金樱子降脂泡腾片研制及其降血脂功效研究

程金生 ，黄靖瑜 ，钟瑞敏 ，曾佛妹 ，黎嘉珠 ，陈义铝 ，林钡诗，莫艺萍，蔡浩强

（1.韶关学院 英东食品科学与工程学院，广东 韶关 512005；2.嘉应学院 医学院客家养生保健研究所，广东 梅州 512021）

金樱子（Rosa laevigata Michx）属蔷薇科蔷薇属植物，又名糖罐子、野石榴等.在历代医书如《雷公炮炙论》《本草纲目》等均有记载.其果实、花、叶和根均入药［1］.金樱子是原国家卫生部公布的88种药食同源资源之一，广泛分布于我国广东、广西等南方诸省［2-4］，相关深加工产品符合现代健康理念，开发价值高.

图1 金樱子花朵（A）及果实（B）

高血脂是一种严重危害人类生命健康和质量的热能代谢紊乱病，是众所周知的心脑血管疾病最为重要的独立危险因素，可直接引起一些严重危害人体健康的疾病，如冠心病、心脑血管疾病等慢性疾病.权威数据显示，在2002年以前我国高血脂的患病率为18.6%，大约1.6亿人［5］.而到了2016年，中国成人血脂异常总体患病率高达 40.40%，接近全国人口的一小半，较2012年大幅提升［6-7］.传统的他汀等西药治疗高血脂具有很大的副作用［8］，因此由传统的金樱子等药食同源资源中寻找健康破解密码，研制低副作用的天然降脂产品迫在眉睫，同时该类产品也具有广阔的产业前景.

应用超声波辅助浸提等技术，从金樱子中高效提取金樱子多糖活性成分，深入研究不同提取条件对金樱子多糖提取效率的影响.并以所提取的金樱子多糖为主要原料，配伍符合食品加工规范的泡腾崩解剂、填充剂等辅料，设计制备金樱子降脂泡腾片.并进一步通过构建高血脂动物模型，有针对性的开展金樱子多糖降脂动物实验，对金樱子多糖降血脂效果进行验证，为金樱子天然降血脂产品开发提供一定借鉴.

1 材料和方法

1.1 试验试剂

金樱子采自广东韶关市曲江区大塘镇附近山区.健康昆明种小白鼠50只，3月龄，体重18～22 g，雌雄各半，由广东省医学实验动物中心提供［SCXK（粤）2017-0092］；1.5%胆固醇、15%甘油三酯购于上海化学试剂有限公司；洛伐他汀颗粒由广东大森林连锁药店有限公司购买；Sevage试剂（氯仿：异戊醇 =3:1混合摇匀）、淀粉浆（10%）和透析袋MD25(8 000-14 000)等材料购于广东韶关市新创意实验设备有限公司；甘露醇、柠檬酸、碳酸氢钠、聚乙二醇6 000等常规试剂均购于阿拉丁上海有限公司；总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）测定试剂盒购于郑州万华生物技术有限公司.实验用水为蒸馏水.

1.2 仪器设备

800B型离心机（上海安亭科学仪器厂）；AL807系列温度控制器（深圳市亚特克电子有限公司）；WAY-2S型数字阿贝折射仪（上海精密科学仪器有限公司）；超声波辅助浸提设备（荣汇，RHTQ-G）；艾康便携式快速血脂分析仪；UV－1100紫外可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；TDP型单冲压片机（上海天琪制药机械厂）；崩解时限电测（江阴市康和机械制造有限责任公司）；PH-3C型测酸仪（北京中慧天诚有限公司）；恒温振荡培养箱HZQ-X100（江苏杰瑞尔电器有限公司）；HHY-78X-6A型片剂四用测定仪（北京恒奥德仪器仪表有限公司）；LC-QRJ01商用切片机（乐创科技公司）；台式电镜TM3030（日本日立公司）等.

1.3 金樱子多糖提取纯化

先将切片机的刀调到最大限度,将金樱子送入,将切制后的金樱子筛去绒毛,再倒入清水中淘洗沉去种核,捞出，40℃下恒温烘干48 h.将烘干的金樱子，在粉碎机上粉碎，制成金樱子干粉，用40目筛子过筛，得筛选后的金樱子干粉.加入乙醚浸泡6 h脱脂，去乙醚，自然挥干（或60℃下石油醚回流脱脂2h）.应用经预实验后确定质量分数的乙醇超声波辅助浸提技术提取1次，脱黄酮，再用超声波热水（蒸馏水）辅助浸提3次，合并水提取液应用悬浮式结晶法冷冻浓缩后，浓缩液以95%乙醇沉淀，沉淀加水溶解，采用较温和的Sevage法（氯仿：异戊醇 =3∶1混合摇匀）脱游离蛋白.加入Sevage试剂后，置恒温振荡器中振荡过夜，使蛋白质充分沉淀，离心（3 000 r/min）分离.再将除去蛋白后的多糖溶液置透析袋中，蒸馏水流水透析48 h，每6～8 h更换1次蒸馏水，除去小分子杂质.再用乙醇洗涤沉淀3次、真空冷冻干燥后即得金樱子纯多糖粉末原料.

1.4 金樱子降脂泡腾片制备

采用湿法制粒工艺：将润滑剂粉碎，过160目筛，与金樱子多糖粉末原料与酸源、填充剂、碱源、矫味剂、黏合剂、发泡剂、崩解剂等其它辅料混合均匀，经制粒（12目）、干燥（50±5℃）、整粒（14目）、压片等工艺即得金樱子降脂泡腾片，规格为50 mg/片.

1.5 小鼠喂养、给药及血脂检测

按文献方法［9-10］配置高脂饲料，并进行高血脂小鼠造模.造模后小鼠经实验室适应性喂养1周后，随即分为5组：空白对照组、西药（洛伐他汀）对照组、金樱子泡腾片低剂量组、金樱子泡腾片中剂量组、金樱子泡腾片高剂量组.每组10只，雌雄各半.分组后空白对照组喂以基础饲料，自由饮水.西药对照组除基础饲料外，每天下午2点灌胃1片包洛伐他汀片（20 mg/片，捣烂水冲服）；金樱子泡腾片低、中、高剂量组喂以基础饲料外，每天下午2点灌胃金樱子降脂泡腾片（50 mg/片，捣烂水冲服，低剂量组每天四分之一片，中剂量组每天半片，高剂量每天一片）.所有实验组均可自由饮水，连续两周.

血脂测定前禁食不禁水12 h，断头取血，37℃温水水浴1 h，3 500 r/min离心15 min，分离血清,用总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）试剂盒测定各组实验小鼠血清中脂质情况.

2 结果与讨论

2.1 金樱子提取正交实验研究

为进一步优化金樱子多糖提取工艺，本文采用四因素三水平正交试验法，确定时间、温度、料液比、乙醇浓度，以确定最佳提取工艺.深入研究发现，四种因素对多糖提取率的影响程度依次为乙醇浓度＞料液比＞时间＞温度.如表1实验数据所示，当提取温度在95℃，提取时间为1 h，料液比为1/15，乙醇浓度为90%时，金樱子多糖提取率最高，可达2.38%.

表1 金樱子多糖提取工艺研究

2.2 金樱子降脂泡腾片制备

感官评价、崩解时限、溶解性实验等实验结果显示，当以所提取的金樱子多糖为主要原料、以聚乙二醇6 000为润滑剂、以乳糖及甘露醇为填充剂、以柠檬酸为酸源、碳酸氢钠为碱源、薄荷醇为矫味剂、黏合剂为淀粉浆（10%）、十二烷基硫酸钠为发泡剂、微粉硅胶为崩解剂时，所制备金樱子泡腾片在外观、硬度、口感、溶解性，泡腾效果、崩解时限等方面具有较佳效果.经深入研究，金樱子降脂泡腾片优化配方如下：金樱子多糖19.05 g，柠檬酸6 g，乳糖8 g，甘露醇6 g，碳酸氢钠5 g，聚乙二醇6 000用量为2.5 g，微粉硅胶1 g，十二烷基硫酸钠0.15 g，薄荷醇0.3 g，羟丙基纤维素2 g（配成适当水溶液），共制 1 000片，每片50 mg（如图 2 所示）.

2.3 金樱子降脂泡腾片降脂功效研究

实验数据显示，造模后高血脂小鼠（空白对照组）TC、TG、LDL-C均维持较高水平（见表2），显示高脂小鼠造模成功.本工作选用最典型的降脂西药洛伐他汀作为阳性对照药物开展对比降脂研究.如表2中所示阳性对照组数据，西药阳性对照组与空白对照组相比，其血清中TC、TG、LDL-C含量均显著降低（P＜0.01，如空白对照组TC含量为5.51±0.28，而西药阳性对照组TC含量则为2.71±0.24，后者显著低于前者），说明洛伐他汀降血脂效果显著.

图2 所制备金樱子降脂泡腾片

表2 金樱子降脂泡腾片（RLET）对高血脂实验小鼠血清中血脂水平的影响（-(-脂)±s）

进一步的实验数据显示：金樱子降脂泡腾片实验组（低、中、高）与空白对照组（造模后高血脂小鼠组）相比，其血清中TC、TG、LDL-C含量均呈现较显著的下降趋势，给药的低、中、高剂量组之间的血清各项指标也有显著性差异（P＜0.05），并呈现一定的剂量效应关系.但值得注意的是，金樱子降脂泡腾片低、中、高剂量组相对西药阳性对照组，其降脂优势并不明显.仅有高剂量组在TC、TG和LDL-C三项指标表现上全面优于西药阳性对照组（如LDL-C血清含量在RLET高剂量组为0.51±0.11，西药阳性对照组相应数据为0.59±0.15，前者明显优于后者）.RLET低剂量组三项数据则全面输给西药阳性对照组，显示RLET给药量在金樱子降脂作用中也扮演重要角色.RLET中剂量组则在TC、TG两项指标上优于西药阳性对照组（如TG分别是0.52±0.23（RLET中剂量组）和0.55±0.12（阳性对照组）），但血清中LDL-C含量却明显高于西药阳性对照组.

上述数据显示，所制备金樱子降脂泡腾片已具有较全面的降脂功效，相对空白对照组，其TC、TG、LDLC三项指标均显著降低.且相对他汀类西药，金樱子降脂泡腾片作为药食同源深加工产品，其在天然健康、低副作用等方面更具优势.另一方面，金樱子降脂泡腾片在降脂功效上还有待进一步提升空间，有必要围绕金樱子降脂药物剂型设计、降脂功效优化及降脂机制等方面开展更深入的研究.

3 结论

针对我国成人血脂异常总体患病率高、传统西药治疗副作用大等现实问题，应用超声波辅助浸提等技术，从金樱子中高效提取金樱子多糖活性成分，深入研究不同提取条件对金樱子多糖提取效率的影响.以所提取的金樱子多糖为主要原料，配伍符合食品加工规范的酸源、填充剂、润滑剂、矫味剂、发泡剂、崩解剂等辅料，成功制备金樱子降脂泡腾片.并通过构建高血脂动物模型，有针对性的开展所制备金樱子泡腾片降脂验证实验.实验数据表明，所制备金樱子降脂泡腾片已具有较全面的降脂功效，相对空白对照组，其血清中TC、TG、LDL-C三项指标均显著降低.与临床上应用广泛的他汀类降脂药相比，金樱子原料天然健康，价廉易得，使其在价格、不良反应或副作用等方面更具优势.研究组将围绕金樱子降脂药物剂型设计、降脂功效提升及降脂机制等方面开展更深入的研究，相关研究有望为金樱子天然降血脂产品开发提供一定借鉴.