PCR法和显色平板法检测B族链球菌的临床对比研究

杜淑娴 王利英

B族链球菌(group B Streptococcus, GBS)是一种革兰阳性链球菌, 亦称无乳链球菌, 可定植于孕产妇肠道和阴道。根据不同地区的研究表明, 母体围生期 GBS 定植是新生儿早发型GBS感染的主要危险因素。据统计, 携带 GBS 的孕妇有40%～70% 在生产过程感染新生儿, 其中1%～3%出现早期侵入性感染, 可导致出生后发生肺炎、脑膜炎、败血症等早发型感染［1,2］。美国疾病控制和预防中心(CDC)颁布《围生期GBS筛查与预防指南》建议对所有孕晚期妇女进行GBS筛查对检测阳性者采取预防措施, 由GBS感染引起的新生儿感染情况得到了有效控制［3,4］。在我国, 由于孕产妇人群常规筛查GBS并未完全普及, 而不同地区不同方法学的比较资料研究较少, 本研究对PCR法和显色平板法检测GBS的差异进行了研究, 为临床选择合适的孕晚期GBS筛查方法提供依据。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年5月1日～12月1日来本院就诊的孕晚期妇女594例, 年龄18～42岁, 孕周35～40周。

1.2 试剂 GBS核酸检测试剂盒(荧光PCR法)购自泰普生物科学(中国)有限公司, GBS显色平板购自郑州安图生物工程股份有限公司, 质谱检测送第三方实验室检测。

1.3 标本采集 将无菌拭子插入孕妇阴道口1/3处旋转一周, 采取分泌物, 一例孕妇同时取两份样本, 分别进行PCR法检测和显色平板法检测。将取样后的拭子做好标记后送至检验科细菌室进行培养鉴定。

1.4 检验方法 按照全国临床检验操作规程中的临床微生物学检验常规方法进行。将同一患者的两份样本, 分别按照厂家说明书要求进行PCR法检测和显色平板法检测, 记录检测结果。

1.5 统计学方法 采用SPSS23.0统计学软件对数据进行处理。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

594 例孕晚期孕妇样本, PCR法和显色平板法检测结果一致的阳性共38例, 不一致的共15例, 经质谱检测确认, 其中9例确认为GBS, 另外6例分别为3例化脓性链球菌, 2例解没食子酸链球菌, 1例溶血性葡萄球菌。此次研究594例样本中确认GBS阳性47例, 阳性率7.9%。

PCR法检测阳性43例, 阳性率为7.2%, 经质谱确认, 其中5例与显色平板法不一致, 3例为化脓性链球菌, 2例解没食子酸链球菌；显色平板法检测阳性48例, 阳性率8.1%,其中10例与PCR法不一致, 经质谱确9例为GBS, 1例为溶血性葡萄球菌。两种方法的GBS检测阳性率比较差异无统计学意义(P＞0.05)。显色平板法灵敏度100.0%高于PCR法的80.9%, 差异具有统计学意义(P＜0.05)；显色平板法特异性99.8%与PCR法的99.1%比较差异无统计学意义(P＞0.05)。见表 1, 表 2。

表1 PCR法检测结果与确认结果对比(n)

表2 显色平板法检测结果与确认结果对比(n)

3 讨论

GBS是围生期新生儿及孕产妇最常见的感染致病菌, 由于妊娠期GBS感染会导致母亲和新生儿的感染, 严重威胁产妇和新生儿的生命, 因此采取积极有效的预防和治疗措施对降低围生期感染具有重要的意义［5-8］。灵敏度和特异性好的鉴定方法是对临床降低感染率是最有效的帮助。因此, 本次研究对比了PCR法和显色平板法检测GBS的差异, 比较两种方法的敏感度及阳性率。

目前的PCR法采取的技术原理是扩增GBS特异性的环磷酸腺甙(CAMP)因子的基因。PCR法检测法灵敏度80.9%显著低于显色平板法的100.0%(P＜0.05), 可能是因为临床存在某些缺乏CAMP因子的GBS［9-12］, 造成了PCR漏检, 也可能是因为PCR法检测样本的检测限低于培养法, 漏检了菌量较少的样本。PCR法特异性99.1%略低于显色平板法的99.8%(P＞0.05)。PCR法检出5例假阳性, 分别是化脓性链球菌和解没食子酸链球菌, 可能是因为临床除了GBS具有CAMP基因之外, 个别化脓性链球菌、解没食子酸链球菌、海豚链球菌等也具有CAMP因子的基因。显色平板法检测1例假阳性, 为溶血性葡萄球菌, 但其显色与GBS显色不同,其显色呈现正面较浅, 背面较深的特征, 补充触酶试验可以排除。

综上所述, 显色平板法检测GBS具有更高的准确度和检出率, 对临床大面积筛查GBS非常有帮助, 可有效的提高GBS的筛查。