藏药如意珍宝丸对偏头痛模型大鼠脑电图的影响❋

罗亚敏，刘振权，任小巧，宋慧荣，仁青加，陶晓华,△

(1.北京中医药大学，北京 100029； 2.西藏藏医学院，拉萨 850000)

藏药如意珍宝丸由珍珠母、沉香等30余种药材组成，具有清热、醒脑开窍、舒筋活络及干黄水等功效，主要用于治疗瘟疫、陈旧热症、白脉病、四肢麻木、瘫痪、口眼歪斜、神志不清、痹症、痛风、肢体强直和关节不利等疾病[1]。藏医认为偏头痛属于白脉病范畴[2-3]，而如意珍宝丸对其具有良好的疗效。

偏头痛是一组反复发作的头部疾病，呈一侧或双侧疼痛，少数典型病例发作前有视觉、感觉和运动障碍等先兆。随着现代对其探索的不断深入，将偏头痛发病机制分为“血管说、神经-血管说、神经说”，其中最为完善且广泛流传的病理基础当属神经血管说[4]。虽涉及炎症因子、信号通路等探究方向，然目前以脑电波律电位、生物学特点的研究甚少[5]。据文献表明，偏头痛患者脑电波异常率显著高于非偏头痛患者[6]，故本实验从脑电图的变化来证明藏药如意珍宝丸治疗偏头痛的药理作用。

1 材料与方法

1.1 药物与仪器

藏药如意珍宝丸0.5 g×10丸/板×2板/盒，青海金诃藏药药业股份有限公司生产(国药准字Z63020064)；正天丸，华润三九医药股份有限公司生产(国药准字Z44020711)；硝酸甘油注射液，北京益民药业有限公司生产(国药准字11020289)；注射用生理盐水,四川科伦药业股份有限公司生产；戊巴比妥钠，德国生产(国药准字171060)；BL-420S生物机能实验系统，成都泰盟软件有限公司生产；针灸针，佳兴医疗器械有限公司生产。

1.2 动物

清洁级SD雄性大鼠，体质量250～300 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供(合格证号SCXK(京)2016-0006)。

1.3 大鼠脑电功率谱百分比数值的测定

清洁级SD雄性大鼠30只，体质量250～300 g，适应性喂养3 d，称重编号随机分6组，每组5只，包括空白组(未造模时检测)、模型组(空白组造模后检测)、藏药如意珍宝丸高(10 g·kg-1)、中(5 g·kg-1)、低(2.5 g·kg-1)组和正天丸组(3 mg·kg-1)各5只，连续灌胃给药7 d。在动物脑电图测试前1 d，将大鼠固定于立体定位仪上，以鼻根、枕后粗隆、两耳屏前凹为范围进行剃毛处理，并划分测量点位置。取鼻根、枕后粗隆与双侧耳屏前凹连线的交点，即头顶正中点(Cz)，以软尺将鼻根、额前点(Fp)、额区点(Fz)、中央区点(Cz)、顶区点(Pz)、枕区点(Dz)、枕后粗隆(Dp)分为1∶2∶2∶2∶2∶1比例，并将双侧耳屏前凹定义为O(左为O1，右为O2)。取两点，即Cz与Fp之中点Fz、与Dz之中点Pz，同时测量O1、O2分别与Fz、Pz的中点，命名为LA2、LA3(左侧)、RB2、RB3(右侧)，之后以不同颜色的荧光笔对每只老鼠进行标记，即LO1A2(蓝色)、LO1A3(紫色)、RO2B2(绿色)、RO2B3(粉色)，待第2天脑电图检测。

次日上午，大鼠称重后以1%戊巴比妥钠(4 mL·kg-1)腹腔麻醉后，用0.5 mm针灸针分别针刺RO2点、RB3点及耳朵，再与BL-420S生物机能实验系统相连，黑线连接耳朵上的针灸针，红线连接RO2点针灸针，白线连接RB3点针灸针，同时记录RO2B3之间的电位差,之后以顺时针方位检测LO1A3、LO1A2、RO2B2的脑电图数据。EEG根据其频率分为δ(0.5～4.0 Hz)、θ(4.0～8.0 Hz)、α1(8.0～11.0 Hz)、α2(11.0～13.0 Hz)、β(13.0～30.0 Hz)5个频段。数据采样率为200 Hz,采集造模前40 min及臀部皮下注射硝酸甘油注射液(10 g·kg-1)后4、10,30,60 min的脑电信号，每次记录时间5 min，计算脑电图功率百分比数值。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 藏药如意珍宝丸对硝酸甘油致偏头痛模型大鼠4 min功率谱百分比数值的影响

表1图1显示，给药前各组大鼠SI 4个脑区相同功率百分比均相似(P>0.05)。大鼠臀部注射硝酸甘油注射液后4 min脑电图波形发生明显改变。其中与空白组比较，模型组δ频段百分比在B3、A2、B2脑区有显著性降低,而θ、α2频段百分比在B3、A3、B2脑区，α1频段百分比在B3、B2、A2脑区，β频段百分比在A2、B3脑区均显著提高[7-9]，提示该脑电图由偏头痛引起，而该脑电图指标可作为镇痛药效学的评价参考，实验药及阳性药均能抑制上述变化达到治疗效果。与阳性药比较，藏药如意珍宝丸高剂量的θ频段百分比在B3、A2脑区显示有差异。

图1 硝酸甘油致偏头痛模型大鼠脑电波显示快波增多

2.2 藏药如意珍宝丸对硝酸甘油致偏头痛模型大鼠10 min功率谱百分比数值的影响

表2显示，与空白组比较，硝酸甘油致偏头痛后10 min，模型组δ频段百分比在B3、A3、A2脑区显著性降低，θ频段百分比在B2、A3脑区，α1频段百分比在SI四脑区，α2频段百分比在B3脑区，β频段百分比在B2、B3脑区均显著提高。阳性药与如意珍宝丸高、中、低剂量均能抑制上述改变。与阳性药比较，藏药如意珍宝丸高剂量的θ频段百分比在B2脑区、α1频段百分比在B3脑区有较高的差异性；低剂量的θ频段百分比在A3、B2显示明确区别。

2.3 藏药如意珍宝丸对硝酸甘油致偏头痛模型大鼠30 min功率谱百分比数值的影响

表3显示，硝酸甘油致偏头痛后30 min，与空白组比较，模型组的δ频段百分比在A3、B2脑区显著性下降；θ频段百分比在B2、A3、A2脑区，α1频段百分比在SI四脑区，α2频段百分比在B3、A2脑区，β频段百分比在B3、A2、B2脑区均显著提高；阳性药与如意珍宝丸高、中、低剂量均能抑制上述变化，且较阳性药比较，藏药如意珍宝丸高剂量的θ频段百分比在B3、A3、B2脑区、α1在B3、δ在B2脑区均具有特异性。

2.4 藏药如意珍宝丸对硝酸甘油致偏头痛模型大鼠60 min功率谱百分比数值的影响

硝酸甘油致偏头痛后60 min，与空白组比较，模型组的δ频段百分比在A3、B2、B3脑区产生明显的降低，θ、β频段百分比在B3、A3、B2脑区，α1、α2频段百分比在SI四脑区均表现出明确的量效关系，阳性药与如意珍宝丸高、中、低剂量均能抑制上述变化。与阳性药比较，藏药如意珍宝丸高剂量的θ频段百分比在SI脑区、δ在B2脑区均具有特异性(表4)，可见在60 min后其治疗效果达至高峰。

3 讨论

在偏头痛急性发作时，可出现大脑皮层的神经元去极化同步异常电活动。高度兴奋的神经元导致皮质活动的抑制，进而使脑组织缺氧的发生和氧耗量增加，体内微环境产生变化，痛觉结构受到触发，引起发作。有研究显示，由于偏头痛急性发作期血管活性物质如降钙素基因相关肽、P物质以及神经激肽A等释放增多，增强痛觉神经纤维的敏感性，引起脑水肿，从而导致脑电图异常[10]。同时发现，偏头痛患者脑电图异常率与有无先兆、首次发病年龄、头痛程度存在一定的相关性[11]，且其具有相对特异性脑电图表现[12-13]。因此，脑电图可以作为临床偏头痛患者有用、无创的辅助检查措施。

表1 藏药如意珍宝丸对偏头痛大鼠4 min脑电功率谱百分比数值的影响

注：与空白组比较：&&P<0.01，&P<0.05；与模型组比较：**P<0.01，*P<0.05；与阳性药比较：##P<0.01

表2 藏药如意珍宝丸对偏头痛大鼠10 min功率谱百分比数值的影响

注：与空白组比较:&&P<0.01，&P<0.05；与模型组比较:**P<0.01，*P<0.05;与阳性药比较：##P<0.01，P<0.05

表3 藏药如意珍宝丸对偏头痛大鼠30 min功率谱百分比数值的影响

注：与空白组比较:&&P<0.01，&P<0.05；与模型组比较：**P<0.01，*P<0.05；与阳性药比较：##P<0.01

表4 藏药如意珍宝丸对偏头痛大鼠60 min功率谱百分比数值的影响

注：与空白组比较:&&P<0.01，&P<0.05；与模型组比较：**P<0.01，*P<0.05;与阳性药比较：##P<0.01

本实验以臀部皮下注射硝酸甘油注射液造成急性偏头痛模型。过程分析显示，SI 4个部位中模型组在各个频段的功率百分比均发生变化，证明与相关文献所描述的3 min后产生行为学变化及出现偏头痛脑电图波形相一致[14-15]。通过实验结果发现，与空白组比较，模型组从时间变化方面，δ波在SI脑区出现下降，θ、α1、α2、β波在SI脑区均升高，其中以α1变化最为明显，可能偏头痛的发生与α1最为密切。与模型组比较，从时间变化方面，阳性药的频波段在SI四脑区均产生显著性变化，除θ频段百分比在4 min无明显改变外，其余均起到治疗作用；而藏药如意珍宝丸高、中、低剂量频段百分比于SI四脑区出现明显变化，但除了高剂量对θ频段百分比在B3、A2脑区4 min有治疗作用外，其余组皆与阳性药一致，对θ频段百分比4 min未显示明确疗效。与阳性药比较，藏药如意珍宝丸高剂量在各脑区对θ频段波的改变较明显，对δ频段百分比仅在B2脑区30、60 min起作用，对α1频段百分比仅在B3脑区的10、60 min有治疗效果；低剂量对θ频段百分比仅在A3脑区10 min有明显差异，其余均无明显变化。由此可知，藏药如意珍宝丸高、低剂量较阳性药比较，于θ频段波的改变具有明显差异，而对其余波段改变两药效果相同，可探知藏医如意珍宝丸与正天丸均有镇痛作用，但其较正天丸的止痛效果在θ波上比较明显。

本实验结果表明，藏药如意珍宝丸可明显减轻硝酸甘油所致偏头痛模型大鼠脑电图的异常变化，说明其对偏头痛的镇痛效果较为明显，可以作为临床干预偏头痛发作期的治疗手段之一。