仔猪腹泻病原菌的分离与鉴定

逯海峰

摘 要 2017年7月，45日龄仔猪出现了食欲减退、消瘦、严重腹泻，个别发病仔猪出现死亡。为了确定引起仔猪腹泻死亡的病原，通过胶体金试纸条检测猪瘟、伪狂犬、圆环、蓝耳抗原为阴性。无菌采集病死仔猪的肝脏、心血、肺脏等病料组织中分离得到了2株病原菌，分别命名为XJ-1株和XJ-2株，通过培养特性、形态学观察、生化特性检测、等等方法对分离到的2株病原菌进行鉴定，结果显示，1株为沙门氏菌，另1株为大肠杆菌。对2株病原菌用口服方式攻毒小白鼠验证其致病性，结果显示，对2株病原菌均有很强的致病性。用K-B药敏纸片法对2株病原菌进行药敏试验分析其耐药性，结果表明，2株病原菌均对恩诺沙星、阿米卡星、头孢克肟、头孢曲松、氟苯尼考4种药物敏感，对其他的药物存在不同程度的耐药性。

关键词 仔猪；腹泻；致病性大肠杆菌；沙门氏菌；药敏试验

随着我国畜牧业的发展，猪的养殖数量越来越多，逐渐形成了规模化、集约化养殖模式，猪的健康养殖越来越来越受到养殖户的重视。在养猪的过程中，仔猪的腹泻病越来越严重，猪瘟、伪狂犬、圆环、蓝耳病、致病性大肠杆菌病、沙门氏菌、绿脓杆杆菌多种病毒性和细菌性疾病均能能引起仔猪的严重腹泻，其中，致病性大肠杆菌和鸡沙门氏菌引起仔猪腹泻为临床多发，成为临床上仔猪常见病，感染率和死亡率均较高，严重影响养猪业的发展 [1-2]。

仔猪大肠杆菌病是由某些特定血清型的致病性大肠杆菌所引起的仔猪以腹泻为主传染性疾病，主要包括仔猪黄痢、仔猪白痢和仔猪水肿病3种疾病，其中，仔猪大肠杆菌病在临床上以仔猪白痢和仔猪黄痢较为常见，危害仔猪最为严重[3]。仔猪沙门菌病是由沙门菌属的猪霍乱沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌等不同血清型的沙门氏菌株引起的一种仔猪的高热传染病，1～4月龄的仔猪多发，急性为败血症，慢性为坏死性肠炎[4-6]。近年来，致病性大肠杆菌和沙门氏菌混合感染引起仔猪腹泻问题日益严重，尤其当混合感染时，发病率和死亡率都较高，不易控制，在治疗时，应进行药敏试验分析耐药性，合理用药。

1 仔猪腹泻临床症状

仔猪突然发生腹泻，排出浆（糊）状粪便，呈乳白、灰白、黄白色，偶有绿色，有时粪中带有气泡，气味腥臭，肛门失禁，初期腹泻次数少，精神沉郁，腰背拱起，行动迟缓，被毛粗乱无光，体表不洁，肛门周围、尾根染粪，食欲减退，喜饮冷水，发育迟滞。病程长者达一周以上，短者2～3天，虽能自行康复，但多因严重脱水、营养障碍而成僵猪。

2 仔猪腹泻剖檢变化

对腹泻死亡仔猪进行剖检，观察病理学变化，剖检可见死仔猪胃黏膜潮红肿胀，以幽门部最明显，上附黏液，胃内充有凝乳块，少数严重病例胃黏膜有出血点。肝和胆囊稍肿大。心冠状沟脂肪胶样浸润，心肌柔软。肠黏膜潮红，肠内容物呈黄白色，稀粥状，有酸臭味，有的肠管空虚或充满气体，肠壁菲薄而透明。严重病例黏膜有出血点及部分黏膜表面脱落。肠系膜淋巴结肿大。肾脏呈苍白色

3 病毒性疾病的检测

采集病死仔猪的心血分离血清，按照猪瘟、伪狂犬、圆环、蓝耳抗原胶体金试纸条说明进行检测。结果显示，猪瘟、伪狂犬、圆环、蓝耳抗原胶体金检测为阴性。

4 细菌分离培养

无菌采集病死仔猪的肝脏、心血、肺脏等病料组织，分别接种于麦康凯培养基上和SS琼脂培养基上，37℃恒温培养12h后，结果显示， 1株在SS琼脂培养基长出了周围无色半透明，部分中间带黑色菌落，革兰氏染色结果显示，分离菌株为中等大小、两端略圆的直杆状革兰氏阴性菌。另1株在麦康凯培养基上长出了湿润的、边缘光滑整齐、粉红色菌落。兰氏染色镜检结果，呈两端钝圆革兰氏阴性杆状菌。与报道沙门氏菌和大肠杆菌的培养特性和形态特征一致

5 分离菌株的生化鉴定

1株发酵麦芽糖、甘露醇、葡萄糖、枸橼酸盐； 不发尿素、酵乳糖、蔗糖；吲哚试验呈阴性，产生H2S，被鉴定为沙门氏菌，另1株能分解鼠李糖、麦芽糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇；木糖和阿拉伯糖并产酸产气，V-P试验呈阴性，吲哚和甲基红反应成阳性，被鉴定为大肠杆菌。

6 致病性试验

2株能致死小白鼠，对死亡的小鼠剖检后进行分离鉴定，结果显示，2组所分离菌株与大肠杆菌和沙门氏菌一致。对照组小白鼠健康存活，因而，证实了2株病原菌具有很强的致病性。

7 药敏试验结果

对分离的2株病原菌进行药敏试验，按照美国临床检验标准委员会（NCCLS）推荐的标准K-B纸片法进行试验操作和结果判断。结果显示，大肠杆菌和沙门氏菌均对恩诺沙星、阿米卡星、头孢克肟、头孢曲松、氟苯尼考4种药物敏感；沙门氏菌株对大观霉素、林可霉素、庆大霉素3种药物中敏，大肠杆菌对林可霉素、氧氟沙星2种药物中敏。

8 小结

从无菌采集病死仔猪体内分离到了2株病原菌，被鉴定为沙门氏菌和大肠杆菌。2株病原菌均有很强的致病性。药敏结果表明，2株病原菌均对恩诺沙星、阿米卡星、头孢克肟、头孢曲松、氟苯尼考4种药物敏感，对其他的药物存在不同程度的耐药性。

参考文献：

[1]陈茹. 陕西某猪场仔猪腹泻病原菌的分离鉴定[D].西北农林科技大学，2015.

[2]王斌，任伟，王青虎. 仔猪腹泻的病原鉴定与综合防治措施[J]. 畜禽业，2015，（01）：4-5.

[3]李心海，王兵，张林吉，迟兰.猪大肠杆菌病病原的鉴定及药敏试验研究[J]. 黑龙江畜牧兽医，2014，（08）：75-76.