HPLC同时测定曲安奈德新霉素贴膏中醋酸曲安奈德和麝香草酚含量

（江门市药品检验所，广东 江门 529030）

曲安奈德新霉素贴膏是本地制药企业生产的外用橡胶膏剂，其组分为醋酸曲安奈德、麝香草酚、硫酸新霉素等。主要用于局限性神经性皮炎、慢性湿疹，也可用于小面积的银屑病。近年还发现它可有效地治疗结节性痒疹[1]、结节性疥疮[2-3]、神经性皮炎[4-5]、荨麻疹[6]等，临床应用广泛。现行质量标准为《国家药品标准》WS-10001-(HD-1079)-2002-2006[7]，目前该标准中无含量测定部分。为提高药品质量标准，本文建立了同时测定醋酸曲安奈德和麝香草酚含量的高效液相色谱法（HPLC），该方法简便、快速，准确，重现性好，可作为该制剂的质量控制的有效方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-20AT高效液相色谱仪，包括LC-20AT高压泵，SPD-M20A二极管阵列检测器，SIL-20A自动进样器（日本岛津）；XS205DU电子分析天平（Mettler Toledo）。

1.2 试药

麝香草酚对照品（中国食品药品检定研究院，含量99.9 %，批号100508-201603）；醋酸曲安奈德对照品（中国食品药品检定研究院，含量99.1 %，批号100125-201406）；曲安奈德新霉素贴膏（批号：160715，170107，170514）；甲醇（HPLC级，Honeywell，批号：R6AG1H），水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-SP色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱温：30℃，流动相：甲醇-水（57:43），流速：1.0 ml/min，检测波长：240 nm，进样量：20 μl。理论板数以麝香草酚与醋酸曲安奈德峰计均不低5000，两峰间的分离度大于5.0。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取醋酸曲安奈德对照品10 mg，置入25 ml量瓶，用85 %乙醇溶解并稀释至刻度，另精密称取麝香草酚对照品10 mg，置入50 ml量瓶，加85 %乙醇20 ml使溶解，再吸取先前制备的醋酸曲安奈德对照品溶液3 ml，混入50 ml量瓶中，用85 %乙醇稀释至刻度，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液6 ml，置入20 ml量瓶，用85 %乙醇稀释至刻度，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品2片（48 cm2），除去盖衬，剪成小块，置入具塞锥形瓶，加入石油醚（60～90 ℃）25 ml，振摇，使膏体溶解。溶液转移至烧杯中，容器及残渣用石油醚（60～90 ℃）洗涤3次（15 ml，10 ml，10 ml），洗涤液并入上述溶液中，再用无水乙醇洗涤容器及残渣3次（20 ml，15 ml，10 ml），将乙醇洗涤液边搅拌边缓缓加入上述合并的石油醚液中，静置30 min使沉淀完全，滤过。滤液置入分液漏斗，容器及沉淀用石油醚（60～90 ℃）-无水乙醇（4:3）混合液洗涤3次（10 ml，5 ml，5 ml），洗液并入分液漏斗，加水10 ml，振摇，静置至分层完全，分取乙醇液置入100 ml量瓶，石油醚层用85 %乙醇液洗涤3次（15 ml，10 ml，5 ml），合并乙醇液于上述100 ml量瓶中，用85 %乙醇稀释至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液取不含麝香草酚和醋酸曲安奈德的空白制剂样品，按2.2.2项方法制备溶液，作为阴性对照溶液。

2.3 系统适用性试

验分别取阴性对照溶液、对照品溶液、供试品溶液，按2.1项色谱条件进样测定，考察系统适用性。HPLC色谱图见图1，由图1可见，辅料及其他组分对测定组分无干扰。

图1 阴性对照溶液、对照品溶液和供试品溶液的HPLC图谱

2.4 线性试验

精密量取对照品储备液4.0，5.0，6.0，7.0，8.0 ml，分别置入20 ml量瓶，用85 %乙醇液稀释至刻度，摇匀。按2.1项色谱条件分别进样，测定峰面积。以峰面积为纵坐标（Y），分别以麝香草酚和醋酸曲安奈德的浓度（mg/ml）为横坐标（X），计算回归方程。结果表明：麝香草酚浓度与峰面积在0.0454～0.0907 mg/ml范围内呈良好的线性关系，回归方程为Y=2×106X+98.4，r=0.9995；醋酸曲安奈德在0.0050～0.0101 mg/ml范围内呈良好的线性关系，回归方程为Y=3×107X+17 286，r=0.9995。

2.5 精密度试验

取同一份供试品溶液，连续进样6次，记录峰面积，麝香草酚、醋酸曲安奈德峰面积的RSD分别为0.67 %，0.47 %，表明精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液，于室温下放置，分别在0，2，4，6，8，10，12 h测定峰面积，麝香草酚、醋酸曲安奈德峰面积的RSD分别为0.61 %，0.53 %。表明供试品溶液在室温条件下，12 h内稳定。

2.7 重复性试验

选择同一批号的曲安奈德新霉素贴膏，按2.2.2项方法平行制备6份供试品溶液，按2.1项色谱条件进样，记录峰面积。结果：麝香草酚含量的RSD为0.89 %（n=6）；醋酸曲安奈德含量的RSD为0.25 %（n=6）。表明该方法重复性良好。

表1 麝香草酚的加样回收率试验（n=6）

表2 醋酸曲安奈德的加样回收率试验（n=6）

2.8 回收率试验

取曲安奈德新霉素贴膏（批号：160715）1片（24 cm2），共6份，分别精密加入麝香草酚、醋酸曲安奈德混合对照溶液（含麝香草酚3.162 mg/ml，醋酸曲安奈德0.442 mg/ml）1 ml，置入具塞锥形瓶，按2.2.2项方法制备回收率试验用供试品，测定峰面积，计算得麝香草酚的平均回收率为101.11 %，RSD=0.42 %（n=6）；醋酸曲安奈德的平均回收率为100.08 %，RSD=0.47 %（n=6）。表明该方法的准确度较好，符合定量测定要求。结果见表1、表2。

2.9 样品含量测定

按2.2.2项方法测定3个批次的供试品，按外标法计算各组分的含量，结果见表3。

表3 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 流动相的选择

本实验分别考察了以不同比例的甲醇-水不同作为流动相的色谱图，结果表明，甲醇比例大于70 %，供试品溶液中辅料峰与麝香草酚峰、醋酸曲安奈德峰的分离度较差；甲醇比例小于50 %，醋酸曲安奈德的保留时间太长，且峰形不理想；选择甲醇-水比例为57:43，色谱峰之间的分离度均较好，且理论板数较高。

3.2 检测波长的选择

本实验对麝香草酚和醋酸曲安奈德进行紫外光谱扫描，发现麝香草酚、醋酸曲安奈德分别在275 nm、240 nm处有较大吸收，但处方中麝香草酚与醋酸曲安奈德的投药量之比为8:1，当两成分浓度比为8:1时，在240 nm波长处两峰高接近，故选择240 nm作为最佳检测波长。

3.3 提取溶剂的选择

供试品溶液的制备过程中，用石油醚（60～90 ℃）溶解膏体，再用乙醇沉淀后，所得混合溶液的提取是影响含量的关键步骤。曾尝试了不同比例的乙醇水溶液进行提取，发现85 %乙醇水溶液既能有效地将目标成份从石油醚中提取出来，又能和石油醚达到很好的分层效果，所以在设计实验时，尽量使乙醇水溶液中乙醇比例达85 %。为与供试品溶液保持一致，对照品溶液也采用85 %乙醇水溶液制备。

方法学考察表明本文建立的方法具有良好的线性、精密度、稳定性、准确度和重现性，可同时对曲安奈德新霉素贴膏中麝香草酚和醋酸曲安奈德的含量进行有效、简便、准确的定量，便于企业和监管部门对产品质量进行有效评价与监控。