克癀胶囊对小鼠急性湿疹模型的作用观察

谢英华 章明敏

湿疹是由多种内外致病因素引起的一种具有渗出倾向的皮肤炎症反应［1］。湿疹属于中医“湿疮”范畴, 是皮肤科常见难治性疾病［2］。中药治疗湿疹不但毒副作用小, 且可以从多途径抗炎、抑菌、消肿、止痒, 调节免疫失衡。克癀胶囊由三七、黄连、黄芩等多味中药组成, 具有清热解毒、化瘀散结的功效。故因新拟定适应证设计了对小鼠急性湿疹模型的影响试验, 目的为考察克癀胶囊新的适应证, 初步评价对急性湿疹是否具有治疗作用, 以研究克癀胶囊新的应用价值。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 药物及试剂 供试药：克癀胶囊(深圳市同安药业有限公司, 国药准字Z10960065)；阳性对照药1：皮敏消胶囊(沈阳澳华制药股份有限公司, 国药准字Z10950057)；阳性对照药2：复方甘草酸苷胶囊(潍坊中狮制药有限公司, 国药准字H20080677)；2, 4-二硝基氯苯(DNCB)(广州市丹安仪器仪表有限公司, 批号201604191)；丙酮(衡阳市凯信化工试剂股份有限公司, 批号2016011400)。

1.2 仪器 电子天平［德国赛多利斯公司(Sartorius), 型号BP211D］。电子天平［赛多利斯科学仪器(北京)有限公司,型号GL224-1SCN］。电子天平［上海舜宇恒平科学仪器有限公司, 型号MP12001］。普通冰箱［青岛海尔股份有限公司,型号BCD-290W］。

1.3 动物 检疫合格SPF级KM小鼠79只, 雄性45只, 雌性34只,体重19.9～28.2 g。实验动物质量合格证号No.44007200046862。生产单位：广东省医学实验动物中心, 实验动物生产许可证号：SCXK(粤)2013-0002。动物接收后进行检疫及适应性观察,1次/d, 连续观察4 d, 内容包括一般精神状态、皮毛、活动情况等。

1.4 动物模型制作 取10只小鼠为正常对照组。其余69只小鼠试验前1 d于小鼠背部选2 cm×2 cm大小区域用剃毛刀去毛。第1天, 以7% DNCB 100 µl外涂小鼠去毛背部致敏；第2天, 同法强化涂抹1次, 再次致敏；第7天, 在小鼠右耳双侧用移液枪外涂1% DNCB 20 µl激发。激发后肉眼观察小鼠右耳明显肿胀, 局部毛细血管扩张, 或有少许渗出物,提示急性湿疹模型成功建立。

1.5 分组及给药 造模动物因体重、造模制作成功程度淘汰9只小鼠, 其余造模成功的动物按体重分层随机法随机分为6组, 每组10只, 分别为模型对照组、皮敏消胶囊组(0.96 g/kg)、复方甘草酸苷胶囊组(0.045 g/kg)、克癀胶囊高剂量组(2.90 g/kg)、克癀胶囊中剂量组(1.45 g/kg)、克癀胶囊低剂量组(0.73 g/kg), 克癀胶囊高、中、低剂量分别相当于临床等效剂量的2、1、0.5倍。激发后24 h, 各组小鼠每日分别灌胃给予相应药物0.1 ml/10 g, 连续给药3 d, 1次/d, 正常对照组和模型对照组给予纯化水, 给药期间用正常饲料喂养。给药方案见表1。

表1 各组小鼠急性湿疹模型给药方案

1.6 观察指标 试验期间, 观察每组小鼠背部皮肤的湿疹情况(皮肤上明显的红肿、斑疹、糜烂和渗出), 每3天测量一次体重。末次给药后24 h, 用游标卡尺测量双耳厚度(取3个点测量后取均值), 计算厚度差；小鼠脱颈椎处死, 剪下双耳, 用6 mm打孔器打下左右耳相同部位, 称双耳片重, 计算两耳片重量之差。计算厚度差=右耳厚度-左耳厚度, 重量差=右耳重量-左耳重量。

1.7 统计学方法 采用SPSS22.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数 ± 标准差()表示, 多组比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA), 两两比较采用LSD检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

模型对照组小鼠造模侧耳部发红、肿胀, 正常对照组小鼠两耳色泽及厚度相近, 其余各给药组右耳红肿程度状况不一。模型对照组小鼠左右耳厚度差大于正常对照组, 差异有统计学意义(P＜0.05), 说明KM小鼠急性湿疹模型成立。克癀胶囊高剂量组、皮敏消胶囊组、复方甘草酸苷胶囊组小鼠左右耳厚度差低于模型对照组, 差异有统计学意义(P＜0.05)。模型对照组小鼠的左右耳重量差大于正常对照组, 差异有统计学意义(P＜0.05), 说明KM小鼠急性湿疹模型成立。克癀胶囊高剂量组、皮敏消胶囊组、复方甘草酸苷胶囊组小鼠的左右耳厚度差低于模型对照组, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表2。注：与正常对照组比较,aP＜0.05；与模型对照组比较,bP＜0.05

表2 各组小鼠左右耳厚度差和左右耳重量差比较( )

表2 各组小鼠左右耳厚度差和左右耳重量差比较( )

组别 只数 左右耳厚度差(mm) 左右耳重量差(mg)正常对照组 10 0.004±0.010 0.152±0.397模型对照组 10 0.059±0.011a 1.290±0.372a克癀胶囊高剂量组 10 0.045±0.019b 0.825±0.459b克癀胶囊中剂量组 10 0.051±0.014 0.908±0.515克癀胶囊低剂量组 10 0.056±0.014 1.016±0.727皮敏消胶囊组 10 0.017±0.011b 0.576±0.427b复方甘草酸苷胶囊组 10 0.022±0.011b 0.673±0.452b

3 讨论

湿疹属于中医的“湿疮”或“浸淫疮”等范畴, 目前多认为是由于内外因素相互作用引起的炎症反应, 类似于变应性接触性皮炎, 属于Ⅳ型超敏反应［3,4］。Ⅳ型超敏反应是由T细胞介导的免疫应答, 效应Th1细胞识别抗原后活化, 释放多种细胞因子和趋化因子。其中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和淋巴毒素α(LTα)使局部血管内皮细胞黏附分子的表达增加, 促进单个核细胞至抗原存在部位聚集, 引起组织损伤；γ-干扰素(IFN-γ)和TNF-α可使巨噬细胞活化, 进一步释放促炎症细胞因子白细胞介素(IL)-1和IL-6等加重炎症反应［5］。

克癀胶囊由三七、黄芩、人工牛黄、人工麝香等多种中药组成。现代药理研究发现三七总皂苷(PNS)可抑制INF-γ的分泌, 抑制TNF-α、IL-1β的表达, 并减少其信号传递［6］, 促进Th2型细胞因子IL-4的分泌, 对Th1/Th2型细胞因子网络失衡状态有一定的调节作用［7］, 能缓和缓激肽、组胺、5-羟色胺等导致的血管通透性增加等症状［8,9］。黄芩中黄芩苷能抑制TNF-α和IL-6的表达［10］, 能够抑制体内热源物质生成［11］, 提高细胞膜通透性, 增加膜的稳定性, 对肥大细胞的细胞膜有保护作用, 从而阻止其脱颗粒, 减轻过敏反应［12］。因此, 克癀胶囊可能是通过以上机制来调节免疫系统, 促进炎症的转归。

传统中医将急性和亚急性湿疹一般辨证为湿热蕴结型和脾虚湿蕴型［2］。克癀胶囊由多种中药配方组成, 适用于湿、热、瘀所致各种疾病, 其中三七等功能活血化瘀, 黄芩、黄连、黄柏等功能清热燥湿, 红曲等功能健脾祛湿。目前使用抗组胺药和皮质激素类药物治疗湿疹疗效不令人满意, 治疗湿疹优效的制剂较缺乏［13］。克癀胶囊高、中、低剂量组(2.90、1.45、0.73 g/kg)对小鼠急性湿疹模型引起的耳廓肿胀均有不同程度的改善作用, 其中以克癀胶囊高剂量组表现最好。本研究初步提示克癀胶囊对小鼠急性湿疹有一定的药效学基础, 实际对湿疹患者治疗效果有待进一步临床验证。