APP下载

不同采收期红旱莲中金丝桃苷的含量测定

2018-10-20刘吉爽张雅蓉徐文慧

长春中医药大学学报 2018年5期
关键词:桃苷金丝重量

李 纳,刘吉爽,张雅蓉,徐 犇,徐文慧,陈 新

(长春中医药大学,长春 130117)

红旱莲(Hypericum aseyron L.)为藤黄科金丝桃属植物,药用其全草。分布于我国东北地区及黄河、长江、珠江流域,生于荒坡、山野、路边[1]。红旱莲中以金丝桃苷为代表的黄酮类化合物,其提取物具有抗炎、镇痛、抗氧化、组胺释放抑制等作用[2-12]。该药材未收载于《中华人民共和国药典》(2015版)[13]中,药材标准目前仅收载于《吉林省药品标准》(1977年版)、《上海市中药材标准》(1994年版)中,年代久远,已不能满足市场对药材质量控制的需求。由于药材质量控制上的缺失,近年来,吉林省内未见有医院进行使用,且未见有药材商品流通。现测定不同采收期红旱莲药材中目标成份含量,为确定药材最佳采收期提供科学依据。

1 材料

1.1 仪器 AE 240型电子天平(上海精密科学仪器有限公司),HC-TP12B架盘药物天平(上海医疗器械八厂),Agilent 1260 高效液相色谱仪(美国Agilent公司),KQ-250B型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司),SHZ-Ⅲ型循环水真空泵(上海亚荣生化仪器厂),DZKW-4电子恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司),ZF-2C型暗箱式自动紫外分析仪(上海安灵电子仪器厂),硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂分厂),DFT150小型粉碎机(温州顶历医疗器械有限公司)。

1.2 材料与试剂 金丝桃苷对照品(批号:111521-201708,纯度94.3%,中国食品药品检定研究院),红旱莲6批,经长春中医药大学张景龙教授鉴定均为藤黄科金丝桃属植物黄海棠(Hypericum ascyron L.)的干燥地上部分,采集情况,见表1。

表1 试验用红旱莲样品采集情况

二氯甲烷(分析纯,北京化工厂),乙醇(分析纯,北京化工厂),甲醇(分析纯,北京化工厂),甲酸(分析纯,北京化工厂),磷酸(色谱纯,天津市光复精细化工研究所),乙腈(色谱纯,德国Merck公司),三氯化铝(分析纯,沈阳市试剂三厂),娃哈哈纯净水(天津娃哈哈饮料宏振有限公司),纯化水(实验室自制)。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

2.1.1 供试品溶液的制备 取本品粉末0.1 g,加甲醇10 mL,超声处理10 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。

2.1.2 对照药材溶液的制备 取红旱莲对照药材0.1 g,加甲醇10 mL,超声处理10 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,制成对照药材溶液。

2.1.3 对照品溶液的制备 取金丝桃苷对照品,加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液,作为对照品溶液。

2.1.4 薄层条件 照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液5~10 μL、对照药材溶液5 μL、对照品溶液3 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上使成条状,以二氯甲烷-甲醇-甲酸-水(10:6:1:2.5)下层为展开剂,薄层板置展开缸中预平衡20 min ,展开,取出,晾干,喷以5%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的条斑。

2.2 高效液相供试品溶液制备法的选择

2.2.1 紫外全波长扫描 取金丝桃苷对照品溶液,以60 %乙醇为空白溶液校正,照紫外-可见分光光度法,在200~800 nm波长范围内进行全波长扫描。结果表明,金丝桃苷在360 nm处有最大吸收,故确定以金丝桃苷的检测波长为360 nm。

2.2.2 流动相色谱条件考察 本试验设计参考文献[9-11]以及《中华人民共和国药典》[13]中以金丝桃苷为含测指标的方法,最终以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸为流动相B,进行梯度洗脱。

2.2.3 提取溶剂考察 对照品溶液的制备:取金丝桃苷对照品适量,精密称定,加60 %乙醇制成每1 mL含25 µg的溶液,即得。供试品溶液的制备:取同一批药材粉末(过3号筛)3份,取1 g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入60 %乙醇、甲醇、30 %乙醇50 mL,称定重量,加热回流1 h,放冷,再称定重量,用60 %乙醇、甲醇、30 %乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。 结果表明,60 %乙醇溶液作溶剂提取结果较高,所以选择60 %乙醇溶液作为提取溶剂。

2.2.4 提取方式考察 取同一批药材粉末(过3号筛)2份,每份约1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别精密加入60 %乙醇50 mL,密塞,称定重量,选择2种方式提取:100 ℃加热回流提取、超声提取(超声功率300 W,频率45 kHz)各1 h,补足重量,摇匀,滤过,即得。结果表明,加热回流提取效率较高,所以选择加热回流为提取方式。

2.2.5 提取溶剂体积考察 取同一批药材粉末(过3号筛)3份,每份约1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别精密加入60 %乙醇25、50、100 mL,密塞,称定重量,分别回流提取2 h,补足重量,摇匀,滤过,对提取溶剂体积进行考察。结果表明,提取溶剂为25 mL的提取率与50 mL相比提取率低,而50 mL与150 mL及100 mL无显著性差异,所以确定提取溶剂量为50 mL。

2.2.6 提取时间考察 取同一批药材粉末(过3号筛)3份,每份约1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别精密加入60 %乙醇50 mL密塞,称定重量,分别选择:分别回流提取0.5、1、2 h,补足重量,摇匀,滤过,对提取时间进行考察,结果以1 h为最佳提取时间。

2.2.7 供试品制备方法确立 对照品溶液的制备:取金丝桃苷对照品适量,精密称定,加60 %乙醇制成每1 mL含25 µg的溶液,即得。供试品溶液的制备:取本品,研细(过3号筛),取1 g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入60 %乙醇50 mL,称定重量,加热回流1 h,放冷,再称定重量,用60 %乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2.3 方法学验证

2.3.1 线性及范围 精密称取金丝桃苷对照品适量,加60 %乙醇溶液溶制成每1 mL含金丝桃苷140 μg的溶液,即得。分别精密吸取上述金丝桃苷对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、7.0、10.0 mL于25 mL量瓶中,用60 %乙醇定容,即得。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸为流动相B,进行梯度洗脱;检测波长为360 nm;理论板数按金丝桃苷峰计算应不低于3 000。

2.3.2 测定方法 精密吸取上述对照品溶液10 μL,分别注入液相色谱仪,依法测定,以对照品的浓度(μg/mL)为横坐标,色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线。以对照品的峰面积为纵坐标(Y),对照品的浓度(μg/mL)为横坐标(X)进行线性回归,得回归方程金丝桃苷Y = 21.919 X + 7.584 6,r = 0.999 7,线性范围5.476 9~54.769 4 µg/mL,结果表明,在5.4769~54.769 4 µg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.3.3 专属性试验 为进一步考察试验的合理性,按照供试品溶液制法制得不含样品的阴性对照溶液,依法测定,结果阴性对照液在与对照品峰相应的保留时间处无色谱峰,表明无干扰,专属性好。

2.3.4 重复性试验 取同一份红旱莲药材(HHL3),按正文拟定的方法制备供试品溶液6份,测定金丝桃苷的含量,结果金丝桃苷平均含量为0.13%,RSD为1.72%(n = 6);说明本方法的重复性良好。

2.3.5 溶液稳定性试验 同一份供试品溶液(HHL3),按正文拟定的色谱条件,每隔一定时间测定1次,共考察24 h,测定6次,结果6次测定金丝桃苷平均峰面积为539.025 9,RSD % 为 0.45 %(n = 6)。

2.3.6 准确度试验 精密量取同法测定已知含量的供试品(HHL3)6份,每份约1 g,精密称定,分别精密加入金丝桃苷对照品60 %乙醇溶液50 mL(浓度20.30 μg/mL),按供试品溶液制备方法制备,依法测定,计算回收率,平均回收率为96.75 %。

2.3.7 精密度试验 对同一份供试品溶液(HHL3),按正文拟定的色谱条件,连续测定6次,结果金丝桃苷的平均峰面积为537.498 8,RSD %为0.20%(n = 6)。

2.3.8 耐用性试验 不同柱温、不同流速、不同厂家色谱柱的考察:取样品溶液分别在两根不同厂家的C18色谱柱上,在柱温25、30、35 ℃,在流速0.8、0.9、1.0 mL/min,按正文的方法,进样,测定,结果见表2。

表2 耐用性试验结果(n = 2)

2.3.9 样品测定及限度确定 取6批不同产地的红旱莲药材,按“含量测定”项下方法操作,测定含量,见表3。

结果表明,金丝桃苷含量为0.053%~0.132%,平均值为0.092%,考虑药材采收时间不同,生长状态不同,所以目标产物含量差异较大。

表3 样品测定结果(n = 2)

3 小结

本研究依据中医药基本理论,选择以金丝桃苷为含测指标对红旱莲药材进行含量测定。通过对红旱莲药材功能主治的研究,发现红旱莲具有平肝、清肝火之效;其中作为主要药效物质基础之一的金丝桃苷具有明显的抗抑郁作用[14-15]。中医很早就将抑郁症的发病与肝脏联系在一起,其认为“世人因郁而致血病者多,凡郁皆肝病也,木中有火,郁甚则火不得舒,血不得藏而妄行”。这一观点为后世治疗肝郁之症奠定了理论基础[16-17]。因此,本研究选取金丝桃苷为红旱莲药材的质控指标。

对以上6批不同采收期的红旱莲药材含量测定结果进行分析,发现采收期为6、9月的2批红旱莲药材中金丝桃苷的含量相对较低,而7、8月份等4批红旱莲药材中含量测定指标金丝桃苷的含量较高,均在0.13%左右。该结论为确立红旱莲药材最佳采收期提供了科学依据。

猜你喜欢

桃苷金丝重量
《镶金丝祥龙壶》
重量
山楂叶金丝桃苷对高糖诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及机制
金丝草化学成分及其体外抗HBV 活性
金丝桃苷预处理对心肌缺血再灌注性心律失常大鼠心肌ATP酶活性和Cx43、Kir2.1表达的影响
金丝桃苷对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移以及侵袭的影响
HPLC法测定蒙药材文冠木中金丝桃苷的含量
海外侨领愿做“金丝带”“参与者”和“连心桥”
岁月如金丝,红颜不堪织
创新的重量