高效液相色谱法测定酚麻美敏片中对氨基酚含量

杨大龙，严相平，冷柏榕

（江苏省药物研究所有限公司，江苏 南京 210009）

酚麻美敏片为复方制剂，含对乙酰氨基酚、盐酸伪麻黄碱、氢溴酸右美沙芬、马来酸氯苯那敏，常用于解热镇痛、消除鼻部充血、镇咳和抗过敏[1－9]。对氨基酚是对乙酰氨基酚的重要有关物质，毒性较大，毒性靶器官为肾脏、血液和中枢神经系统，可引起高铁血红蛋白血症和肾损伤，具有基因毒性，可致畸[10－11]。国内外药典均将对氨基酚作为含对乙酰氨基酚药物中的重要杂质进行控制，原料中限度仅为0.005%，制剂中限度为0.1%[12－15]。鉴于本品中对乙酰氨基酚的用量较大，有必要将对氨基酚作为指标杂质进行检查。本研究中建立了测定酚麻美敏片中对氨基酚的含量，专属性强，灵敏准确，为更好地控制药品质量提供了方法。

1 仪器与试药

仪器：LC－2010A型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；BT25型电子天平（十万分之一，赛多利斯公司）。

试药：酚麻美敏片（上海强生制药有限公司，批号为150708658）；对乙酰氨基酚对照品（批号为100018－201409，纯度为 99.9% ），对氨基酚对照品（批号为100802－201203，纯度为 100.0%），盐酸伪麻黄碱对照品（批号为171237－200807，纯度为99.9%），氢溴酸右美沙酚对照品（批号为 100201－201204，纯度为94.8%），马来酸氯苯那敏对照品（批号为100047－200606，纯度为98.0%），均购于中国食品药品检定研究院；甲醇（色谱纯，Honeywell），水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Cosmosil C8柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：磷酸盐缓冲液（磷酸氢二钠8.95 g，磷酸二氢钠3.9 g，加水溶解至1 000 mL，加10%四丁基氢氧化铵 12 mL）－甲醇（95 ∶5）；检测波长：245 nm；流速：0.6 mL/min；柱温：25 ℃；进样量：20 μL。

2.2 溶液制备

取对氨基酚对照品适量，精密称定，用甲醇－水（10∶90）溶解并稀释制成质量浓度为20 μg/mL的对照溶液。取酚麻美敏片细粉适量，精密称定（约相当于对乙酰氨基酚0.2 g），置10 mL容量瓶中，用甲醇－水（10∶90）溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。按酚麻美敏片中处方比例称取盐酸伪麻黄碱、氢溴酸右美沙酚、马来酸氯苯那敏3种成分，照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：按拟订色谱条件，分别取2.2项下3种溶液各20 μL注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，详见图1。

图1 高效液相色谱图

检测限确定：取对氨基酚对照品适量，精密称定，用甲醇－水（10∶90）溶解并稀释制成质量浓度为0.2 g/L的贮备液，逐级稀释，以信噪比为3∶1时测得的检测限为 0.2 ng。

线性关系考察：取检测限项下贮备液，稀释制系列质量浓度溶液，按拟订色谱条件测定，以进样质量浓度（C）对峰面积（A）进行回归，得回归方程A=5.97×104C－1.06 ×104，r=0.999 4（n=6）。结果表明，对氨基酚质量浓度在0.04～19.88 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取同一对照品溶液，按拟订色谱条件连续进样6次，记录色谱图。结果峰面积的RSD为1.06%（n=6），表明仪器精密度良好。

加样回收试验：取检测限项下对氨基酚贮备液稀释，制得质量浓度为0.02 g/L的溶液，作为对照品溶液。另取本品研细的粉末适量（约相当于对乙酰氨基酚0.2 g）共9份，置10 mL容量瓶中，再分别加入检测限项下对氨基酚贮备液 0.8，1.0，1.2 mL 各 3 份，以甲醇－水（10∶90）为流动相溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。分别取对照品溶液及供试品溶液20 μL，按拟订色谱条件注入液相色谱仪测定，计算回收率。结果见表1。

表1 对氨基酚加样回收试验结果（n=9）

2.4 样品含量测定

取本品细粉200 mg，精密称定，置10 mL容量瓶中，用甲醇 －水（10 ∶90）溶解，定容，取续滤液 20 μL 注入液相色谱仪，以外标法按峰面积计算对氨基酚的含量。结果批号分别为7K132，8A002，8B043的样品中对氨基酚相对百分含量分别为0.0001%，0.0001%，0.0002%。

3 讨论

3.1 限量确定

参考2015年版《中国药典（二部）》[12]对乙酰氨基酚各剂型中对氨基酚的限量规定，本研究中确定的限量为：对氨基酚不得超过对乙酰氨基酚标示量的0.1%。

3.2 色谱条件选择

2015年版《中国药典（二部）》中对乙酰氨基酚中对氨基酚含量测定的色谱条件为以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠8.95 g，磷酸二氢钠3.9 g，加水溶解至1 000 mL，加10% 四丁基氢氧化铵溶液12 mL）－甲醇（90∶10）为流动相，检测波长为245 nm，柱温为40℃。由于酚麻美敏片成分复杂，在该色谱条件下，对氨基酚出峰较快，难与氢溴酸右美沙酚分离。故在药典条件基础上，对色谱条件进行了优化。

有机相比例及pH选择：甲醇比例为10%时，对氨基酚与马来酸氯苯那敏分离不佳，降低甲醇至5%，两者可达到基线分离；水相pH增高，对氨基酚的保留时间增加，与马来酸氯苯那敏分离度增加，考虑到色谱柱的耐受性，选择水相的pH为8.0。

离子对试剂浓度影响：通过比较水相中每1 000 mL磷酸盐缓冲中分别加入6，12，24 mL 10%四丁基氢氧化铵的流动相下的色谱图，发现离子试剂在6～24 mL范围内，对氨基酚的色谱行为几乎没有影响，故不改变离子对试剂的浓度。

柱温确定：药典采用柱温为40℃，试验发现降低柱温会增加对氨基酚在色谱柱中的保留，与马来酸氯苯那敏分离度增加。经试验，在25℃时分离良好，故采用室温。