乙酰氨基阿维菌素乳剂HPLC含量检测方法的建立

2018-10-10冒玉娟马佳宁

畜牧与饲料科学 2018年9期

冒玉娟，张乐，马佳宁

（江苏农牧科技职业学院，江苏泰州 225300）

乙酰氨基阿维菌素是阿维菌素的衍生物，是一种高效、低残留的抗线虫和抗外寄生虫药物，应用于奶牛和肉牛时无需休药期，市场前景非常广阔［1］。药代动力学研究发现，乙酰氨基阿维菌素可以经多种途径吸收，吸收后分布广泛，药效均较好［1-3］。目前，乙酰氨基阿维菌素商品化的制剂只有浇泼剂和注射剂2种。浇泼剂较适合于大型动物给药，注射剂虽然生物利用率较高，但给药不便，对动物的惊扰较大。基于上述原因，为了发掘乙酰氨基阿维菌素的应用潜力，笔者所在的实验室自制了乙酰氨基阿维菌素乳剂，并首次建立了针对该剂型的高效液相色谱法（HPLC）含量测定方法。该测定方法对乙酰氨基阿维菌素乳剂的开发提供了参考资料，对于该剂型的药效学和药代动力学研究都具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 主要仪器

电子分析天平（型号：BP110S，德国赛多利斯天平公司）；高效液相色谱仪（型号：UltiMate 3000，美国Dionex公司）。

1.2 主要试剂

乙酰氨基阿维菌素对照品（批号：20160701，华北制药集团爱诺有限公司）；0.5%乙酰氨基阿维菌素乳剂（批号分别为：20160702、20170101、20170703，江苏农牧科技职业学院动物药学院实验室自制）；乙腈（色谱纯，美国TEDIA公司）。

1.3 试验方法

1.3.1 色谱条件：色谱柱为 C18（150×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈—水（70∶30，V/V），检测波长为245 nm，流速为 1.0 mL/min，进样量为 20 μL，柱温为25℃。

1.3.2 溶液制备

1.3.2.1 对照品溶液的制备：精密称取乙酰氨基阿维菌素对照品50 mg于100 mL容量瓶中，用乙腈—水（70∶30）稀释定容至刻度线，摇匀，制成 500 μg/mL的对照品贮备液；随后精密量取上一步制备的对照品贮备液5 mL于100 mL容量瓶中，加乙腈—水（70∶30）稀释至刻度，摇匀并过滤，得到25 μg/mL的对照品溶液。

1.3.2.2 供试品溶液的制备：精密称取乙酰氨基阿维菌素乳剂适量（相当于乙酰氨基阿维菌素1 mg），置 100 mL 容量瓶中，加乙腈—水（70∶30）稀释至刻度，摇匀并过滤，得到10 μg/mL的供试品溶液。

1.3.2.3 阴性对照溶液的制备：按配方比例量取与供试品相当的空白乳剂（与乙酰胺基阿维菌乳剂相比只是不含乙酰氨基阿维菌素，其他成分相同）适量，按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

1.3.3 适应性试验：在1.3.1项试验检测色谱条件下，分别对乙酰氨基阿维菌素对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液进行测定，记录色谱图。

1.3.4 线性试验：精密量取对照品溶液 0.04、0.4、2.0、4.0、8.0 mL分别置于10 mL容量瓶中，加流动相配成 0.1、1、5、10 、20 μg/mL 的乙酰氨基阿维菌素溶液，按1.3.1项下试验色谱条件测定，以各浓度下的峰面积A对浓度C进行线性回归，计算回归方程和相关系数。

1.3.5 回收率试验：分别精密量取对照品溶液0.04、2.0、8.0 mL置于10 mL容量瓶中，添加配方剂量的空白乳剂基质，加流动相稀释成低、中、高3种浓度的对照品，每个浓度平行配制3份，按1.3.1项下试验色谱条件测定，计算回收率和相对标准偏差（RSD）。

1.3.6 精密度试验：取1.3.2.1项下制备的对照品溶液，精密量取适量，用流动相稀释成10 μg/mL的标准溶液，重复进样6次，分别测定。

1.3.7 检测限与定量限：将乙酰氨基阿维菌素对照品溶液用流动相多步稀释后逐一进样，按信噪比为3计算检测限，按信噪比为10计算定量限。

1.3.8 样品含量测定：精密量取3批次的乙酰氨基阿维菌素乳剂样品，每批次 3份，按1.3.2.2项下方法制成供试品溶液，在该试验色谱条件下进行含量测定。