酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果中的影响因素分析

史忠越

（吉林省通化市疾病预防控制中心，吉林 通化 134000）

感染乙型肝炎病毒（HBV）导致的一种可传染性肝炎称为乙型病毒性肝炎，简称乙肝。目前在临床上通常使用乙肝五项检查来判断患者病情的严重程度以及传染力的大小[1]。临床上将血清标志物HBsAg、HBeAb、HBeAg、HBcAb、HBsAb五项作为检查机体内乙肝病毒感染的标志物，即“乙肝五项”[2]。临床大多数实验室采用酶联免疫吸附法（ELISA）对乙肝五项进行检测，该方法具有特异性好以及灵敏度较高等优点[3]，但该方法的操作步骤较多，过程较复杂，所以存在较多的人为或外界因素对检测结果造成误差的可能。该研究将分析在用酶联免疫吸附法检测时，标本的不同血清状态和水浴时间的长短对乙肝五项检测结果的影响并进行分析，以此来提高临床检验质量。具体结果如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选取2016年11月至2017年12月在我中心进行乙型肝炎病毒检测的126例患者的血液标本作为研究对象，其中男性66例，年龄20～75岁，平均年龄（40.86±11.12）岁，女性60例，年龄19～72岁，平均年龄（37.58±8.03）岁。纳入标准：患者无相关肝炎病史。126个标本在检测前的一般情况无统计学差异（P＞0.05）。

1.2 方法： 在早晨空腹情况下分别取每位患者10 mL静脉血液，将这10 mL静脉血均分为5等份，每份2 mL，依次注入5支玻璃试管中，其中一份标本不做抗凝剂处理，一份标本做抗凝剂处理，另外3份标本分别放入37 ℃水浴箱中水浴加热20 min、40 min、60 min，将所有标本3000 r/min，离心10 min后待检，应用酶联免疫吸附法检测血清中的HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc五项标志物。乙肝五项酶联免疫吸附法检测诊断试剂盒来自北京普赞生物技术有限公司，型号为PZ-KJ-HQMM01，严格按照说明书进行规范操作[4-5]。

1.3 观察指标：观察并记录不同血清状态下乙肝五项阳性检测情况；不同水浴时间乙肝五项的阳性检测情况。

1.4 统计学分析： 该研究所有数据均采用SPSS 20.0软件进行统计学分析，计数资料采用χ2检验；计量资料用表示，采用t检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 标本血清状态不同时乙肝五项的检测情况：利用酶联免疫吸附法检测不同血清状态下的乙肝五项，抗凝剂处理过的标本阳性率为50.79%，未经抗凝剂处理过的标本阳性率为28.57%，经抗凝剂处理过的血液标本的阳性率明显高于未经抗凝剂处理过的血液标本，差异具有统计学意义（P＜0.05），说明使用抗凝剂导致假阳性率增高。见表1。

表1 不同血清状态乙肝五项检测情况

2.2 标本水浴时间不同时乙肝五项的检测情况：利用酶联免疫吸附法检测经不同水浴时间标本的乙肝五项，标本水浴加热20 min的阳性率为18.25%，水浴加热40 min的阳性率为7.94%，水浴60 min的阳性率为0.00%，说明血液标本水浴加热时间越长其阳性率越低。见表2。

表2 不同水浴时间乙肝五项检测情况

3 讨 论

乙型肝炎是一种常见的传染病，如果不及时进行治疗，会逐渐发展成为肝硬化甚至是肝癌[6]，严重影响患者的生命健康，带来严重后果。酶联免疫吸附法快速可靠，在我国临床上得到广泛应用，因而常用于乙肝五项的检测，但是检测过程中和标本本身存在较多影响因素，会使检测结果出现一定的误差。

该研究结果显示，经抗凝剂处理过的标本阳性率为50.79%，未经抗凝剂处理过的标本阳性率为28.57%，经抗凝剂处理过的血液标本阳性率明显高于未经抗凝剂处理过的血液标本，差异具有统计学意义（P＜0.05），说明使用抗凝剂导致假阳性率增高。导致这一结果的原因是在抗凝剂发挥作用时形成的结合物会促进或抑制酶联免疫吸附实验中HRP（辣根过氧化物酶）的活性，使显色出现异常结果产生误差。利用酶联免疫吸附法检测经过不同水浴时间处理的血液标本的乙肝五项其结果不同，水浴加热20 min的阳性率为18.25%，水浴加热40 min的阳性率为7.94%，水浴60 min的阳性率为0.00%，说明血液标本水浴加热时间越长其阳性率越低。其原因是水浴加热不同时间的离心血清标本中所含的纤维蛋白和过氧化物酶细胞成分不等量，它们可以黏附在96孔板反应孔中，然后非特异性的吸附酶标物最后导致假阳性的产生。除了以上两种情况会影响ELISA的检测结果外，在日常工作中笔者还总结了以下原因可以影响检测结果：①标本出现严重溶血。血红蛋白中的亚铁血红素有类似过氧化物酶的活性，可以黏附在ELISA反应孔中，若洗板时未将其洗掉则可催化底物显色使结果出现假阳性。②标本被细菌污染。一些细菌具有内源性酶或者分泌一些酶类物质能催化底物显色，从而使结果产生误差。③标本放置时间过久。抗体或抗原的免疫活性会随放置时间的延长而减弱，使结果出现假阴性。④标本中HBsAg或（和）HBeAg浓度过高时会产生钩状效应，使强阳性变为弱阳性或阴性。

为使酶联免疫吸附法的检测结果更加准确可以采取以下措施：在检测时使用新鲜血清标本；离心时，延长离心时间，适当增加离心速度；等血液标本自然凝固后再进行血清的分离，确保血液标本中的活性物质完全失活；在标本采集和处理时要尽量避免溶血的发生；在采集和操作过程中要避免细菌的污染；标本最好在20 min内进行检测，如果不能马上进行测定要及时分离血清然后在低温条件下进行保存；可对抗原浓度过高的标本进行适当稀释，然后再进行后续操作。

综上所述，该研究结果说明了标本的不同血清状态和水浴加热的时间长短都能影响酶联免疫吸附法检测乙肝五项的结果，然而在ELISA检测过程中还存在其他影响因素。在乙型肝炎的治疗中，乙肝五项又作为一个重要的指标，因此要求检验人员要做到认真负责，规范操作，减少失误，做好室内质控，确保结果准确可信，分析酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果中的影响因素，以此来提高临床检验质量。