建立A中药注射液中聚山梨酯80的测定方法

2018-10-21高丹丹胡茂玉

名城绘 2018年12期

高丹丹胡茂玉

摘要：目的：研究A注射液中的聚山梨酯-80，测定其在A注射液中的含量，并为其用量提供依据；研究项目：A注射液中聚山梨酯-80含量测定方法的建立，主要从紫外-可见分光光度法来考察；结果：A注射液中聚山梨酯-80含量测定紫外-可见分光光度法方法学考察项目均在可接受标准范围内，本试验为聚山梨酯-80在A注射液中应用的进一步研究奠定了基础。

关键词：A注射液；聚山梨酯-80；含量测定

聚山梨酯-80，其化学名称为聚氧乙烯-20-山梨醇酐单油酸酯[1]，商品名为吐温-80[2]，是一种亲水型非离子型表面活性剂[3]，为药物制剂中常见的辅料之一。由于其具有较好的助溶作用，在制备难溶性药物注射剂时，常用作助溶剂、乳化剂和稳定剂[4]。有文献报道，聚山梨酯-80的纯度与不良反应可能具有一定的关系[5]。因此在应用该辅料时应注意对注射用聚山梨酯-80加强质量控制。

1紫外-可见分光光度法[6]

硫氰酸钴铵溶液与聚山梨酯-80反应，生成物在三氯甲烷液中能够显蓝色[7]，采用紫外-可见分光光度法测定A注射液中聚山梨酯-80的含量。

1.1仪器设备。UV-2450紫外-可见分光光度计、XS105电子天平、DK-S24恒温水浴锅、分液漏斗、移液管、试管、容量瓶

1.2试剂。硫氰酸钴铵试液（硫氰酸铵17.4g与硝酸钴2.8g加水至100ml）、三氯甲烷、A注射液，聚山梨酯-80对照品，纯化水

1.3试验过程

1.3.1溶液稳定性

1.3.1.1反应温度。精密量取A注射液成品1.0ml，加纯化水补足至6.0ml，精密加入硫氰酸钴铵试液9.0ml，摇匀，精密加入三氯甲烷10.0ml分别在0℃、25℃、50℃水浴条件下，每30min振摇一次，观察反应状况，确定反应温度。

1.3.1.2反应时间。精密量取A注射液成品1.0ml，加纯化水补足至6.0ml，精密加入硫氰酸钴铵试液9.0ml，精密加入三氯甲烷10.0ml，摇匀，在冰水浴中每30min振摇一次，测定前等待30min分层时间，在一段时间内连续测定吸光度，确定其稳定时间。

结论：反应时间至少为8h，为便于实际操作，放置过夜后测定。8～13h的吸光度值RSD为0.76%，小于2.0%，说明在8h后反应达到稳定，冰水浴中放置过夜的条件可用于测定。

1.3.1.3溶液稳定性。精密量取A注射液成品1.0ml，加纯化水补足至6.0ml，精密加入硫氰酸钴铵试液9.0ml，摇匀，精密加入三氯甲烷10.0ml，摇匀，在冰水浴中每30min振摇一次，共振摇三次后放置至稳定后，吸取三氯甲烷层，以加入三氯甲烷为空白，在620nm的波长下，在120min内每15min测定一次吸光度，计算RSD%。

结论：RSD为0.23%，小于2.0%，说明测定溶液在120min内稳定。

1.3.2专属性。精密量取纯化水1.0ml，依法操作，吸取三氯甲烷层，以加入三氯甲烷为空白，在620nm的波长下测定吸光度；再精密量取A注射液中间体（未加聚山梨酯-80）1ml，同法操作，以加入三氯甲烷为空白，在620nm的波长下测定吸光度。

结论：吸光度值均小于0.005，说明方法专属性符合规定，且测定时可以以三氯甲烷为空白。

1.3.3仪器精密度。精密量取A注射液成品1.0ml，依法操作，吸取三氯甲烷层，以加入三氯甲烷为空白，在620nm的波长下连续测定6次吸光度，计算其RSD%。

结论：RSD为0.29%，小于2.0%，说明本法仪器精密度符合规定。

1.3.4重复性。分别精密量取6份A注射液成品1.0ml，依法操作，吸取三氯甲烷层，以加入三氯甲烷为空白，在620nm的波长下分别测定吸光度，计算其RSD%。

结论：RSD为1.0%，小于2.0%，说明本法重复性符合规定。

1.3.5线性与范围。精密称取聚山梨酯-80对照品适量制成约0.976mg/ml的溶液，精密量取1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0，4.5ml分别置分液漏斗中，依法操作，吸取三氯甲烷层，以加入三氯甲烷为空白，在620nm的波长下测定吸光度。以吸光度值为纵坐标、聚山梨酯-80浓度为横坐标，进行线性回归。

结论：在1.464mg/ml～4.392mg/ml范围内，r=1.000，大于0.990，说明在1.464mg/ml～4.3921.464mg/ml范围内线性关系符合规定。

1.3.6加样回收率

精密称取聚山梨酯-80对照品适量制成6.050mg/ml的溶液，另精密量取A注射液中间体（未加聚山梨酯-80）5.0ml9份，分别精密加入上述贮备液3.0，5.0，10.0ml，制成三种不同浓度的供试品溶液；另取聚山梨酯-80对照品适量，加水配制成每1ml含2.021mg、1.987mg与每1ml含3.901mg、3.906mg的溶液作为对照品溶液，分别精密移取供试品溶液与对照品溶液1.0ml，依法操作，后放置过夜，以加入三氯甲烷为空白，在620nm的波长下测定吸光度，计算加样回收率及RSD%。

结论：平均回收率为100.1%，在100.0%±5.0%范围内，RSD为0.87%，小于5.0%，加样回收率符合规定。

1.3.7中间精密度

精密称取聚山梨酯-80对照品适量制成不同浓度的对照品溶液，分别精密量取对照品溶液与A注射液成品溶液1.0ml，依法操作，以加入三氯甲烷为空白，在620nm的波长下测定吸光度，计算含量。分别由两个分析人员按上述方法对同一批A注射液成品的聚山梨酯-80含量各测定6组数据，计算RSD%。

结论：RSD为2.4%，小于5.0%，说明中间精密度符合规定。

1.4小结

各方法学考察项目均在接受标准范围内，通过方法学考察，故此方法可用于A注射液中聚山梨酯-80的含量测定。

2讨论

2.1本法的主要机理是络合显色反应，关键要使反应完全，所以首先进行反应时间的考察，确定反应稳定的时间。由于反应需7小时以上才能稳定，时间比较长，所以采用放置过夜后进行测定。

2.2试验的过程中发现温度对反应影响较大，在测定时要注意勿把上层有色溶液带入比色皿中，否则测定结果偏高。最后确定反应的条件为0℃放置过夜。

参考文献：

[1]孙会敏，杨锐，栾琳，等.聚山梨酯80质量分析与致敏原探究[J].药物分析杂志ChinJPharmAnal2011，31（10）：1850-1855.

[2]陈海峰.供注射用吐温80的质量控制分析[J].审评四部八室，2006.