浅析黄芩苷对LPS诱导肠道损伤的保护作用研究

宋亚娟

【摘要】目的：研究分析黄芩苷对内毒素-脂多糖（LPS）引起的肠损伤的肠黏膜保护作用及黄芩苷对脓毒血症小鼠回、结肠黏膜抗氧化损伤的保护作用。方法：健康雄性BALB/c小鼠50只随机分为5组：正常对照组、模型组、黄芩苷高、中、低剂量组。分别灌胃双蒸水、黄芩苷100，50，25mg·kg-1，每日1次，连续3 d，于第3天灌胃后1h，腹腔注射生理盐水或LPS（17mg·kg-1），于腹腔注射LPS后20h处死小鼠，取回、结肠组织。观察各组小鼠生活、精神状态，记录各组小鼠死亡率，取材后测量结肠长度；光镜下根据Chiu肠黏膜损伤评分方法对肠组织进行分级，以HE染色方法观察肠组织病理学变化；采用紫外分光光度法检测肠组织匀浆液总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）；免疫组化染色方法分析各组肠组织PCNA的表达。结果：小鼠腹腔注射LPS后，出现死亡现象，黄芩苷给药组死亡百分率明显低于模型组。黄芩苷中剂量组小鼠结肠长度较模型组显著增加（P<005）。结论：黄芩苷有保护肠上皮细胞免受氧自由基损伤的能力，其通过改善肠黏膜结构与功能减轻LPS引起的肠道损伤。

【关键词】脓毒症；黄芩苷；肠保护

【中图分类号】R574

【文献标志码】B

【文章编号】1005-0019（2018）09-091-01

脓毒症是指各种致病微生物或其毒素存在于血液或组织中，机体对感染的一种全身炎症反应综合征（SIRS），可进一步演变为感染性休克，多器官功能障碍综合征（MODS），当前危重病患者死亡的主要原因之一[1]。故本研究通过建立LPS诱导的脓毒血症模型，从而探讨黄芩苷各剂量组对LPS引起的肠损伤的肠黏膜保护作用。

1材料

11动物健康雄性BALB/c小鼠，体重（22±3）g，SPF级，50只。

12药物与试剂LPS（L-2880：B5），购自Sigma公司；黄芩苷提取物，纯度﹥85%，购自南京泽郎医药科技；总抗氧化能力（T-AOC）测定试剂盒、总超氧化物歧化酶（T-SOD）测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）测定试剂盒、考马斯亮蓝测总蛋白含量试剂盒、松木素伊红染色液，均购自南京建成；PCNA鼠抗、山羊抗鼠二抗、DAB染色液，购自北京中杉金桥。

13仪器BM-V型组织包埋机、生物组织摊片烤片机（湖北医用电子仪器）；Leica RM2315型石蜡切片机（德国莱卡）；光学显微镜（日本尼康）；752型紫外分光光度计（南京麒麟分析仪器有限公司）。

2方法

21模型建立和分组将雄性BALB/c小鼠随机分为5组：正常对照组、LPS模型组、黄芩苷高、中、低剂量组。每组分别以双蒸水（10mL·kg-1）、黄芩苷高、中、低（100，50，25mg·kg-1）灌胃，每日1次，连续给药3d，灌胃1h后，对照组腹腔注射生理盐水（10mL·kg-1）、其他组腹腔注射LPS（17mg·kg-1）。

22取材各组小鼠于腹腔注射LPS后20h处死，取回肠、结肠各1～2cm，福尔马林固定，其余肠组织于-80 ℃冰箱保存备用。

23小鼠死亡百分率腹腔注射LPS后观察小鼠精神状态以及行动能力，记录其休克后死亡数量所占每组实验动物的百分率。

24结肠长度处死小鼠后，立即剖腹切取距小鼠直肠1cm处到距盲肠1 cm处的全部结肠，测量长度，并记录。

25肠组织匀浆液T-AOC，T-SOD，GSH-PX活性的测定取各组小鼠回肠、结肠组织，用冰生理盐水制备10%的肠组织匀浆液，按试剂盒要求配置各试剂。取组织匀浆上清液，严格按照试剂盒步骤测定，并用考马斯亮蓝试剂盒测定其总蛋白含量。

3结果

31小鼠死亡率给予LPS前，给药期间各组小鼠均未见异常行为，精神良好，活动力强。给予LPS 6 h后，各组小鼠出现个别小鼠精神状态萎靡，活动力弱，不喜动；12 h后，模型组小鼠1只小鼠死亡，其他小鼠蜷缩身体，活动力几乎消失；18 h后，模型组相继2只小鼠死亡，共死亡3只，其死亡率为30%；黄芩苷高、中、低剂量组各有1只死亡，其死亡率均为10%，黄芩苷给药组小鼠个别小鼠精神状态萎靡，均有活动力。

32结肠长度与对照组（993±070）cm比较，模型组（824±120）cm结肠长度明显缩短，并有显著性差异（P<001）。与模型组比较，黄芩苷中剂量组（953±063）cm结肠长度较长，并有显著性差异（P<005）。

4讨论

脓毒症是当前危重病患者死亡的主要原因之一，即感染引发全身炎症反应综合征（SIRS），通常认为是机体过度炎症反应或炎症失控所致，伴有急性-器官功能障碍的脓毒症是ICU病房病人死亡的第一大原因[2-3]。病原菌革兰阴性菌可引起脓毒血症，内毒素是革兰阴性（G-）杆菌细胞壁的主要成分，主要为脂多糖（LPS），LPS是革兰阴性杆菌在生长繁殖或死亡菌体裂解时释放的，由细胞壁脂多糖和少量蛋白质组成，是革兰阴性杆菌引起的脓毒症和脓毒性休克的主要致病因子。LPS可通过原发性细胞毒作用，增加肠黏膜绒毛动-静脉短路，改变肠黏膜血流供应，激活肠黏膜黄嘌呤氧化酶释放氧自由基等机制导致肠黏膜屏障损伤，引起肠黏膜通透性增加促使肠道细菌、内毒素移位。

总之，本研究发现黄芩苷对LPS诱导的肠损伤有保护作用，能有效降低LPS引起的脓毒症所导致的死亡；黄芩苷能明显保护氧自由基清除系统，尤其表现在结肠，这可能是黄芩苷对其肠道的保护作用原因。但是，其作用机制复杂，有待进一步研究探索。

参考文献

[1]程国强，冯年平，唐琦文，等.黄芩苷对眼科常见病原菌的体外抗菌作用[J].中国医院药学杂志，2001，21（6）：347

[2]李敬远，李德馨.2003年国际脓毒症定义讨论会公报记要[J].国外医学·麻醉学与复苏分册，2003，24（5）：25

[3]侯艳宁，朱秀媛，程桂芳.黄芩苷的抗炎機理[J].药学学报，2000， 35（3）：161