取的技术措施和方法步骤

2.1 所需细胞保护剂和细胞洗涤剂 ①复方甘油②9%浓氯化钠③0.9%注射用生理盐水

2.2 采取的技术措施项目开展后由于去甘油化时间过长，在紧急情况下不能给病人及时的供应血液，所以结合我站实际情况，着手从试剂滴速、离心力、离心时间等关键控制点进行了反复的试验，每袋试验的血液都经过质量检测，通过试验分析得出：试剂加入的快慢对血液质量没有显著变化；但是由于红细胞的可塑变形性，提高离心力、缩短离心时间反而得到了满意的结果，不但没有增加红细胞的破坏率还提高了红细胞的回收率。

2.3 方法步骤

2.3.1 红细胞甘油化：

①用无菌接管机将要冰冻的红细胞与转移袋联接。

②将转移完毕的红细胞及红细胞空袋一起离心（程序12）。

③ 将离心完毕的红细胞的上清液用分浆夹引流入红细胞空袋中，再用无菌接管机去掉红细胞空袋同时联接输血器及复方甘油溶液（1U：160ml，2u： 320ml）。

④将红细胞放在旋转仪上，用输血器将复方甘油溶液由慢到快（每袋15-20分钟）滴入红细胞转移袋，滴加完毕后，热合、断袋。静置平衡30分钟。

⑤用计算机进行血液转化录入，打印《血液交接单》交供血科包装入库放置入-80℃低溫冰箱保存。

2.3.2 解冻去甘油红细胞：

①从冰箱取出冰冻红细胞，放入37℃干式融化箱（或水浴箱）中振摇融化15分钟。

②将融化后的冰冻红细胞连接一空袋后离心（程序12）， 离心完毕后，将红细胞上清液用分浆夹引流回空袋中，热合去掉空袋。

③用无菌接管机将去甘油红细胞与输血器及浓氯化钠溶液联接。

④将红细胞放在旋转仪或采血称上，用输血器将浓氯化钠溶液以6ml/分（120滴/分）的速度加入红细胞中（1U：80ml，2u： 160ml），加入完毕后，平衡3分钟。

⑤再用无菌接管机去掉浓氯化钠溶液袋，同时联接一次性使用盐水联袋，以80ml/分的速度加氯化钠注射液300ml，平衡5分钟。

⑥ 将平衡后的红细胞取出离心（程序12）。离心完毕后，将红细胞上清液引流入空联袋中。

⑦以80ml/分的速度加入氯化钠注射液300ml，平衡5分钟。将平衡后的红细胞取出离心（程序12）。离心完毕后，将上清液引流入空联袋中，热合、断袋。

⑧无菌接合上一套三联袋生理盐水，按每次加入200ml生理盐水洗涤红细胞数次，一般在3至7次之间，直到上清液清亮为止。

⑨洗涤完毕后加入生理盐水至红细胞溶液为200ml±10%，并引流一截至少20cm血辫。

⑩用计算机进行血液转化录入，打印《血液交接单》交供血科包装、入库。

3 解冻去甘油红细胞的临床应用及疗效观察

项目开展三年多以来，做了RH（D）阴性血型冰冻红细胞196袋。随机抽取输用解冻去甘油红细胞48例患者分析，分别为颅脑损伤、新生儿溶血病、外伤、消化道出血四种疾病类型各12例，通过回访发现输血前血红蛋白分别为71g/l、100g/l、73g/l、50g/l，输血后24小时血红蛋白分别为92g/l、177g/l、89g/l、71g/l，输血量分别为3U、2U、5U、2U，输血均有效。

4 实施结果

我站在2013讨论决定开展冰冻红细胞项目，通过项目计划、外出学习、反复试验，得到质量保证后，在2014年2月使解冻去甘油的过程从7小时缩短到了3个小时，达到了我们预期的效果。改良法解冻去甘油红细胞缩短洗涤时间，及时提供RH（D）阴性血液、输注效果好，让病人和医生都能够很快的接受，能得到更快的推广。所以深低温保存红细胞技术的开展是一件利国利民的好事，不但节约稀有RH（D）阴性血液资源，又能及时、有效提供给RH（D）阴性病人使用，为危重病人提供生命的保障。

5 结束语

在开展冰冻红细胞项目之前，RH（D）阴性患者在需要输注血液时要提前预约，血液到达医院输入病人体内也需要10小时左右。对于病人来说，时间就是生命，在紧急抢救时如果血液能及时输入病人体内，那就是赢得了时间、赢得了生命的希望，对于后期治疗来说会愈后更好，特别是新生儿溶血的病人，及早得到换血治疗，留下的后遗症就会更少、更轻。

参考文献

[1] 张新龙，刘海英.少数民族地区RhD（-）血液冰冻保存洗涤复苏技术及临床应用[J].临床医药文献电子杂志，2017，4（5）：803-804.

[2] 湛玉武，李康生.惠州市稀有血型Rh阴性冰冻血库的建立及临床意义[J].青岛医药卫生，2018，50（3）：220-222.